第四章`食用菌菌种生产第一节`菌种生产流程和设备

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1、一、生产流程一、生产流程 种菇（种木）选择种菇（种木）选择 种菇（种木）处理，孢子种菇（种木）处理，孢子收集收集 斜面培养基制备斜面培养基制备 分离培养分离培养 母种培养母种培养 原种培养基制备原种培养基制备 原种培养原种培养 栽培种培养基制备栽培种培养基制备 栽培种培养栽培种培养1 接种设备：接种设备：o 用于分离和扩大各级菌种的专业设备用于分离和扩大各级菌种的专业设备o 包括接种室、接种箱、超净工作台、包括接种室、接种箱、超净工作台、接种工接种工具具要求：内外两间，面积适宜，容易搞清洁，能要求：内外两间，面积适宜，容易搞清洁，能进行灭菌进行灭菌内间为接种工作间：内间为接种工作间：56平方米

2、，门窗紧密，尽平方米，门窗紧密，尽量减少灰尘积累，内置工作台量减少灰尘积累，内置工作台外间为缓冲间：外间为缓冲间：23平方米，用于进接种间前换平方米，用于进接种间前换衣、帽、鞋，同时为内间提供与外界相隔环境衣、帽、鞋，同时为内间提供与外界相隔环境内外间均为拉门，位置相互错开内外间均为拉门，位置相互错开体积应尽量小，利于彻底灭菌体积应尽量小，利于彻底灭菌装过滤空气的通风设施装过滤空气的通风设施内外间墙、地板、天花板、室内用具应尽量光内外间墙、地板、天花板、室内用具应尽量光滑易擦洗滑易擦洗缩小的接种室缩小的接种室双人、单人操作型双人、单人操作型易消毒、规模受限制易消毒、规模受限制局部净化设备局部净

3、化设备o 空气过滤除菌空气过滤除菌无论接种箱还是净化工作台，均应放在较干净、无论接种箱还是净化工作台，均应放在较干净、空气中尘埃少的环境中，最好置于接种室内空气中尘埃少的环境中，最好置于接种室内接种针接种针接种环接种环接种刀接种刀接种铲接种铲镊子镊子接种器等接种器等放置接种后各级菌种，并提供适宜温度和通气放置接种后各级菌种，并提供适宜温度和通气条件，使菌丝生长良好的专用设备条件，使菌丝生长良好的专用设备培养架：以操作方便为宜培养架：以操作方便为宜,宽宽0.71.2米，层间米，层间40cm调温：电炉、红外线、暖气管、门窗、抽风机调温：电炉、红外线、暖气管、门窗、抽风机测温：干湿球温度计测温：干湿

4、球温度计 照明：避免使用蓝光照明：避免使用蓝光 灭菌：紫外灯灭菌：紫外灯根据需要使温度恒定在一定范围内根据需要使温度恒定在一定范围内,一般用于培一般用于培养斜面试管和少部分原种养斜面试管和少部分原种木材切片机木材切片机木片粉碎机木片粉碎机搅拌机搅拌机装瓶装袋机装瓶装袋机灭菌：将环境中的所有微生物杀死。灭菌：将环境中的所有微生物杀死。o 一般采用热力灭菌设备一般采用热力灭菌设备干热灭菌设备干热灭菌设备o 原理原理:利用干燥热空气进行灭菌利用干燥热空气进行灭菌灼烧灭菌：酒精灯灼烧灭菌：酒精灯电热恒温干燥箱：电热恒温干燥箱：160 12小时小时o 适宜玻璃器皿、金属用具灭菌适宜玻璃器皿、金属用具灭菌

5、利用潮湿热空气进行灭菌利用潮湿热空气进行灭菌高压灭菌高压灭菌o 手提式高压灭菌锅：手提式高压灭菌锅：9瓶瓶o 立式高压灭菌锅：立式高压灭菌锅：45瓶瓶o 卧室园形高压灭菌锅卧室园形高压灭菌锅 270瓶瓶o 卧式方形高压灭菌锅（消毒柜）卧式方形高压灭菌锅（消毒柜）500瓶瓶 121 20-60分钟分钟常压灭菌：常压灭菌：o 砖石砖石o 油桶油桶 o 蒸笼等蒸笼等 105 68小时小时容器容器o 750ml 无色、浅色菌种瓶无色、浅色菌种瓶o 聚丙烯菌种袋聚丙烯菌种袋消毒药品消毒药品o 甲醛甲醛o 75%洒精洒精o 高锰酸钾高锰酸钾o 漂白粉、来苏儿漂白粉、来苏儿交通方便、水电充足交通方便、水电充

