临床检验中心pcr实验室标准操作程序.doc

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1、*医院临床检验中心临床基因扩增实验室管理程序标准操作程序（SOP）起草人：批准人： 生效日期： 年 月 日目 录临床基因扩增实验室的设置3临床基因扩增实验室内部管理规章11临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训15临床基因扩增实验室的设施和环境18临床基因扩增实验室清洁制度规章19临床基因扩增实验室仪器设备管理规章21Roche 480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）未修改26Finnpipette 可调式移液器的使用与维护标准操作(SOP-2)35Finnpipette可调式移液器校准标准管理程序(SOP-3)39温度计及湿温度计的校正标准管理程序(SOP-4)

2、40离心机使用与维护标准操作程序(SOP-5)41超净工作台使用与维护标准操作程序(SOP-6)45恒温水浴箱使用、维护与校正（SOP-7）46旋涡振荡器使用与维护标准操作程序（SOP-8）49冰箱的使用与维护标准操作程序（SOP-9）50可移动紫外灯标准操作程序（SOP-10）52仪器故障时标记、放置标准操作程序（SOP-11）53仪器设备发生故障时的应急处理程序（SOP-12）54临床标本的收集管理标准操作程序（SOP-13）57检验标本的验收和保存标准操作程序（SOP-14）58样本编号的标准操作程序(SOP-15)63PCR标本管理标准操作程序（SOP-16）65标本前处理标准操作程序

3、（SOP-17）67核酸扩增及产物分析检测标准操作程序（SOP-18）68乙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序（SOP-19）70基因扩增检测实验结果分析标准操作程序(SOP-20)75实验结果有效性判断标准操作程序（SOP-21）78室内质量控制标准操作程序(SOP-22)79实验室试剂耗材购买、验收和贮存的标准操作程序（SOP-23）85试剂质检标准操作程序（SOP-24）91实验室耗材质检标准操作程序（SOP-25）94手套使用及左右手分开的原则（SOP-26）97实验室化学试剂贮存使用、废弃物处理及生物防护（SOP-27）98抱怨的处理程序（SOP-28）101实验室记录管理规章标准操

4、作程序（SOP-29）105检验报告单管理标准操作程序（SOP-30）108实验室台面摆放顺序程序（SOP-31）112实验室常用溶液配置标准操作程序（SOP-32）113*医院临床检验中心SOP文件实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01临床基因扩增实验室设置标准操作程序 第 12 页 共 119 页临床基因扩增实验室的设置1目的：依照实验室设置规范实现核酸扩增荧光检测实验室配置合理，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性2 范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确各项规章制度3 操作人：* *4 实验室设置规章： 4.1 依据：本实验室按临床

5、基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发200210号）中临床基因扩增检验实验室基本设置标准结合本实验室的条件进行设置，并严格按照临床基因扩增检验实验室工作规范（卫检字2002第8号）的要求开展临床基因扩增工作(拟开展基因扩增检验项目见附表1)4.2 实验室设置:4.2.1实验室主要由试剂储存和准备区（PCR-）、标本制备区（PCR-）、PCR扩增及产物分析区(PCR-）三个工作室组成。这三区各自独立，每个区设有缓冲间。其布局见实验室平面图（见附图1）。4.2.2设立各区的门牌，分别是：“试剂储存和准备区（PCR-）”、“标本制备区（PCR-）”、“PCR扩增及产物分析区(PCR-）”，并在各区

6、门上贴有“非本室工作人员不得进入”标记。4.2.3建立实验室内务管理，并放在进入实验室的明显位置（如置于缓冲区的墙上；内务管理应有进入实验的工作流程、进入实验室的要求、实验前的准备及清洁等）。4.2.4三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识：试剂准备区蓝色，标本制备区紫色，PCR扩增及产物分析区黑色。各区的实验物品不得混用（实验室主要设备一览表见表3）。4.2.5进入各区的工作流程为：试剂储存和准备区标本制备区PCR扩增及产物分析区。4.2.6进入实验室必须更换有本室标识的工作服及清洁鞋套，工作人员离开某一工作区时，该区物品不得带出

7、本区（包括工作服等）。4.3各区实验设备及用品配置：4.3.1试剂储存和准备区：冰箱（28和-15）、可调式移液器（覆盖0.51000ul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，混匀器，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。4.3.2 标本制备区：冰箱（28和-15）、台式高速离心机、水浴锅、净化工作台、混匀器、可调式移液器（覆盖11000ul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。4.3.3 PCR扩增及产物分析区：Line-Gene全自动

