《白细胞介素10对AVP诱导心脏成纤维细胞增殖及p27蛋白表达的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《白细胞介素10对AVP诱导心脏成纤维细胞增殖及p27蛋白表达的影响（6页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、白细胞介素10对AVP诱导心脏成纤维细胞增殖及p27蛋白表达的影响黄志刚，赵连友，郑强荪，牛晓琳，王先梅，武利军【关键词】白细胞介素10；精氨酸升压素；心肌；成纤维细胞；p27蛋白【Abstrat】AI:Tstudytheeffetfinterleukin10(IL10)ntheprliferatinandp27expressininulturedardiafibrblasts(Fs)induedbyargininevaspressin(AVP).ETHDS:TheFsfnenatalSDratsereislatedandulturedbytrypsindigestinandseletivep
2、latingtehnique.ellnuberasevaluatedbyTTassay(A490value).ellyledistributinandp27expressineredeterinedithflytetry.RESULTS:TTlrietryshedthat10-7l/LAVPsignifiantlyinreasedA490valuefFs0.2160.013inparisnithntrlgrup0.1320.006,P0.01.IL10anattenuatetheA490valuefAVPgrupinanentratindependentanner.TheA490valuesf
3、the10-11,10-10,10-9,10-8kg/LIL10+10-7l/LAVPgrupsere0.2010.007,0.1870.006,0.1730.010,0.1570.029,respetively,allsignifiantlylerthanthsef10-7l/LAVPgrup(10-11kg/LIL10AVPgrup，P0.05;thethers,P0.01).TheperentageftheellsinSstage(12.30.7)andprliferatinindex(PI,19.60.9)erearkedlyinreasedin10-7l/LAVPgrupparedi
4、ththsefthentrl(4.20.5,7.10.6,P0.01).Inthe10-9kg/LIL10+10-7l/LAVPgrup,theperentageftheellsinSstage9.61.1andPI13.861.28eresignifiantlylerthanthsefAVPgrup(P0.01).Psitiveratefp27expressininAVPgrup(63.72.4)%eresignifiantlylerthanthatfthentrl78.52.5)%,P0.01.Psitiveratefp27expressinfthe10-9kg/LIL1010-7l/LA
5、VPgrupas(70.52.41)%,signifiantlyhigherthanthatfAVPgrup(63.72.4)%,P0.01.NLUSIN:IL10effetivelyinhibitstheellprliferatinfFsinduedbyAVP,andp27aybethetargetregulatryprtEinfIL10inFs.【Keyrds】interleukin10;argipressin;yardiu;fibrblasts;prteinp27【摘要】目的：研究白细胞介素10IL10对血管升压素(AVP)诱导大鼠心脏成纤维细胞(Fs)增殖及p27蛋白表达的影响.方法：
6、以培养的新生SD大鼠Fs为实验模型，四氮唑盐(TT)比色法检测Fs增殖，流式细胞分析仪(F)技术测定细胞周期及p27蛋白表达阳性率.结果：10-7l/LAVP作用24h，Fs的A490为0.2160.013，较空白组0.1320.006明显增高P0.01.10-1110-8kg/LIL10+10-7l/LAVP组A490分别为0.2010.007，0.1870.006，0.1730.010，0.1570.029，均明显低于10-7l/LAVP组其中10-11组P0.05，10-10，10-9，10-8三组P均0.01.10-7l/LAVP作用24h，Fs的S期百分率(12.30.7)及增殖指数
7、19.60.9)较空白组(4.20.5,7.10.6)均明显增高P0.01；10-9kg/LIL10+10-7l/LAVP组S期百分率(9.61.1)及增殖指数13.861.28)均明显低于AVP组P0.01.10-7l/LAVP作用24h，p27蛋白表达阳性率为(63.72.4)%，较空白组(78.52.5)%明显降低P0.01；10-9kg/LIL10+10-7l/LAVP组p27蛋白表达阳性率为(70.52.4)%，较AVP组63.72.4%明显增高(P0.01.结论：IL10具有抑制AVP诱导Fs增殖的作用，p27蛋白可能是IL10调控AVP诱导Fs增殖的细胞内靶蛋白.【关键词】白细胞
8、介素10；精氨酸升压素；心肌；成纤维细胞；p27蛋白白细胞介素10IL10是一类可以抑制炎症反响、参与免疫调节的多功能细胞因子.目前发现IL10与某些心血管系统疾病的发生开展亲密相关，IL10可以抑制细胞因子及多肽类诱导的血管平滑肌细胞的增殖，调节细胞外基质的降解1-2，在血管损伤性疾病中发挥保护作用.现已证实，左室肥厚、心肌纤维化与心脏成纤维细胞ardiafibrblasts,Fs增殖有关3.但是，Fs增殖与IL10有何关系，其详细机制如何，目前尚不非常清楚.我们观察IL10对AVP诱导的Fs增殖和p27蛋白表达的影响，初步讨论IL10在心肌纤维化中的作用及其可能的分子生物学机制.1材料和方
9、法1.1材料IL10购自PeprTeh公司,AVP,TT,碘化丙啶,胰蛋白酶,二甲基亚砜DSFIT标记的山羊抗小鼠IgG均为Siga公司产品；DE购自Gib公司；胎牛血清FBS购自杭州四季青生物制品公司；特异性小鼠抗大鼠p27蛋白Ab为Nearker公司产品；SpragueDaley仔鼠，由第四军医大学实验动物中心提供.1.2方法1.2.1Fs的培养和鉴定无菌取出生13d的SD大鼠心室，剪碎，0.008g/L胰酶消化，离心，搜集细胞，置于含100L/LFBS的DE培养液中，采用差速贴壁法，在50L/L2，37，饱和湿度条件下培养6090in，倾去上清液，参加含100L/LFBS的DE继续培养.