6、足地势干燥、环境干净地势干燥、环境干净空气清新、空气清新、30米内没有畜禽圈舍、饲料仓库、米内没有畜禽圈舍、饲料仓库、排废工厂排废工厂有堆放、摊晒原料地有堆放、摊晒原料地帶開關插座帶開關插座帶開關插座紫外光管紫外光管紫外光管照明光管照明光管照明光管照明光管照明光管照明光管帶開關插座帶開關插座空調及抽气机帶開關插座空調獨立電源路燈照明光管照明光管照明光管照明光管紫外光管紫外光管帶開關插座路燈開關一、母种培养基配制一、母种培养基配制1 配制原则配制原则o 营养成分含量与比例适合食用菌生长发育营养成分含量与比例适合食用菌生长发育o pH、EV适宜适宜o 有一定有一定pH缓冲能力缓冲能力PDA（马铃薯

7、葡萄糖琼脂培养基）（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）适合各种食用菌适合各种食用菌马铃薯马铃薯 200gG 20g琼脂琼脂(Agar)20g 水水 1000mlpH自然自然适宜保藏菌种适宜保藏菌种MgSO4 0.5g K2HPO4 1g G 0.46g 蛋白胨蛋白胨 20gAgar 15g 水水 1000ml特别适合草菇菌丝生长特别适合草菇菌丝生长苹果苹果 100g（压碎取汁）（压碎取汁）蔗糖蔗糖 20g琼脂琼脂 2g 水水 1000ml对平菇生长有利对平菇生长有利o 高梁粉高梁粉 30g o 琼脂琼脂 10go 水水 1000ml宜香菇、平菇、金针菇、木耳宜香菇、平菇、金针菇、木耳酱油酱油 50ml洋

8、葱煎汁洋葱煎汁 100ml (500g洋葱洋葱+水水500ml煮沸煮沸30分钟后补足水分钟后补足水)取滤液取滤液琼脂琼脂 20g水水 850ml称量称量调配调配o 马铃薯、洋葱、稻草等，水煮马铃薯、洋葱、稻草等，水煮30分，双层纱分，双层纱布过滤布过滤o 淀粉、易溶物质，加少量水，调成糊状（避淀粉、易溶物质，加少量水，调成糊状（避免成团）免成团）o 难溶物质，加水、加热、搅拌难溶物质，加水、加热、搅拌o 按食用菌所需按食用菌所需o 试纸测定试纸测定o 用用IN NaOH or IN HcL预湿预湿加入培养基加入培养基加热搅溶加热搅溶双层纱布过滤双层纱布过滤1/5试管（试管（5ml）严禁沾试管口

9、、上壁严禁沾试管口、上壁棉塞过滤空气、防污染棉塞过滤空气、防污染松紧适宜松紧适宜内内2/3 外外1/3牛皮纸包扎牛皮纸包扎高压蒸汽灭菌锅进行高压蒸汽灭菌锅进行0.05mPa 放汽阀打开放汽阀打开 0 00.05Pma 放汽阀打开放汽阀打开 00.15mPa 维持维持1520分分 0介绍组织分离法介绍组织分离法种菇选择：种菇选择：o 个体健壮个体健壮o 菇形典形美观菇形典形美观o 无病虫害无病虫害o 适度成熟适度成熟o 种菇处理：种菇处理：75%酒精擦表面（草菇）酒精擦表面（草菇）菌柄与菌盖交界处取组织块菌柄与菌盖交界处取组织块木耳经无菌水冲洗，切成小块放入培养基木耳经无菌水冲洗，切成小块放入培

10、养基纯化培养纯化培养o 将菌丝块移入将菌丝块移入PDA平板培养平板培养o若纯：四周辐射状生长，外缘整齐一致若纯：四周辐射状生长，外缘整齐一致o否则：边缘参差不齐，色素分布不均匀否则：边缘参差不齐，色素分布不均匀o将较一致的菌丝的前端，切割将较一致的菌丝的前端，切割新培养皿新培养皿大部分大部分2528草菇草菇 30一、配方与制配一、配方与制配1 木屑、竹屑培养基木屑、竹屑培养基木屑（阔叶树）木屑（阔叶树）78%麸皮或米糠麸皮或米糠 20%蔗糖蔗糖 1%石膏粉石膏粉 1%木生类菌：香菇、平菇、木耳、金针、猴头、木生类菌：香菇、平菇、木耳、金针、猴头、灵芝灵芝称料称料糖溶于水中糖溶于水中混料混料加入