8、荧光定量PCR核酸扩增仪、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水纸等），专用实验记录本及记号笔等。4.4实验室人员设置：实验室人员配置：我院PCR实验室配备有3名工作人员，其中1人具检验师职称，2人具主管检验师职称。已全部经过安徽省临床检验中心培训，并取得培训合格证（实验室工作人员一览表见表2）。起 草 人批 准 人生 效 日 期年 月 日附表1 拟开展临床基因扩增检验项目一览表项 目方 法备 注HBV DNAPCR荧光实时扩增Line-Gene扩增仪表2 临床基因扩增检验实验室工作人员一览表序号姓名性别年龄学历职务职称所学专业毕业时间从事本专业时间培训合格证号备注

9、1中专主管检验827422002000*2中专主管检验817442003000*3中专检验师检验957312003000*表3 临床基因扩增检验实验室仪器设备一览表序号仪器设备名称生产厂家仪器型号仪器序号接收日期接收状态启用日期放置地点接受人签字备注1紫外线消毒车江阴市光电仪器有限公司ZXC类B型2003-4-18全新2002-5-9试剂准备区2美菱电冰箱美菱股份有限公司BCD-109624172003-4-19全新2003-4-19试剂准备区3可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司4500120Y557772003-4-19全新2003-5-9试剂准备区4可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司4

10、500020Y500412003-4-19全新2003-5-9试剂准备区5可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司4500100Y458492003-4-19全新2003-5-9试剂准备区6可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司4500090Y567342003-4-19全新2003-5-9试剂准备区7光学读数分析天平湘仪天平仪器厂TG3282003-5-8调拨2003-5-8试剂准备区8无菌净化工作台浙江大学净化设备厂GEM-SHGEM-SH-012003-4-16全新2003-5-9样本准备区9紫外线消毒车江阴市光电仪器有限公司械厂ZXC类B型2003-4-18全新2003-5-9样本准备区10

11、高速离心机上海安亭科学仪器厂TGL-16B172003-3-1全新2003-3-19样本准备区11美菱电冰箱美菱股份有限公司BCD-109624222003-4-19全新2003-4-19样本准备区12三用电热恒温水浴箱上海跃进医疗器械厂S.HH.W21.420010062003-2-15全新2003-3-30样本准备区13微型混匀器上海医科大学仪器厂XW-80AQ/DAALC2-20002003-2-15全新2003-3-30样本准备区14可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司4500020Y500402003-4-19全新2003-5-9样本准备区15可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司45

12、00100Y458502003-4-19全新2003-5-9样本准备区16可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司4500090Y567332003-4-19全新2003-5-9样本准备区17可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司4500050F599682003-4-19全新2003-5-9样本准备区18Line-Gene扩增仪杭州DaheThermo-Magnetic有限公司FGD-33ABYQ6079-2442003-4-16全新2003-5-9PCR扩增区19紫外线消毒车江阴市光电仪器有限公司械厂ZXC类B型2003-4-19全新2003-5-9PCR扩增区图1 基 因 扩 增 实 验 室

13、平 面 图*医院临床基因扩增实验室*医院临床基因扩增实验室- 119 -*医院临床检验中心SOP文件实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01临床基因扩增实验室内部管理规章标准操作程序 第 16 页 共 119 页临床基因扩增实验室内部管理规章1目的：依照实验室管理规范实现全面质量管理，实现核酸扩增荧光检测实验室有专人负责，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性2 范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确了各项规章制度3 操作人：*4 规章：4.1实验室内务管理规章：4.1.1标本的接收设在三个区以外的区域（与生化专用标本接收区合用），在标本接收时

14、同时进行以下记录：在标本与化验单上同时进行标本的唯一性编号，在标本接收登记本上记录患者的姓名、年龄，标本接收日期，标本的特性、状态，接收者签名。经验收合格后接收的标本直接运送至标本制备区。4.1.2实验过程中须严格遵守实验的工作流程：试剂准备区标本制备区扩增及产物分析区的唯一流向制度。4.1.3开启实验区前逐一打开设在缓冲区外墙上的紫外线灯开关（控制实验区的固定紫外灯），照射30分钟。4.1.4工作开始前，在缓冲区换好本实验区工作衣，戴上一次性口罩、帽子，套上一次鞋套，关闭紫外灯。打开缓冲的排风装置，开启实验区门锁，工作时反锁隔离门。4.1.5进行测定前的准备和工作记录（实验前的准备和工作记录

15、见表4）：a)记录冰箱温度、紫外线消毒时间；b)消毒液、清洁液、75%酒精配制；c)查看加样器、扩增仪、离心机、灭菌的吸头等是否在有效期限内；d)校正水浴锅温度；e)试剂准备：试剂是否在有效期范围内，根据标本量确定准备模板的数量及阴阳性对照数量；4.1.6实验过程的记录（见SOP文件）。4.1.7检测结果的记录（见SOP文件）。4.1.8实验完成后实验室清洁消毒处理及记录：实验台面、加样器、离心机、超净工作台、振荡器、扩增仪、实验室空间、实验室地面等（详见实验室清洁制度）。4.1.9工作结束，内务整理完毕，关闭排风装置及实验区，加锁。4.1.10唯一流向制度同样运用于实验室物流管理及内务管理。

