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1、利用细胞扩增腺病毒操作步骤（1）在10培养皿或培养瓶中加入培养X细胞。（2）取0.首次扩增的病毒保存液，加入至，混匀，这样稀释应得到的值约为5（）移去培养液，小心加入病毒混合液，切勿破坏细胞单层，十字形慢慢晃动次，7孵箱中培养分钟。（4）加入90（5）再培养小时，这时在溶液中大约有XX个病毒颗粒，进行测定以估计病毒颗粒。注：如果此时得到的病毒量已足够，可立即进行病毒滴度测定。收集细胞，X离心分钟沉淀细胞，去上清后加入最小体积（一般为原始体积的即）病毒保存溶液重悬细胞。77冻融次，台式离心机上以最大速率离心去除细胞碎片，收集上清，然后进行病毒滴定。（6）-270/7冻融次。（7）转入1无菌离心管
2、中，台式离心机上以最大速率离心分钟，收集上清冻存于7或7o（8）3个1培养瓶中各加入细胞进行培养。（）将细胞裂解液上清加入中，混匀。移去细胞培养液，每瓶小心加入混合液，十字形慢慢晃动混匀次，7孵箱中培养分钟。此时值约为（0加入至。（11）再培养小时。此时培养液病毒量约为XX1若需要，进行测定以估计病毒滴度。注：此时如果病毒量已足够，则可立即进入病毒滴定步骤。X离心分钟收集细胞，弃上清，加入原始体积的溶液重悬细胞。-270/377冻融3次，台式离心机上以最大速率沉淀细胞碎片，收集上清，进行病毒滴定。（12）移入5离心管中，台式离心机上最大速率离心分钟，取出上清保存。（13）30瓶1培养瓶中每瓶各加入细胞。（4将细胞裂解液上清加入混匀，从培养瓶中移去培养液，加入混合液感染细胞，十字形缓慢晃动次混匀，7培养分钟。此时值约为。（5加入至瓶。（16）再培养小时，此时约有XX个病毒。若需要，进行测定估计病毒滴度。如果要收集病毒颗粒，先收集被感染细胞，然后重悬在中。77冻融次，离心沉淀细胞碎片。此时中XX个病毒颗粒，浓度为XX/然后滴定病毒储存液，或者用标准的氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。
利用293T细胞扩增腺病毒操作步骤
