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1、1.1供应材料。小麦种子；主要试剂：0.1%HgCl2,TTC3%磺基水杨酸（SSA,冰乙酸，茚三酮，PBS（pH=7.8）,0.6%TBA（用0.6%TCA配制）,PBS（pH=6.8,内含1mMHA）0.1%Ti（SO4）2用20%（v/v）HSO配制，PBS,（pH=5.8,内含0.1mmol/LEDTA,1%PVP,POD反应混合液（10mmol/L愈创木酚，5mmol/LHO,用PBS溶解）,PPC反应混合液（20mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）5%三氯乙酸，PBS（pH=7.7）,4mMDTNB用0.1MpH=6.8PBS现配）。主要仪器：分光光度仪，离心机，试管，微量加样器，
2、研钵等。Pro脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，具有很强的水合能力，其水溶液具有很高的水势。脯氨酸的疏水端可和蛋白质结合，亲水端可与水分子结合，蛋白质可借助脯氨酸束缚更多的水，从而防止渗透胁迫条件下蛋白质的脱水变性。因此脯氨酸在植物的渗透调节中起重要作用，而且即使在含水量很低的细胞内，脯氨酸溶液仍能提供足够的自由水，以维持正常的生命活动。正常情况下，植物体内脯氨酸含量并不高，但遭受干旱等胁迫时体内的脯氨酸含量明显增加，它在一定程度上反映植物受环境干旱胁迫的情况，以及植物对水分和盐分胁迫的忍耐及抵抗能力。1.21 MDA植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA是膜脂过氧化
3、的最终分解产物，从膜上产生的位置释放出后，与蛋白质、核酸起反应修饰其特征；使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。MDA勺积累可能对膜和细胞造成一定的伤害，它在一定程度上也反映了植物受环境干旱胁迫的情况。1.23抗氧化酶植物体内存在着一套负责清除活性氧所产生的抗氧化系统，在植物正常生长情况下，它使活性氧的产生和清除处于动态平衡状态，在逆境诸如干旱胁迫下，这种平衡被打破。这种变化可通过分光光度器测定。1.24 GSH还原型的GSH是植物细胞中重要的抗氧化剂之一，其可通过膜蛋白巯基与二硫键化合物结合的比例，对细胞膜起保护作用。其含量的变化，一定程度上反映了植物受干旱胁迫的情况。1.25 H2
4、Q过氧化氢是植物代谢中产生的一种产物，其积累对细胞具有氧化破坏作用，在实验中，可根据其值的变化，来了解组织的破坏程度。因此，过氧化氢的含量也是植物逆境的一项指标。1.3实验方法1.31 Pro的提取。分别取0.1g实验组（为干旱处理5天）和对照组（不做干旱处理）的胚芽鞘置于研钵中，加入3mL3%磺基水杨酸（SSA和少许石英砂充分研磨，再用2mL3%SSA洗研钵，置于离心机中，在5000rpm下离心10min，取上清液，定容至5mL。测定：取上清液各2mL，分别加入2mL冰乙酸和2mL茚三酮试剂再煮沸15min，冷却后，5000rpm离心10min，分别测定A520。1.32 MDA提取。分别取
5、0.1g实验组和对照组（与1.32做相同处理）置于研钵中，加入3mL50mMPBS（pH=7.8）和少许石英砂充分研磨，再用2mLPBS洗研钵，置与离心机中，在5000rpm下离心10min，取上清液，定容至5mL。测定：分别取上清液各2mL，加入0.6%TBA（用0.6%TCA配制）2mL,煮沸12min，冷却后，5000rpm离心10min，分别测定0阪和O%。1.33抗氧化酶的提取。分别取0.1g实验组和对照组（同1.32做相同处理）置于研钵中，加入3mL50mMPBS（pH=6.8,内含1mMHA和少许石英砂，充分研磨，再用2mLPBS洗研钵，置于离心机中，在5000rpm下离心10m
6、in，取上清液，定容至5mL。测定：PODM定；取POD反应混合液（10mmol/L愈创木酚，5mmol/LHQ,用PBS溶解）3.00ml，加入酶液（提取液）100ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应3min时的阳。PPQ测定：取PPQ反应混合液（20mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.8ml，加入酶液（提取液）0.2ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应2min时的Ai。GSH的提取。分别取0.1g实验组和对照组的胚芽鞘（同1.32做相同处理）置于研钵中，加入3mL5汇氯乙酸（TCA和少许石英砂，充分研磨，用2mL5%TCA洗研钵置于离心机中，在500