16、4.2质量控制规章：4.2.1制定各种SOP文件并严格执行。4.2.2参加室间质评。4.2.3开展室内质控工作。4.3人员行为规章：4.3.1要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。4.3.2实验室人员须保持仪表整洁。4.3.3严格遵守实验操作规范，不得随意更改操作步骤。4.3.4实验室技术人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，包括实验室擦洗、台面消毒，离心管、吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物的处理等。4.3.5进入实验室工作人员必须遵守实验室唯一流向制度，无必要尽量减少进入实验室的次数。4.3.6 实验室内严禁饮食、吸烟。4.3.7非本室工作人员未经允许不得进入实验室。4.3.

17、8语言有礼貌、举止讲文明，对待来访病人或电话应和蔼礼貌，解释明确耐心，不得推脱或生硬回绝。4.3.9晚上下班要关门、窗，检查空调和仪器的电源是否关闭。4.4仪器管理规章：4.4.1实验人员必须熟悉仪器性能方允许操作，严格遵守操作规程。4.4.2所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，有使用维修记录。4.4.3仪器使用前必须检查是否完好，一旦发现问题，及时向负责人反映，不得擅自拆装。4.4.4注意保持仪器卫生整洁，严禁在室内抽烟，吃零食，非仪器操作员应尽量少入。4.4.5每天了解仪器运转情况，负责仪器的整洁，安全，检查电源，水龙头。4.4.6定期校正和维护PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器、设

18、备，并建立仪器质量认证档案。4.5试剂管理规章：4.5.1实验室根据需要，定期提交试剂申购单，并做到及时盘存清点，入库做到心中有数。4.5.2所购试剂一律按试剂和耗材的SOP进行，并做到来源渠道正规，质量保证。4.5.3实验室对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。4.5.4自配试剂须经严格校正后方可使用。4.5.5试剂的保存应严格按照规定存放，确保有效期内能有效使用，杜绝浪费现象。4.5.6易燃易爆试剂应分开存放，远离火源和电源。4.5.7试剂外借一律须经负责人同意方可。5本制度的变动程序：本制度的变动，可由任一使用该文件的工作人员向主管负责人提出，主管负责人则召集与本制度相关的所有人员进

19、行讨论，根据讨论结果是否通过，如通过则公布实施。起 草 人批 准 人生 效 日 期 年 月 日表4 实验前的准备及工作记录日期： 年 月 日条 目工 作 记 录责任人（签名）缓冲区处在排风状态冰箱温度记录实验室紫外线照射30分钟更换新配制的消毒液清洁液配制实验台面的消毒 10%84液擦洗 75%乙醇清洁加样器 在有效期内扩增仪 在有效期内离心机 在有效期内灭菌的吸头 在有效期内水浴锅温度校正 在有效期内试剂： 在有效期内 所用模板数量 所用阳性对照 所用阴性对照表4 实验前的准备及工作记录日期： 年 月 日条 目工 作 记 录责任人（签名）缓冲区处在排风状态冰箱温度记录实验室紫外线照射30分钟

20、更换新配制的消毒液清洁液配制实验台面的消毒 10%84液擦洗 75%乙醇清洁加样器 在有效期内扩增仪 在有效期内离心机 在有效期内灭菌的吸头 在有效期内水浴锅温度校正 在有效期内试剂： 在有效期内 所用模板数量 所用阳性对照 所用阴性对照*医院临床检验中心SOP文件实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训标准操作程序 第 20 页 共 119 页临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训1目的：保证实验室具备开展该项实验的能力。2适用范围：临床核酸扩增荧光检测实验人员。3负责人：*4内容：4.1人员要求：4.1.1由于P

21、CR检测干扰因素较多，结果分析复杂。因此，PCR实验室工作人员应具备掌握相关学科知识及应用能力（实验技能、分析能力、沟通能力等）；应具备较广泛的分子生物知识。4.1.2 PCR实验室工作人员应取得上岗培训合格证书，临床PCR检验过程须在具培训合格证书的技术人员监督指导下完成，检验报告须由具培训合格证书的技术人员审核签。4.1.3 工作人员上岗前必须学习掌握PCR实验管理文件及要求，并由实验室主任核查。4.2人员配置：4.2.1根据卫生部临检中心对实验室人员的在求选择人员；4.2.2我科PCR实验室配备3名工作人员（PCR实验室工作人员一览见表2）；4.2.3实验室主任负责实验室全面管理、解决技