11、糖水加入糖水6065%pH配方配方棉籽壳棉籽壳 78%麸皮麸皮 20%蔗糖蔗糖 1%石膏粉石膏粉 1%金针、平菇、风尾菇、草菇、银耳、木耳、猴金针、平菇、风尾菇、草菇、银耳、木耳、猴头头甘蔗渣甘蔗渣 75%麸皮或米糠麸皮或米糠 24%石膏粉石膏粉 1%平菇、风尾菇、金针、毛木耳平菇、风尾菇、金针、毛木耳称料称料棉籽壳或甘蔗渣堆棉籽壳或甘蔗渣堆1224小时（均匀吸水）小时（均匀吸水）辅料辅料6065%pH以小麦、高梁、玉米等为主料制作的培养为谷以小麦、高梁、玉米等为主料制作的培养为谷粒培养基粒培养基小麦小麦 98%碳酸钙碳酸钙 2%银耳外、其它木生型、粪草型均适合银耳外、其它木生型、粪草型均适合

12、稻谷稻谷 50%棉籽壳棉籽壳 40%麸皮麸皮 8%石膏粉石膏粉 2%平菇、风尾菇平菇、风尾菇麦粒：麦粒：o 清水或清水或0.1%多菌灵水浸泡多菌灵水浸泡1624小时，捞起，小时，捞起，摊开，底部无积水时，加辅料，调匀即可。摊开，底部无积水时，加辅料，调匀即可。稻谷：稻谷：o 冷水浸冷水浸23小时，煮开小时，煮开2030分，待大部分稍分，待大部分稍开裂，即可起锅。沥干拌料。开裂，即可起锅。沥干拌料。以畜粪和稻草为主料的培养基以畜粪和稻草为主料的培养基干稻草干稻草 63%干牛粪干牛粪 25%玉米粉玉米粉 4%过磷酸钙过磷酸钙 3%大豆粉大豆粉 3%硫酸镁硫酸镁 2%蘑菇、草菇蘑菇、草菇稻草切成稻草

13、切成3cm长，浸透捞起，沥干至不滴水长，浸透捞起，沥干至不滴水混合混合堆制堆制20天，中间翻天，中间翻34次次以阔叶树毛竹为主料配以辅料制成的培养基以阔叶树毛竹为主料配以辅料制成的培养基.配方配方枝条枝条 1000go 麸皮或米糠麸皮或米糠 250go 石膏粉石膏粉 10go 营养液营养液(蔗糖蔗糖1%，磷酸二氢钾，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁，硫酸镁0.1%）毛竹或枝条，截成毛竹或枝条，截成1012cm长，长，34mm宽，一宽，一头削尖，晒干头削尖，晒干浸入浸入0.1%多菌灵或多菌灵或0.1%高锰酸钾液泡高锰酸钾液泡30分钟分钟4050营养液中泡营养液中泡1小时小时捞出沥干捞出沥干装瓶（尖头朝

14、下，装瓶（尖头朝下，200支支/750ml瓶）瓶）上盖上盖1.5cm厚木屑培养基厚木屑培养基要求松紧适宜，瓶至颈，袋要求松紧适宜，瓶至颈，袋40%，洗净瓶口、打园洞洗净瓶口、打园洞,塞棉塞塞棉塞,灭菌灭菌无菌条件：每立方米无菌条件：每立方米10ml甲醛甲醛+5g高锰酸钾，高锰酸钾，24小时后开紫外灯小时后开紫外灯30分分1支母种支母种 56瓶栽培种瓶栽培种1瓶原种瓶原种 5080瓶栽培种瓶栽培种平菇平菇25 25-35 25-35天天 草菇草菇32 1 1周周3-53-5天内直立放置天内直立放置,然后然后倒卧叠放，适时转动倒卧叠放，适时转动（水分，菌丝生长均匀）（水分，菌丝生长均匀）定期检查，

15、剔污定期检查，剔污3 3个月内必须使用个月内必须使用最多不能超过半年最多不能超过半年1 1、母种质量鉴定：、母种质量鉴定：形态鉴定：形态鉴定：合适培养基，适宜温度培养合适培养基，适宜温度培养,菌丝生长快，整齐，菌丝生长快，整齐，浓而健壮浓而健壮菌丝爬料快，满袋快菌丝爬料快，满袋快出菇时间适合周期出菇时间适合周期出菇多而整齐出菇多而整齐菇形美观菇形美观外观要求外观要求菌丝已长满培养基，草菇有少量或没有红褐色菌丝已长满培养基，草菇有少量或没有红褐色厚垣孢子，银耳菌种在培养表面出现子实体或厚垣孢子，银耳菌种在培养表面出现子实体或子实体原基子实体原基菌丝生长健壮，绒状菌丝多，分布均匀，色泽菌丝生长健壮