10、经倒置显微镜、透射电镜、免疫组化纤维粘连蛋白染色阳性和平滑肌肌动蛋白染色阴性鉴定为所需的Fs，纯度达98%.实验采用24代细胞.1.2.2TT比色法检测活细胞数目将Fs接种在96孔板中，37,50L/L2及饱和湿度下培养；药物干预前无血清DE培养液驯化24h后，给予药物干预24h后，参加TT37孵育4h，终止培养，参加DS，振荡混匀，在酶联免疫检测仪上测定A490n值.1.2.3细胞周期测定制备Fs悬液,接种于培养瓶中.药物干预前换成无血清DE培养液驯化24h，药物干预24h后搜集细胞，悬浮于4的PBS中，参加95L/L乙醇冰浴30in，离心，重悬于PBS，调整细胞密度为1081010个/L，
11、取适量细胞悬液参加RNA酶37冰浴，除去RNA，参加碘化丙啶染液，暗处冰浴30in.上机前用300目尼龙网过滤.根据碘化丙啶所标记的DNA含量确定细胞所处的周期.1.2.4p27蛋白表达测定细胞固定步骤同前，重悬于PBS后，参加特异性的小鼠抗大鼠p27蛋白单抗，室温放置1h，PBS2L洗2次，参加FIT标记的二抗50L，37孵育30in，300目尼龙网过滤，F检测，根据FIT激发出的荧光量确定p27蛋白表达的阳性率.1.2.5实验分组实验分空白组：无任何干预药物；IL10组：在空白组的根底上加10-9kg/LIL10；AVP组：在空白组的根底上加10-7l/LAVP；AVPIL10组：在AVP
12、组的根底上加IL10,根据IL10浓度的不同分为10-11，10-10，10-9和10-8kg/L四个亚组.每组重复5次.统计学处理：所有实验结果均以xs表示，采用SPSS11.0软件，NEAYANVA分析，两两比拟采用LSD检验，P0.05表示有统计学意义.2结果2.1不同浓度IL10对AVP诱导Fs数目的影响10-7l/LAVP作用24h，FsA490值0.2160.013与空白组0.1320.006相比，有显著性差异P0.01.在10-7l/LAVP作用的根底上，分别同时给予10-11，10-10，10-9，10-8kg/LIL10的干预24h，Fs的A490值呈递减趋势，分别为0.20
13、10.007，0.1870.006，0.1730.010，0.1570.029，与AVP组相比均明显降低；其中10-11kg/LIL10组与AVP组相比，有显著性差异P0.05，但仍较空白组高P0.01；10-1010-8kg/LIL10三组较10-7l/LAVP组均显著降低P0.01，仍较空白组高P0.01；10-11，10-10，10-9，10-8kg/LIL10组内两两比拟，其中10-8组与10-9组、10-8组与10-11组、10-9组与10-11组相比拟，均有显著性差异P0.01，10-9组与10-10组、10-10组与10-11组相比拟，均有显著性差异P0.05.2.2IL10对A
14、VP诱导Fs细胞周期的影响10-7l/LAVP作用24h，Fs的G0/G1期及G2/期均明显低于空白组P0.01，S期百分率及增殖指数均明显高于空白组P0.01；在10-7l/LAVP作用的根底上同时给予10-9kg/LIL10的干预24h，Fs的G0/G1期及G2/期均明显高于AVP组P0.01，但仍低于空白组P0.01；S期百分率及增殖指数均明显低于10-7l/LAVP组P0.01，但仍高于空白组P0.01，表1.表1IL10对AVP诱导Fs细胞周期的影响2.3IL10对AVP诱导Fsp27蛋白表达的影响10-7l/LAVP作用24h，p27蛋白表达阳性率为(63.72.4)%，较空白组(
15、78.52.5)%明显降低P0.01；给予10-9kg/LIL10干预，p27蛋白表达阳性率为70.52.4)%明显高于AVP组63.72.4%P0.01，但仍低于空白组P0.01.3讨论AVP是一种由下丘脑视上核和室旁核的巨细胞神经元合成的一种具有抗利尿、缩血管的作用的神经多肽.近年来研究发现，心脏部分组织中亦含有AVP的多肽及其RNA的表达，应激后心脏部分组织中AVP含量可增高47倍，提示心血管部分组织中有AVP合成系统4.而且AVP可以促进血管平滑肌细胞增殖和增生，促进Fs增殖和胶原合成5-6，参与心血管的病理性重构.本研究结果显示，在AVP的作用下，FsTT比色法A值、S期细胞百分率和