22、术疑难及与临床沟通、组织人员参加培训，室主任不在岗时，应指定代理人负责。4.2.3资深检验技师及青年技师负责实验室技术管理及临床标本的检验。4.3人员管理：a) 严格遵守实验室内务规章制度；b) 严格执行年度考核制度：1)日常工作质量的评价；2)室内质控的评测；3)室间质控的评测；4)年度考试；5)在日常抱怨工作中的应变能力。c) 科年度奖励制度：1)参加室间质评优秀；2)年度在CN级刊物上在论文发表；3)在本地刊物有多篇论文发表；4)考试成绩优秀；5)受到有关部门或群众特别嘉奖。d) 科主任建立实验室工作人员业绩档案。4.4人员培训计划：4.4.1本室现有人员已参加安徽省临床检验中心基因扩增

23、实验室人员培训班，并取得上岗证。见附件14.4.2自学及考核：室主任督促指导实验室人员通过继续教育或自学提高业务素质。工作人员根据自身情况，每年完成一篇学术论文、综述或经验总结提交室主任，室主任以此作为年度考核技术人员的一项依据。4.4.3室主任每年必须参加临床检验中心的PCR质控总结会议。4.4.4室成员每年至少有一个月脱产的理论和技能的学习。4.4.5经常同其它PCR室的同道进行理论和技术交流。4.4.6订阅与分子生物学及PCR技术有关的文献、杂志。4.4.7每年底对下一年的人员培训做出具体安排。4.4.8实验室主任对技术人员的技术档案每两年修正补充一次。5.该程序的变动程序：本标准操作程

24、序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：检验科主任、室技术负责人注:所引用表格:1. 实验室工作人员一览表见表22. 实验室工作人员档案记录见表5起 草 人批 准 人生 效 日 期年 月 日表5 临床基因扩增检验实验室工作人员档案记录表姓 名性别年龄学历职务职称毕业学校及所学专业毕业时间从事本专业时间培训合格证号工作业绩（技能、经历、发表论文及科研成果）：*医院临床检验中心SOP文件实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01临床基因扩增实验室设施和环境标准操作程序 第 22 页 共 119 页临床基因扩增实验室的设施和环境1目

25、的 保证环境良好，工作有序，结果可靠2范围 PCR实验室及相关工作人员3操作人 * *4规章：4.1实验室分三个区：试剂储存和准备区（PCR-）、标本制备区（PCR-）、PCR扩增及产物分析区（PCR-）。进入各区按照单一方向进行，即试剂储存和准备区（PCR-）标本制备区（PCR-）PCR扩增及产物分析区（PCR-）。各区及设备、物品有明确标识，严禁混用。4.2每个实验区的门上有本区的标识及非本室人员不得进入字样。4.3每个实验区配有温度调控设备、温湿度计，可移动及固定紫外灯。4.4PCR扩增仪配有UPS多功能稳压电源。4.5工作人员在操作过程中严格遵守实验室内务管理，严格执行操作程序。4.6

26、实验室人员进入本工作区时须穿该区具有标识专用工作服，同时配备其它保护性装备如手套、口罩、帽子、鞋套并遵守实验室的唯一流向制度。4.7严禁将本区的物品和工作服带离本区，以防扩增产物污染扩增前区。4.8在实验过程中使用过的废弃枪头等材料应立即浸泡于装有84消毒液的容器中，过夜后再作为有污染的物品由专人统一处理。4.9标本盖子的开闭及移取应在超净台内进行，操作时应，关闭抽风机，操作时小心谨慎，防止液体外溅。4.10每天实验开始前，打开紫外灯及紫外消毒车照射30分钟。4.11工作结束后，对该区的工作台用84消毒液消毒30分钟后，再用该区专用的清洁干净的抹布用自来水擦拭两遍。对地面用该区专用的拖把用84

27、消毒液消毒30分钟后，再用该区专用的拖把用自来水拖擦两遍。用紫外消毒车距实验台面和实验仪器30cm照射1小时，同时打开该区紫外消毒灯消毒1小时。起 草 人批 准 人生 效 日 期年 月 日*医院临床检验中心SOP文件实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01临床基因扩增实验室清洁规章制度标准操作程序 第 24 页 共 119 页临床基因扩增实验室清洁制度规章1目的 保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行2范围 PCR实验室台面、地面及仪器、设备等3操作人 * *4规章：4.1实验室台面和地面清洁4.1.1每次实验结束后由专人负责并记录，各区的清洁工具不得

28、混用。4.1.2实验台面选用10%的84液擦拭;扩增区实验台面用75%的酒精清洁;实验室地面用先用10%的84液清洁，再用自来水清洁。4.1.3清洁完成后,按各区要求紫外线照射消毒。同时可移动扩增区紫外线灯照实验台30-60分钟。4.1.4实验操作过程中出现血液/痰液等不慎泄露至实验台面，应立即停止实验，用10%84液浸住污染区域，再用滤纸片覆盖可继续实验，30分钟左右后可用软布蘸10%84液溶液反复清洗，再用75%酒精擦拭；实验结束后用紫外线灯照30-60分钟。4.2高速离心机清洁 4.2.1每次实验开始前，用75%的酒精擦拭离心的心机外表。4.2.2每次实验完毕后，先用10%84消毒液浸过

