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1、灰树花工厂化栽培和开发研究技术总结,A前言B材料与方法C结果与讨论,前言,灰树花（Crifolafrondosa）是经常发生于我国东北地区、高寒地带的一种优质食用菌，有独特的营养和风味。灰树花子实体形似盛开的莲花，扇形菌盖重重叠，又名舞茸、粟子蘑、莲花菇。鲜嫩的子实体香味浓郁，味道鲜美，口感极佳，其营养丰富，富含灰树花多糖、维生素、多种必需氨基酸和微量元素，经常食用可预防和治疗肝脏系统及胃肠道疾病。同时在日本从子实体提取的灰树花多糖用作抗癌药品。,所以灰树花是一种具有很高开发价值的珍稀食药用菌。日本料理盛行此菇。灰树花野生量极少，几乎不能形成商品。1974年日本进行人工栽培获得成功，80年代研
2、究成功了工厂化周年性栽培。我国最早于1983年由浙江庆元引种栽培，目前仍保留在依靠自然条件栽培，一年一次的手工操作家庭作坊式生产水平。由于受气温影响，产量不稳定，杂菌污染，严重导致成品率低、品质差，无法同国际的同行业进行竞争。,目前国内尚无工厂化栽培灰树花的先例。本项目旨在开发研究灰树花在食用菌新品种，通过引种和DNA种性鉴定及生物育种技术，选育出适于工厂化栽培的灰树花品种，研究制订安全、卫生的标准化工厂化生产工艺。通过对鲜菇保鲜技术的研究、延长鲜菇的贮藏时间，保证产品的质量。同时进行灰树花在品种生产示新，实现新时期农民增收。,材料与方法,一、供试灰树花品种资源二、灰树花品种DNA提取及RAP
3、D反应三、培养料配方四、栽培容器五、灰树花菇生育条件六、原材料、产品的重金属和农药残留测定,供试灰树花品种资源,供试杏鲍菇品种资源分别从日本、韩国、美国、台湾、福建、等国家及地区收集、引进，共11个品种，编号为“灰1号”至“灰11号”。保藏培养基：马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，琼脂19-20克，水1000毫升，磷酸二氢钾或磷酸氢二钾2克。,灰树花品种DNA提取及RAPD反应,选择“灰2号”、“灰3号”、“灰4号”、“灰9号”、“灰14号”菌种，编号依次为1,2,3,4,5。菌株经PDY液体培养后，过滤收集各个菌株的菌丝体，采用CTAB方法提取各菌株的DNA，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，稀释后
4、进行RAPD。,DNAmarker选用上海鼎国生物技术发展中心DGL2000，共采用32个上海生工生物技术公司的RAPD随机引物进行RAPD扩增，其中共有21个引物有扩增条带。以其中的18个随机扩增引物扩增的数据统计片段的有无，用NT-SYS程序中的Simqual软件算出菌株间遗传相关性；用平均连锁聚类分析方法(UnweightedPairGroupMethodArithmeticClusteringUPGMA)进行聚类分析，构建树状图谱。,培养料配方试验,一、木屑32.5%;棉籽壳32.5%;麸皮15%;玉米粉10%;泥土10%二、木屑37.5%棉籽壳37.5%;麸皮15%;玉米粉10%;保
5、水剂适量三、玉米芯25%;棉籽壳25%;木屑25%;麸皮15%;玉米粉10%;保水剂适量,栽培容器试验,大袋：4132cm中袋：4124cm小袋：4817cm大瓶：1100毫升小瓶：850毫升,灰树花菇生育条件试验培养条件生育条件,温度：22-23C湿度：70-75%CO2：2500ppm光照：无培养时间：3035天,温度：22-23C湿度：85-90%CO2：1500ppm光照：300LUX左右培养时间：1520天,原材料、产品的重金属和农药残留测定结果,随机抽取灰树花栽培的主要原材料玉米芯、棉籽壳、米糠、木屑送上海市产品质量监督检验所测重金属铅、汞、砷及农药残留六六六、滴滴涕含量，同时跟踪
