TLC展开剂选择及显色剂的总结

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1、TLC展开剂选择及显色剂的总结选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到人的顺序排列人概为：石 油迷& It;己烷苯乙艇THF乙酸乙酯丙酮乙醇& It;甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很 好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极 性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：Petroleumetliei/Ethylacetate.petroleumether/Acetone.PetioleumetheivEther,Petroleumether/CH2C12, ethylacetate/MeOH.CHCB/etlivlacetateJ*J展

2、开剂的比例要靠尝试一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先 尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效呆好的展开剂。展开剂的选择条件：对的所需成分有良好的溶解性；可使成分间分开；待测组分 的Rf在0.20.8之间，定量测定在0.30.5之间；不与待测组分或吸附剂发生化学反应; 沸点适中，黏度较小；展开后组分斑点圆且集中：混合溶剂最好用新鲜配制。一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇, 乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、菇类等的分 离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸

3、乙酯等来调节，适 合于蔥龊、香豆素，以及一些极性较人的木脂素和菇类的分离：强极性溶剂，由正丁醇和水 组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很人的生物碱类化合物的分离。很多时候，展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。我们在实验 中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石 油瞇一EtOAcHCOOH （5.5： 3.5： 0.1）混合溶剂。一般把两种溶剂混合时，采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的 迹象，再调整比例（或者加入第三种溶剂），达到最佳效果:如果没有分开的迹象（斑点较“拖”）, 最好是换溶剂。对于在

4、硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水, 毗唳等碱性物质来中和硅胶的酸性。（选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除 去，氨水无疑是较好的选择。）分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂 家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的 硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有 明显的影响。温度，湿度对分离效呆影响也很明显，在实验中我们发现有时同一展开条件， 上下午的Rf截然不同展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑在进行薄层层析时，首先应该知道未知

5、化学成分的类型，其极性的人致归属，从提取液 或从色谱柱的流动相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性不同人致分，然后细 分，对于分离未知的化学物质，展开剂的选择也是一个摸索的过程，不应该仅仅从展开剂考 虑，多因素综合衡量！溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极人。在柱层析时所用的溶剂（单一剂 或混合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂。洗脱剂的选择，须根据被 分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被 分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选 用极性溶剂为洗脫剂。如杲对某一极性物质用吸附性较

6、弱的吸附剂（如以硅浹土或滑石粉代 替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加 入。溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附。然后渐增犬溶剂的 极性。这种极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脫”，使吸附在层析柱上的各 个成分逐个被洗脱。如果极性增人过诀（梯度太人），就不能获得满意的分离。溶剂的洗脫 能力，有时可以用溶剂的介电常数（）来表示。介电常数高，洗脱能力就人。以上的洗脱 顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶、氧化铝。对非极性吸附剂，如活性炭，则正好与上述顺 序相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用

7、，较在脂溶性溶剂中为强。3.被分离物质的性质：被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要 素，彼此紧密相连。在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直接与被分 离物质的结构与性质有关。对极性吸附剂而言，成分的极性人，吸附住强。当然，中草药成分的整体分子观是重要的，例如极性基团的数目愈多，被吸附的住能就 会更人些，在同系物中碳原子数目少些，被吸附也会强些。总之，只要两个成分在结构上存 在差别，就有可能分离，关键在于条件的选择。要根据被分离物质的性质，吸附剂的吸附强 度，与溶剂的性质这三者的相互关系来考虑。首先要考虑被分离物质的极性。如被分离物质 极性很小为不含氧的祜烯，或

8、虽含氧但非极性基团，则需选用吸附性较强的吸附剂，并用弱 极性溶剂如石油瞇或苯进行洗脱。但多数中药成分的极性较人，则需要选择吸附性能较弱的 吸附剂（一般IIIIV级）。采用的洗脱剂极性应由小到人按某一梯度递增，或可应用薄层层 析以判断被分离物在某种溶剂系统中的分离情况。此外，能否获得满意的分离，还与选择的 溶剂梯度有很大关系。现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系。如 有多组分的混合物，象植物油脂系由烷烧、烯坯、禹醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份。 当以硅胶为吸附剂时，使油脂被吸附后选用一系列混合溶剂进行洗脱，油脂中各单一成分即 可按其极性大小的不同依次被洗脱。又如对于C-27

9、當体皂试元类成分，能因其分字中疑基数目的多少而获得分离：将混合 皂貳元溶于含有5%氯仿的苯中，加于氧化铝的吸附柱上，采用以下的溶剂进行梯度洗脱。 如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代氧化铝，由于硅酸镁的吸附性较弱，洗脱剂的极牲需相应 降低，亦即采用苯或含5%氯仿的苯，即可将一元疑基皂貳元从吸附剂上洗脱下来。这一例 子说明，同样的中草药成分在不同的吸附剂中层析时，需用不同的溶剂才能达到相同的分离 效果，从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成分三者的相互关系。（-）簿层层析：薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸 附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析

10、基本 相似。1. 薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较。2. 吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同。主要区别在于薄 层层析要求吸附剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250 g,并要求粒度均匀。用于薄层 层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高，以IIII【级为宜。而展开距离则随薄层的粒度 粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩短，一般不超过10厘米，否则可引起色谱扩散 影响分离效果。3. 展开剂的选择：薄层层析，当吸附剂活度为一定值时（如I【或III级），对多组分的样 品能否获得满意的分离，决定于展开剂的选择。中草药化学成分在脂溶性成分中，犬致可按 其

11、极性不同而分为无极性、弱极性、中极性与强极性。但在实际工作中，显色剂： 碘： 适用于不饱和或者芳香族化合物配制方法：在100ml广I I瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶高镭酸钾：适用于含还原性基团化合物，比如疑基，氨基，醛配制方法：1.5gKMn04+10gK2C03 + 1.25mL10%NaOH+200mL 水.使用期 3 个月 磷钳酸（PX1A）：广谱配制方法：lOgof磷钳酸+100 niL乙醇紫外灯：适用于含共轨基团的化合物，芳香化合物硫酸鋪：生物碱配制方法：10%硫酸饰（IV）+15%硫酸的水溶液氯化铁：苯酚类化合物配制方法：l%FeC13 +

12、50%乙醇水溶液.桑色素(疑基黄酮)：广谱，有荧光活性配制方法：0.1%桑色素+甲醇苗三酮：适用于氨基酸配制方法：1.5g苗三酮+ 100111L of正丁醇+3.0mL醋酸二硝基苯雎(DNP)：适用于醛和酮配制方法：12g二硝基苯月井+60mL浓硫酸+ 80niL水+ 200niL乙醇香草醛(香兰素)广谱配制方法：15g香草醛+ 250111L乙醇+2.5mL浓硫酸漠甲酚绿：适用于竣酸，pKa=5.0配制方法：在100ml乙醇中，加入0.04g澳甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液，刚 好出现蓝色即至。钳酸饰：广谱配制方法：235 niL水+ 12 g钳酸氨+ 0.5 g钳酸饰氨+ 15 mL浓硫酸茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1：广谱配制方法：135乙醇+5111L浓硫酸+1.5mLof冰醋酸+3.7mL茴香醛，剧烈搅拌，使混合 均匀.茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2：适用于菇烯，檢树脑(cmeoles), withanolides,出油柑碱(acionycine)配制方法：茴香醛:HC1O4:丙酮冰(1:10:20:80)经常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极 性予以调整。