29、的软布擦洗离心机的转头及内壁,再用洁净的湿布擦洗,待干后盖上机盖。4.2.3如果离心时及时发现离心管破裂，必须先停止实验，将有破裂管的离心管放入盛有10%84消毒液缸内，取备用离心管继续下一步操作。4.3超净工作台清洁4.3.1每次使用后用10%84消毒液擦拭工作台面，再用洁净的湿布擦洗。75%酒精棉球擦拭紫外灯；4.3.2每星期清洁净化工作台的周围环境，去除尘埃。4.3.3如果操作过程中出现液体不慎泄露，应立即停止实验，用10%84液浸住污染区域，再用滤纸片覆盖可继续实验，30分钟左右后用软布蘸10%84消毒液溶液反复清洗，再用洁净的湿布擦洗，然后用75%酒精擦拭。 4.4加样器清洁4.4.

30、1每次实验结束后用75%的酒精擦拭。4.4.2当怀疑加样器有可能污染时在1210C及1巴压力下消毒20分钟。各区的加样器归各区专用（有标识），清洁的消毒时分别处理。4.5工作服清洁4.5.1每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区的工作服隔天洗涤。4.5.2如在实验过程中疑有污染，立即用10%84液浸泡消毒。4.6扩增仪的清洁：见仪器的维护。4.7实验室空间消毒：实验结束及后续工作（如地面及仪器清洁）完成后，将固定紫外灯打开照射60分钟。5.本制度的变动程序：本制度的变动，可由任一使用该文件的工作人员向主管负责人提出，主管负责人则召集与本制度相关的所有人员进行讨论，根据讨论结果是否通过，如通

31、过则公布实施。（注：实验室清洁消毒见表6）起 草 人批 准 人生 效 日 期年 月 日*医院临床检验中心SOP文件实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01临床基因扩增实验室仪器设备管理规章标准操作程序 第 29 页 共 119 页临床基因扩增实验室仪器设备管理规章1目的 保证PCR实验室的仪器设备得到妥善管理，控制在用仪器设备的工作状态2范围 PCR实验室所有的仪器、设备3操作人 * *4操作：4.1仪器设备的管理，维护，保养等的具体事项由实验室设备管理人员负责执行；4.2由PCR实验室负责人负责组织执行和监督管理；5 内容：5.1建档管理：仪器设备的档

32、案管理应包括以下内容（实验室主要仪器设备相关文件一览表见表6）：5.1.1仪器设备的一般情况：a) 名称b) 制造商，型号，序号c) 接受日期，接收状态（全新，改装，原件调拨等），启用日期d) 目前存放地点，接受人员签字等。e) 校准和检定的日期、结果及下次校准和检定的日期、结果。f) 迄今为止所进行的维护及今后维护计划。5.1.2仪器设备的相关文件： 仪器设备的说明书，操作手册等，有关文件（或复印件）的文件序号，名称，保存方式，管理负责人等。5.1.3仪器设备的损坏，故障，修理须作如下记录 (相关表格见表7) ： 日期，设备名称，设备标记号，维修内容（损坏或故障的表现、损坏故障的原因、修理人

33、员及单位、修理的结果、记录人员签名、质量负责人签名等）。5.1.4正常运转的仪器设备贴上绿色正常使用标识牌。有问题的仪器设备加贴明显的红色停用标识，标识上应有停用日期及原因；可搬动的仪器移至设备处报修，不可移动的设备原地使用布罩封存待修，直至修复校验后重新标识正常使用。5.1.5仪器设备的报废处理（报废申请表见表8）： 因使用寿命，损坏，故障导致仪器设备不能满足检测需要时，该设备即行报废。由管理人员填写报废申请，科质量负责人核实，设备科批准后由质量负责人在设备档案中签名注销。5.2仪器设备实行严格的分区专用。5.3使用的仪器设备应进行校准和检定，具体见SOP文件。5.4为保持仪器设备工作状态的

34、稳定，应对其进行定期的、必要的维护和保养，具体见SOP文件。5.5为了使扩增仪处于稳定的工作状态，在该电脑上不得使用非本室的外来软盘， 不能在电脑内加载其它程序和软件；在使用本室软盘进行资料备份时，需在报告系统电脑上预先杀毒方可使用。5.6非本室工作人员不得使用仪器。6 该程序的变动程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：检验科主任、室技术负责人起 草 人批 准 人生 效 日 期年 月 日表7 临床基因扩增检验实验室主要仪器设备相关文件一览表序号仪器名称厂家放置地点使用说明书产品合格证保修卡文件保存方式文件负责人备注1美菱电冰箱美菱股份有限公司试