6、检测用上述原料栽培的灰树花产品的重金属铅、汞、砷及农药残留六六六、滴滴涕含量。,结果与分析,一、灰树花品种资源的收集、选育二、灰树花工厂化栽培生产培养料配方研究三、灰树花工厂化栽培容器研究四、灰树花生长发育过程中所需的生活条件五、灰树花工厂化生产病虫害防治技术研究六、灰树花产品安全卫生质量及保鲜技术七、灰树花品种生产示范,灰树花品种资源的收集、选育,表1：不同灰树花品种栽培比较,图一：随机引物7扩增的灰树花不同品种的DNA指纹图谱,从左到右依次DNAmarker，菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5分子量标记依次为2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100
7、bp,图二：随机引物8扩增的灰树花不同品种的DNA指纹图谱,从左到右依次DNAmarker，菌株5,菌株4,菌株3,菌株2,菌株1分子量标记依次为2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp,图三：随机引物42扩增的灰树花不同品种的DNA指纹图谱,从左到右依次DNAmarker，菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5分子量标记依次为2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp,图四：不同灰树花品种DNA遗传相关性聚类树状图谱,灰树花工厂化栽培生产培养料配方研究,表2：不同培养料配方的灰树花产质量,灰树花工厂化栽培容器研
8、究,表3:不同大小的聚丙烯塑袋栽培灰树花的产量,表4:不同大小的聚丙烯塑瓶栽培灰树花的产量,灰树花生长发育过程中所需的生活条件,温度：菌丝体生长：23+1；原基形成子实体生长（开片）1617湿度：菌丝体生长：培养料含水量63+2%；空气相对湿度70%左右。原基形成：空气相对湿度8085%；子实体生长（开片）：空气相对湿度8590%CO2浓度：菌丝体生长3000ppm以下；原基形成子实体生长（开片）1000ppm以下，原基形成：子实体生长（开片）：1000ppm以内。CO2浓度过高，开片不良，易造成鹿角状畸形子实体。光照：菌丝体生长不需要光照；菌丝体长满容器后50100勒克司，弱光诱导7天左右。
9、原基形成300勒克司左右；子实体生长（开片）5001000勒克司。光照不足，光照色泽淡，产量低。,灰树花工厂化生产病虫害防治技术研究,通过采用脉动式真空高压蒸汽灭菌技术，彻底杀灭培养基质中的病原菌，大大改善了固体培养料灭菌的效果使菌种生产成品率大大提高。采用低温等离子空气灭菌技术及空气层流净化技术，在生产工序中主要的场所，科学合理放置5台等离子动态空气洁净器，不仅能直接达到灭菌除尘的目的，并能去除空气中有害、有毒气体和异物，在机器开启的情况下，能够进行正常作业，无须采用熏蒸和其他化学消毒方法。不仅保证了接种的成品率，而且保障操作人员安全卫生。,因为灰树花的工厂化生产在国内尚无先例，我们经过反复
10、试验证明：在灰树花黑色蜂窝状原基形成之前，是感染空气中细菌和绿霉菌污染的关键时间，为此我们利用灰树花生育阶段的生长优势并给以最适应灰树花生长发育的条件，在灰树花菌丝体生长阶段完成之后，适时进行弱诱导，使之菌丝垫形成特色并充分扭结成黑色蜂窝状原基后，打开瓶盖给予充足的空气。栽培过程中,通过调节栽培室空气湿度控制工艺，有效地降低了10%左右的杂菌侵染率。,灰树花产品安全卫生质量及保鲜技术,表5主要材料及产品检验结果,灰树花品种生产示范,选择上海郊区的南汇汇仑食用菌公司作为生产示范基地，分别于2003年和2004年进行了袋栽灰树花工厂化生产技术示范。生产示范试验基地菇房设施采用了彩钢板夹芯保温菇房，并配备了温度、湿度、光照、通气自动控制系统，超声波加湿器，制冷及加热系统。栽培容器采用透气聚丙烯塑料袋。进行了二次生产示范试验。试验选用“灰3号”菌种，配方2，生产2760袋。在适宜灰树花生长的温度、湿度、光照、通气条件下培养、出菇，示范试验结果灰树花原基分化率为90%，平均每袋产量达到250克，达到了预期目标。,
灰树花工厂化栽培和开发研究技术总结