7、0rpm下离心10min，取上清液定容至5mL。测定：上清液各1mL，分别加入1mL0.1MPBS（pH=7.7）和0.5mL4mMDTNB（用0.1MpH6.8PBS现配，空白用此PBS代替），25C5min,分别测定A412。1.34 HQ提取。分别取0.1g实验组和对照组，加入3mL50mMPBS（pH=6.8，内含1mMHA）和少许石英砂充分研磨，用2mLPBS洗研钵，5000rpm离心10min，上清液定容至5mL。测定：分别取上清液各3mL加入0.1%Ti（SQ4）2用20%（v/v）HSQ配制1mL，摇匀。5000rpm离心10min，QDo。2结果与分析2.1Pro表一Pro正
8、常组和实验组的A520和Procontent正常干旱胁迫曲=0.117-1Procontent=5.42(mol.gFW)A520=2.935-1Procontent=135.88(mol.gFW)以上通过Procontent=人520V总（moLg,而处理得V显LWV用由上表可知，干旱胁迫下，脯氨酸的量是正常值的25倍，由此可以得到，干旱胁迫会造成脯氨酸的积累。但是，植物合成、累积及代谢是一个受非生物胁迫的一个过程，因此，脯氨酸的积累可能是生物受胁迫的一个信号。当植物处于干旱条件下时，为了保护植物对干旱逆境的反应，在干旱胁迫下，脯氨酸的质量分数会急剧上升。而脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，这表明
9、它具有易于水合的趋势或具有较强的水合能力。它的增加可能是植物对干旱胁迫的一种保护性反应。2.2MDA表二正常组和实验组的A45O、A532和可溶性糖及MDA勺浓度正常干旱胁迫A450=0.075A450=1.475As32=0.047Ae32=0.418可溶性糖浓度=0.88mmol/L可溶性糖浓度=17.27mmol/LMDA浓度=0.26umol/LMDA浓度=1.87umol/L以上实验结果是通过以下方程处理而得。由上表可知，干旱胁迫下，丙二醛的浓度是正常情况下得7倍，因此，在干旱胁迫也会造成MDA的积累，MDA勺最大特点是对细胞质膜和细胞中的许多物质均有很强的破坏作用，因此，植物组织可
10、能是通过产生并积累MDA等对细胞有害物质，进而破坏植物组织，使植物在逆境坏境中生长不好。2.3抗氧化酶表三正常组和实验PPO和POE不同时间所测得值PPC和PODactivities正常干旱胁迫PPOAi10=0.114(30s)A410=0.116(1min30s)A41=0.118(2min)PPOAn0=0.07(30s)An0=0.073(1min30s)An0=0.075PODAe=(30s)A470=1.419(1min)PODA10=O.385(30s)阳。=0.783(1min)PPOactivities=50(U.g-1FW)PPOactivities=75(U.g-1FW)
11、PODactivities=-1-1(mol.gFWmin)PODactivities=-1-144.89(mol.gFWmin)以上数据是通过以下方程计算而得A470V总-1-1PODactivities=V显(mol.gFWmin)WtV用PPOactivities=A410世(U.g-1FW)0.01WtV用由上表可知，在干旱胁迫下，也会造成PPC和pod勺积累。抗氧化酶的主要作用是消除ROS寸植物的伤害，使抗氧化酶与ROS处于一个动态平衡。在干旱胁迫下，抗氧化酶总体增加，说明，这一个动态平衡体系被打破，使植物不能消除ROS寸自身的伤害，因而，逆境下植物生长不好。2.4GSH表四正常组和
12、实验组GSH勺九2值和GSHcontent正常干旱胁迫Ah2=0.071A412=0.166GSHcontent=0.91(mol.g-1FW)GSHcontent=2.14(mol.g-1FW)GSHcontent是通过以下公式计算而得GSHcontent=A412(mol.g-1FW)由上表可知，逆境中，GSH含量也明显增加，在干旱胁迫下也一定程度上造成了GSH的积累。GSH是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质。GSH含量的增加，一定程度上，反应了植物在逆境中，也能合成一些产物，增加其抗逆性，以便植物能在逆境中生长。2.5H2
13、Q表五正常组和实验组H2O2的Ano和H2Qcontent正常干旱胁迫Aio=O.O87A41o=O.532HQcontent=20.71(mol.g-IFW)HQcontent=126.67(mol.g-1FW)以上H2Q2content是通过以下公式计算而得:-1(5ol.g1FW)A410V总H2Q2content=V显LWV用由上表可知，干旱胁迫下，也会造成过氧化氢的积累。过氧化氢是体内重要的代谢产物，其积累对细胞具有氧化破坏作用，其含量的高低，一定程度上反映了CAT活性的高低。因此，在干旱胁迫下，有可能是CAT酶活性降低，造成过氧化氢在植物体内的积累，从而破坏了细胞的氧化作用，使植物不利于在逆境中生长。
逆境胁迫对植物生理生化指标的影响1