35、剂准备区原件2可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司试剂准备区原件3可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司试剂准备区原件4可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司试剂准备区原件5可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司试剂准备区原件6紫外线消毒车江阴市光学仪有限公司试剂准备区原件7美菱电冰箱美菱股份有限公司样本准备区原件8紫外线消毒车江阴市光学仪有限公司样本准备区原件9高速台式离心机上海安亭科学仪器厂样本准备区原件10三用电热恒温水浴箱上海跃进医疗器械厂样本准备区原件11无菌净化工作台浙江大学净化设备厂样本准备区原件12可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司样本准备区原件13可调式移液器上海雷勃分析仪器有限

36、公司样本准备区原件14可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司样本准备区原件15可调式移液器上海雷勃分析仪器有限公司样本准备区原件16Line-Gene扩增仪杭州大和公司PCR扩增区原件17紫外线消毒车江阴市光学仪有限公司PCR扩增区原件表8 临床基因扩增检验实验室仪器设备损坏、故障 、修理记录日期仪器名称放置地点仪器标识损坏或故障的表现损坏或故障的原因修理单位修理人修理结果记录人签名质量负责人签名表9 临床基因扩增检验实验室仪器设备的报废申请表日期仪器名称放置地点仪器标识报废原因质量负责人核实签名设备处批准备注*医院临床检验中心SOP文件实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期

37、：2013/01/01临床基因扩增实验室Roche 480II实时荧光定量PCR仪标准操作程序 第 38 页 共 119 页Roche 480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）未修改1 目的：确保Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪正确及正常使用。2 适用范围：Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪。3操作人 * *4标准操作方法：4.1在打开电源以前，先确认以下内容：4.1.1确认电源线插头已插入电源插座中。4.1.2 Line-Gene与计算机及电源的连接是否可靠。4.2核酸扩增仪操作方法：4.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入“荧光定量PCR

38、检测系统”界面；4.2.2模板制好后，按模拟模板反应孔的样式放入扩增仪反应槽，注意阴阳性、阳性标准品、质控品位置，标本不够用空白管填补；4.2.3打开PCR仪电源开关,预热5分钟；4.2.4点击“运行”键，打开“运行”文件中“达安”试剂程序；4.2.3点击工具栏中的“样本资料”按钮，输入样本资料，并清空缺省样本号；点击“确认”保存样本资料信息，保存的文件名为：年月日+批次（批次用a、b、c表示）如20030516a 文件自动形成后缀名为*.flr4.2.4点击仪器运行的红色按钮“！”，仪器进入运行状态。4.2.5检测结果分析：a.程序运行结束后，系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存，在荧光

39、定量PCR检测系统界面单击“数据分析”键，进入结果分析界面。b.定量分析：1） 单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令，在分析方法选择中可选择样点拟合法。2） 样点数选择：样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点，系统根据选择的样点数，将被选中的样点拟合成直线，该直线与域值的交叉点即为CT值（仅适合于样点拟合）。3） 击“零点调整”，在弹出零点调整对话框进行设置手动调整：以设置的起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光强度稳定（用“达安”试剂在Line-Gene荧光定量扩增仪对标本及控制品4） 检测，通常起始及终止为5-15，结果较理想）。5） 单击“噪声容

40、限”，在基线和域值设置对话中设置基线位置。基线应设置在各样本噪声的上方并尽可能的底，对同一种试剂在各个实验的结果分析时基线设置尽可能相同。同一实验结果分析，基线设置不同CT值不同。6） 单击“定量分析”，在基线和域值设置对话框中设置域值位置。本批试剂的截距控制在422、斜率控制在-2.70.2、相关系数小于-0.98。设置完成后界面显示分析结果。（在每进一批试剂的时候，用本批试剂测定上一批稳定的试剂已测定过的控制品及阴阳对照，根据上批试剂测定的结果求出本批试剂在这种结果下的“截距”、“斜率”、“相关系数”范围；在用“本批试剂”进行实验时，本室其它人员判断结果，这些参数必须控制在此范围，这样结果

41、判断在本室才具一致性。每进购一批试剂后，在SOP文件中，这些参数也需调整。）4.3分析结果打印。4.4Line-Gene 基因扩增仪使用过后要及时记录（Line-Gene 基因扩增仪的使用记录见表9）5维护方法及注意事项：5.1 PCR仪属于精密电子仪器，应放在水平台上，PCR仪在运行的时候，室温应当控制在15至25之间，温度过高或过低均会引起内部的程控芯片或其它电子元件的不正常工作。5.2 PCR仪配有单独使用的ups稳压电源。PCR仪不能靠近水池、火炉、腐蚀性物质、强磁场等，均会影响仪器正常工作。5.3每次实验时，最好能将扩增仪的孔位全部放置样品管，若样品管少时可用空的样品管代替，以保证实

