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1、实验九、十一、目的要求v1.了解细菌的一般生化反应；v2.了解细菌的生化鉴定方法其原理。 二、实验材料菌种：大肠杆菌；枯草杆菌；变形杆菌；自己划线分离的大肠杆菌。培养基：糖发酵培养基（紫红色液体）H2S试验用培养基（固体、试管）蛋白胨水培养基(吲哚实验）(液体）淀粉水解用培养基（固体、平板）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红实验）(液体）三、实验原理及方法 由于各种微生物的新陈代谢类型不同，因此，对各种物质利用后所产生的代谢产物也不同，我们可以用化学反应来测定微生物的代谢产物，这种反应称为生化反应。生化反应常用来鉴别在形态或其它方面不易区别的微生物，例如：肠道细菌中，大肠杆菌和伤寒杆菌，二者在形态上
2、不易区分，但前者能发酵乳糖，后者不能。因此可以从它们能否发酵乳糖来区别它们，所以微生物的生化反应是微生物分类鉴定的重要依据之一。微生物的生理生化反应原理1 1、糖发酵试验（含碳化合物的分解利用）v绝大多数细菌都能利用糖类作为能源及碳源，但是细菌的分解糖类的能力上有相当大的差异。v发酵后产生的有机酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 （溴甲酚紫变色范围黄色，紫色） v发酵后产生的气体： 甲烷、 H2 、 CO2等（杜氏小管内有气泡）微生物的生理生化反应原理2 2、产硫化氢试验某些菌能分解含硫的有机物或无机物产生硫化氢（H2S），H2S遇金属盐类，如铅盐、铁盐等，则形成黑色的硫化铅或硫化铁的沉淀物。从而可断定
3、H2S的产生与否。本实验采用含有柠檬酸铁铵的培养基穿刺培养，看是否有黑色沉淀。微生物的生理生化反应原理3 3、甲基红试验v某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基变酸，加入培养基中的甲基红指示剂（红色）（黄色） ，可使培养基由原来的桔黄色变为红色，即甲基红阳性反应。微生物的生理生化反应原理4 4、淀粉水解试验（生物大分子的分解利用）v微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸收利用。淀粉遇碘液呈蓝色，但在淀粉被细菌水解的区域，遇碘不再呈蓝色，这可作为细菌产生淀粉酶的证据。 结果：v 有水解圈淀粉水解实验阳性；v 无水解圈淀粉水解实验
4、阴性. .用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划“+”字形接种（或点种），另取少量大肠杆菌在平板的另一边接种，在各培养皿底部标明菌名和组别。置37温箱中培养1620小时。5 5吲哚试验（含氮化化合物的分解利用） 吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。微生物的生理生化反应原理四人一组操作配制各类培养基用无菌操作技术接种3737培养24h24h观察并分析实验结果试验名称被接菌种1被接菌种2被接菌种3空白对照1. 糖发酵大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌不接种2. H2S试验大肠杆菌自备大肠杆菌变形杆菌不
5、接种3. 甲基红试验大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌不接种4. 淀粉水解实验大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌5. 吲哚试验大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌不接种接种方案.糖发酵试验：经培养后，指示剂呈黄色者表示为性，同时观察小套管中有无气泡产生。“+”+”表示产酸；“”表示产酸产气；“-”-”表示阴性。2S试验：培养后取出观察，看有无黑色沉淀产生. .有“+”+”3.3.吲哚试验：在培养液中先加入乙醚约1 1毫升（使呈明显的乙醚层），充分振 荡，使吲哚溶于乙醚中，静置片刻，使乙醚层浮于培养基的上面，这时再沿 管壁慢慢加入吲哚试剂5 51010滴，观察有无红色出现。有红色环出现者为阳 性，黄色者为阴性。 4 4、淀粉水解试验：打开皿盖，滴加少量碘液于培养基上，轻轻旋转培养皿，使 碘液均匀铺满整个平板。如果在菌周围出现无色透明圈，说明淀粉被水解。 透明圈大小说明该菌水解淀粉能力的大小。5、甲基红试验（MRMR试验）：沿管壁加入甲基红指示剂3 34 4滴上层呈红色者为 阳性。 实验结果试验名称糖发酵H2S试验甲基红试验淀粉水解实验吲哚试验大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌变形杆菌空白对照试验结果：“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应； “ ”表示产酸产气（糖发酵）思考题v细菌的生化反应试验意义何在？
实验八九微生物生理生化反应
