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1、1. 试剂的配制：（1）10%福尔马林液量取40%的甲醛溶液25ml,将其溶于75ml双蒸水中，混合均匀后室温保存。（2）不同浓度的乙醇溶液70%、80%、90%、100%乙醇，95%以下的各级乙醇用95%勺乙醇加蒸馏水稀释而成。例如,配制70%勺乙醇，就量取70ml95汇醇然后加蒸馏水至95ml即成。（3）伊红溶液称取伊红10g,将其加入到1000ml的双蒸水中，用玻璃棒搅起泡沫后过滤，在过滤好勺伊红溶液中加入10滴冰醋酸，室温保存备用。（4）苏木精溶液A液：称取苏木精1g,加入无水乙醇10ml，充分混匀后备用。B液：称取20g硫酸铝钾，将其溶于200ml蒸馏水,混合均匀后备用。将B液加热至
2、完全溶解，稍冷后将A液混入到B液中加热，待稍冷却时加入0.5g氧化汞，再继续加热1min,染液变成紫色，注意在加氧化汞时应该少量逐渐加入，要防止染液溅出。完全冷却后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜后过滤。在过滤后勺液体内按每96ml中加4ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期为1-2个月。此染液在加醋酸后，对核染色具有选择性，所以很适合于脱落细胞勺核染色，由于染液内已加有氧化剂，故不可长期储存。（5）组织切片专用盐酸酒精在100ml的70%S醇内加入0.5-1ml的浓盐酸，室温保存备用。2. 实验步骤（1）取材不同需求取材方式有所不同，本例以小鼠结肠为例，截取新鲜结肠1cm左右。（
3、2）固定将取好的结肠组织块放入10%勺福尔马林液中，固定时间为24h。在投入固定液30min后要将组织块取出进行修整。即用锋利的手术刀片将不规则的组织块切去。修整好的组织块再继续投入到固定液内固定。（3）冲洗固定后的组织块用流水冲洗，以除去组织内残留的固定液。将固定好的组织块分别用纱布包好，流水冲洗12h。（4）脱水组织块经流水充分冲洗后，浸泡在70%勺乙醇中1h，脱水流程如下：70%勺乙醇浸泡1h80%勺乙醇浸泡1h90%勺乙醇浸泡1h95%勺乙醇（I）浸泡1h95%勺乙醇（II）1h100%勺乙醇（I）30min100%勺乙醇（II）30min。透明二甲苯（l）10min-二甲苯（II）至
4、油状透明状态。（6）浸蜡先将装有熔点56-58E石蜡的烧杯放在熔蜡箱内熔化，并将熔蜡箱的温度调至保持恒定，然后将透明了的材料依次放入蜡杯（I）、蜡杯（II）、蜡杯（III）浸蜡2h。（7）包埋将熔点为56-58E的石蜡熔凝直至无杂质，熔化后加适量到硬纸包埋框中，用无齿镊子取浸蜡后的组织块放入包埋框中，置好方向，室温下冷却并做好标记。带蜡块完全凝固后，取出蜡块修整后备用。（8）切片修整好的蜡块先固定在小木块上，然后再固定在切，片机上，并调整蜡块与切片刀的位置，使刀刃与蜡块表面呈5角，调整切片机上的厚度为8卩切片时左手执毛笔，右手转切片机转轮，修出组织块后，连续切片，可以单张，也可以连续以形成蜡带
5、。切出所需切片时，用毛笔轻轻托起切片，并用眼科镊子夹起切片的一角，正面向上轻轻平铺于放置在45-50C恒温水浴箱的烧杯中水面上，动作要轻快，石蜡切片漂浮在温水中受热后及在表面张力的作用会自然平整地展开，必要时可用镊子轻轻拨开。待切片完全伸展后，用载玻片将切片捞出，并及时编号放在37C恒温烘箱中烤片过夜。（9）脱蜡烤片过夜的载玻片放入染色架中，进行如下脱蜡流程：二甲苯（I）浸泡10min二甲苯（II）浸泡10min（10）复水100%的乙醇（I）浸泡5min100%勺乙醇（II）浸泡5min95%勺乙醇（I）浸泡5min95%勺乙醇（II）浸泡5min80%勺乙醇浸泡3min70%勺乙醇浸泡2m
6、in蒸馏水冲洗1min。（11）苏木精-伊红染色标本水洗后，进行H-E染色，流程如下：浸入苏木精染液中染色10-30min自来水短暂冲洗盐酸酒精分化10s自来水洗15min蒸馏水洗2min70%勺乙醇浸泡2min80%勺乙醇浸泡2min90%勺乙醇浸泡2min0.5%的伊红染液1min95%勺乙醇（I）浸泡5min95%勺乙醇（II）浸泡5min100%勺乙醇（I）浸泡5min100%勺乙醇（II）浸泡5min二甲苯（I）浸泡5min二甲苯（II）浸泡5min。（12）封片将中性树脂用适量二甲苯稀释后，滴在载玻片勺合适位置上，取载玻片从一段逐步盖下去，以免产生气泡。封片后，室温晾干，镜检备用。并拍照保3. 结肠组织切片结果观察保存组小鼠结肠组织切片在显微镜下观察，存结果。
石蜡切片流程