42、验田的一致性和重复性。5.4实验结束后应及时擦干孔内存在的水份，盖上机盖。5.5本仪器表面如有污迹，可用软布沾清洁膏擦拭干净。5.6每周五清洗样品槽一次。方法是用棉棒沾75%的乙醇清洗若干次，以有灰尘或其它残留物影响扩增效果。5.7每月末清洁热盖和反应孔。具体方法是：正常关机后，将反应槽取出，将热盖翻开，用浸透95%酒精棉棒擦拭反应孔和热盖，待乙醇挥发后再将热盖和反应槽安装好，热盖恢复原位。5.8荧光定量PCR检测系统软件的维护：5.8.1安装荧光定量PCR检测系统软件计算机进入Window98/2000/XP系统后，将荧光定量PCR检测系统安装光盘放入光驱,找到光盘根目录下的SETUP.EX

43、E双击它，进入设置程序荧光定量PCR检测系统。据屏幕提示进行操作即可完成荧光定量PCR检测系统软件的安装。5.8.2卸载荧光定量PCR检测系统软件：在【开始】/【设置】/【控置面板】菜单中单击“添加删除程序”项，选择“荧光定量PCR检测系统”，单击删除即可完成卸载荧光定量PCR检测系统.5.9Line-Gene 基因扩增仪的维护保养后要及时记录（Line-Gene 基因扩增仪的维护保养记录见表10）。6校准：Line-Gene 基因扩增仪校准工作需由专业工程师进行。除与仪器厂家达成协议以外，以实验判断仪器校准状态也可为何时进行仪器校准提供信息。通过对室内质控图的分析，及时发现系统误差的出现。经

44、过分析排除了试剂和人员误差后，应进行仪器状态校验实验：6.1使用标准化试剂作为校验试剂。6.2在仪器处于校准状态下，由固定人员用标准化试剂对102、103、104、106、标准品进行扩增实验。该实验在两个月应进行20次。分别计算标准曲线的斜率、截距、相关性的控制限。6.3每年6月、12月由固定人员进行上述实验，观察标准曲线的三个参数是否处在控制范围和102 标准品是否检出。6.4当102 标准品未检出、标准曲线的三个参数控制超出控制范围或仅出现后者时，先排除实验人员、试剂因素，再重复实验。如结果依然，联系厂家立即进行仪器校准。6.5当仅有102 标准品未检出时，检查实验全过程。再次上机检测10

45、2 标准品两枚。如仍未检出，则联系厂家进行仪器校准。6.6仪器经过校准后，重复该实验。结果归入仪器档案。6.7本程序的变动程序：本程序的变动，可由任一使用该文件的工作人员向主管负责人提出，主管负责人则召集与本制度相关的所有人员进行讨论，根据讨论结果是否通过，如通过则公布实施。附：Line-GenePCR扩增仪文件的创建：1.检测文件的创建：1.1在荧光定量PCR检测系统界面单击“运行”键，进入程序设置界面。单击“文件”菜单中的“新建”命令，（或单击工具栏中的“新建”按扭）。1.2单击“编辑”菜单中“用户信息”命令，（或单击工具栏中的“用户信息” 按扭），输入用户信息。1.3样本信息输入：1）“

46、编辑”菜单中的“样本资料”命令或单击工具栏中的“样本资料”按扭。2）“属性”、“性别”栏的输入：选中该栏中某行后单击该行，在弹出的下拉框内选择属性或性别。3）标准样本在浓度栏设置浓度值，同浓度值的标准只能设置一个。“浓度单位”栏输入：单击浓度单位的下拉键在下拉框内选择浓度单位，缺省项为“copyies/ml”。4）“名称” 栏的输入：选中该栏中某输入内容，单击“缺省样本列表”键，名称栏自动按1、2、333名称设置，其余栏全部清空。5）“样本编号”、“编号”栏的输入：选中该栏中某行输入号码，点击下一行，该行自动形成比上一行大一个值的号码，也可修改。6)“类型”、“临床诊断”栏的输入：选中该栏中某

47、行输入内容，点击下一行的内容，也可修改。7）“临床医师”、“送检科室”栏的输入：选中该栏中某行后单击该行，在弹出的下拉框内选择临床医师或送检科室。点击下一行（无输入内容时），该行自动形成上一行的内容，也可单击该行重新选择。8)“送检日期”，“采样时间”栏的输入：双击该栏中某行，在弹出的对话框显示当天日期，按Enter键输入该日期，或点击对话框左边的下拉键弹出日历界面，选择需输入的日期按Enter键输入，点击下一行（无输入内空时），该行自动形成上一行的内容，也可双击该行在日历界面重新选择。9）样本信息内容在打印报表时将会打印（打印时类型、样本编号、编号、姓名、年龄、性别、住院号、门诊号、病历号、