16、，绒状菌丝多，分布均匀，色泽符合，该菌类菌丝的色泽符合，该菌类菌丝的色泽无杂菌污染、无杂色出现无杂菌污染、无杂色出现母种转管母种转管45次内。次内。常温下，常温下，3个月内有效。个月内有效。（满瓶后存放时间）草菇、风尾菇最好（满瓶后存放时间）草菇、风尾菇最好1个月内个月内使用。使用。依不同食用菌依不同食用菌重量要求重量要求400克克/瓶瓶 斜面低温保藏：斜面低温保藏：o 4左右左右 6个月转管个月转管草菇：草菇：5死亡，死亡，1012保存保存o 用牛皮纸包扎试管口，再用黑纸密封试管用牛皮纸包扎试管口，再用黑纸密封试管o 干净、阴凉的环境中保存，干净、阴凉的环境中保存，10-12 C为宜，为宜，

17、3-4月转管一次月转管一次o 温度不能低于温度不能低于5 C，培养基中琼脂用量可适，培养基中琼脂用量可适当加大，以增加保存期当加大，以增加保存期把液体石蜡装入三角瓶内，塞上棉塞，高压蒸把液体石蜡装入三角瓶内，塞上棉塞，高压蒸汽灭菌汽灭菌1小时，放入小时，放入30 C左右的温箱内培养左右的温箱内培养24小小时，再灭菌时，再灭菌1小时，放入小时，放入40 C环境中，使水份蒸环境中，使水份蒸发，至石蜡透明发，至石蜡透明倒入斜面菌种试管内，淹过斜面倒入斜面菌种试管内，淹过斜面1cm然后直立于试管架上放在常温条件下保藏，然后直立于试管架上放在常温条件下保藏，1-2年转管一次。年转管一次。倒去液体石蜡，用

18、无菌水冲洗斜面倒去液体石蜡，用无菌水冲洗斜面2-3次，挑取次，挑取少许菌丝接入斜面培养基上培养，至菌丝长满少许菌丝接入斜面培养基上培养，至菌丝长满斜面即可用于生产。斜面即可用于生产。不倒去石蜡，直接用接种针从斜面上挑取少量不倒去石蜡，直接用接种针从斜面上挑取少量菌丝接入斜面培养基上培养，菌种仍可继续保菌丝接入斜面培养基上培养，菌种仍可继续保藏。藏。麦粒泡麦粒泡812小时，稍沥干，装入大试管小时，稍沥干，装入大试管塞好棉塞，灭菌塞好棉塞，灭菌1小时小时-2837置置24小时小时-灭菌灭菌1小时小时接种接种长满后于干燥器干燥长满后于干燥器干燥1个月个月4或凉爽、干燥、干净处，或凉爽、干燥、干净处，

19、1年以上年以上使用时，在每支斜面培养基上接入一粒麦粒，使用时，在每支斜面培养基上接入一粒麦粒，培养至菌丝长满斜面即可培养至菌丝长满斜面即可1 衰退衰退优良性状退化，典型症状变异，质量负变优良性状退化，典型症状变异，质量负变 预防衰退措施预防衰退措施o 控制菌种传代次数控制菌种传代次数o 采用有效的菌种保藏方法采用有效的菌种保藏方法o 创造菌种生长的良好营养条件和外界环境创造菌种生长的良好营养条件和外界环境从衰退群体中找出尚未衰退的少数个体，达到从衰退群体中找出尚未衰退的少数个体，达到恢复菌种优良性状的一种措施。恢复菌种优良性状的一种措施。淘汰已衰退个体：无菌条件下，将试管菌丝刮淘汰已衰退个体：无菌条件下，将试管菌丝刮入入100ml无菌水中，振荡，分散，稀释无菌水中，振荡，分散，稀释10倍，摊倍，摊于平皿中生长，挑选萌发快，生长健壮的菌丝于平皿中生长，挑选萌发快，生长健壮的菌丝接种。接种。定期重新分离菌种，定期重新分离菌种，12年后分离一次年后分离一次木生菌类要定期接入木材中，重新分离木生菌类要定期接入木材中，重新分离