16、增殖指数均显著性增高，这与文献报道相一致5-6，说明AVP能诱导Fs增殖.IL10是单核细胞、巨噬细胞分泌的一种多功能细胞因子，可以抑制炎症反响及炎症因子的分泌，在肿瘤、病毒感染等的发生开展中发挥重要作用.目前发现其在心血管系统生理和病理状态下也有着重要的调节作用.IL10能间接抑制血管平滑肌细胞增殖，调节细胞外基质的降解，通过对血管细胞外基质及血管平滑肌细胞的影响，在动脉粥样硬化等血管损伤性疾病中发挥保护作用1-2.心肌组织中三分之二的细胞是非心肌细胞，其中Fs占90%以上.现已证实，Fs过度增殖是导致心肌纤维化的主要原因之一，但IL10对Fs增殖的影响及其机制还不非常清楚.本研究观察了IL
17、10对AVP诱导的Fs增殖的影响.当给予IL10干预后，FsTT比色法A值显著降低,而且呈浓度依赖性下降.进一步细胞周期分析说明，IL10可以使AVP诱导的Fs增殖的S期细胞百分率和增殖指数下降，伴随着处于静止状态的G0/G1期细胞百分率增加.目前认为，TT比色法A值可以较准确地反映培养的活细胞数量，而细胞周期可以清楚地说明细胞群体的增殖状态，可见IL10具有抑制AVP诱导Fs增殖的作用.p27蛋白是一种细胞周期负性调控因子，与p21，p57蛋白同属于ip/Kip家族，可以抑制细胞周期于G0/G1期，参与细胞增殖、分化的调控7.AVP诱导Fs增殖效应很可能与p27蛋白表达程度的下调有关8.IL
18、10可以上调肾小球系膜细胞内p27蛋白的表达，抑制系膜细胞增殖9.本研究在分子程度上观察了IL10对AVP诱导Fs中p27蛋白表达的影响，结果显示，AVP能下调Fs的p27蛋白阳性表达率，而IL10可以上调AVP降低的Fs的p27蛋白阳性表达率.这提示IL10抑制AVP诱导的Fs增殖的机制可能与IL10上调了Fs的p27蛋白表达有关.综上所述，不难看出IL10具有抑制AVP诱导Fs增殖作用，而IL10抑制AVP诱导Fs增殖的效应可能与p27蛋白程度的上调有关.【参考文献】1azighi,PelleA,Gnzalez,etal.IL10inhibitsvasularsthusleellativa
19、tininvitrandinvivJ.AJPhysilHeartirPhysil，2022,287(2):H866-H871.2ZieranA,ReznikvLL,RaeburnD,etal.Interleukin10attenuatestherespnsetvasularinjuryJ.JSurgRes,2022,121(2):206-213.3nrieffJ,Lindsay，DunnFG,etal.HypertensiveheartdiseaseandfibrsisJ.urrpinardil,2022，19(4)：326-31.4HupfH,GriD,RieggerGA,etal.Evid
20、enefravaspressinsysteintheratheartJ.irRes,1999，84(3):365-370.5YangXD,ZhaLY,ZhengQS,etal.Effetsfargininevaspressinngrthfratardiafibrblasts:RlefV1reeptrJ.JardivasPharal,2022，42(1):132-135.6尚福军，赵连友，郑强荪，等.钙调神经磷酸酶调控精氨酸升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的作用J.高血压杂志,2022，12(1)：58-61.7LayER,angY,PstJ，etal.leularbasisfrthespeifiityfp27tardylindependentkinasesthatregulateelldivisinJ.JlBil,2022,349(4):764-773.8陈永清，赵连友，彭育红，等.p27蛋白表达对精氨酸加压素介导心脏成纤维细胞增殖的影响J.心脏杂志，2001，13(2)：122-124.9吴元俊,陈吉庆,唐云章,等.IL10对人肾小球系膜细胞细胞周期负调控蛋白27的调节J.上海免疫学杂志,2022，233：155-157.
白细胞介素10对AVP诱导心脏成纤维细胞增殖及p27蛋白表达的影响