48、临床医师、送检科室、临床诊断、采样时间最多可选取10项打印），样本信息内容未输入，打印报表以缺省打印。1.4样本输入模板：单击“编辑”菜单中的“样本输入模板”命令。在样本输入模板中添加送检科室、临床医生内容。在样本信息输入时，送检科室、临床医师项的输入可选择样本输入模板中已添加的送检科室、临床医师内容。1.5设置检测通道、荧光强度增益：选择1通道，增益值须根据不同的试剂进行设置，定量分析，荧光强度初试值调整在70左右。1.6实验参数设置:1) 添加新程序名称并确认，最多可添加十个新程序，使用“删除”、“上移” “下移”键可对选中的程序进行编辑。2) 选择分析模式：单击插入键，在弹出的显示框内设

49、置各参数，最多可插入六个。分析模式选择定量分析时，单击采样模式栏的下拉键在弹出的下拉框内可选择“无”或“单次”。分析模式选择溶液曲线时，单击采样模式栏的下拉键在弹出的下拉框内选择“无”或“连续”。3) 设置循环数。1.7保存程序设置文件： 单击“文件”采单中的保存命令；如果要保存在另一个文件夹中，请找到并打开该文件夹，在“文件名”框中，键入文件名称，单击“保存”按扭。2.运行程序设置文件：2.1运行程序设置文件: 单击“运行”菜单中的“运行设置程序组”命令；单击工具栏中的“运行”按钮。2.2保存检测结果：运行程序设置文件时弹出检测结果保存对话框，如果要保存在另一个文件夹中，请找到或新建文件夹并

50、打开该文件夹，在“文件名”框中，键入文件名称，单击“保存”按扭。保存的文件名为程序设置文件名+日期+时间，其文件名的后缀为*.flr2.3检测结果保存设置完后，弹出运行界面，系统进行样本位置检测并弹出样本位置检测对话框。样本位置检测完成后系统运行已设置的程序。3.检测结果分析：3.1程序运行结束后，系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存，在荧光定量PCR检测系统界面单击“数据分析”键，进入结果分析界面。3.2定量分析：1) 单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令，在分析方法选择中可选择最大二阶倒数法或样点拟合法。2) 样点数选择：样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点，系统根据

51、选择的样点数，将被选中的样点拟合成直线，该直线与域值的交叉点即为CT值（仅适合于样点拟合）。3) 击“零点调整”，在弹出零点调整对话框进行设置。a)自动调整：以第一至第十循环荧光强度的平均值为零点。b）手动调整：以设置的起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光强度稳定。c）单击“噪声容限”，在基线和域值设置对话中设置基线位置（只适用于样点拟合法）。基线应设置在各样本噪声的上方并尽可能的底，对同一种试剂在各个实验的结果分析时基线设置尽可能相同。同一实验结果分析，基线置不同CT值不同。4) 单击“定量分析”，在基线和域值设置对话框中设置域值位置（设置域值只适用于样点拟合法）

52、。域值位置的设置应综合考虑相关系数、误差等参数，设置完成后界面显示分析结果.4.分析结果打印4.1单击“文件”菜单中的“设置打印模板”命令，在弹出的对话框内进行设置。（只适用于打印报表）4.2样本输入信息栏左面列出了全部样本信息项目，使用“添加”、“添加全部”“删除” “删除全部”“上移”“下移”键编辑需打印的样本信息及打印时各项的排列顺序。样本类型、样本编号、编号、姓名、性别、住院号、门诊号、临床医师、送检科室、临床诊断、采样时间等所需项目。4.3在打印栏内，选择参考浓度、参考CT值选项并输入数值，打印时显示参考标准。4.4在打印栏内,输入最大浓度、最小浓度、打印时当某一样本计算浓度大于最大

53、浓度或小于最小浓度将显示最大浓度或最小浓度值。4.5在打印选项栏内,选中结果判断、打应曲线、计算浓度、CT值后在打印报表内容中将显示结果判断、荧光强度/循环数曲线、计算浓度、CT值。4.6在打印选项栏内,设置每项打印两个样本时选中打印注释选项可打印注释对话框内输入的内容。4.7打印模板设置完成后按“确定”键，保存设置。4.8单击“文件”菜单中的“打印报表”命令, 在弹出的对话框内进行设置,单击“确定”即可打印。起 草 人批 准 人生 效 日 期年 月 日表10 临床基因扩增检验实验室Roche 480II实时荧光定量PCR仪使用记录日期检测项目模板数量开机时间运行时室温运行情况质量控制情况使用人签字