胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理

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1、胶回收 DNA 试剂盒的原理和方法一 原理1、硅胶膜捕获核酸的原理是什么？ 利用核酸在裂解液下与硅胶膜特异结合，在洗脱液条件下被洗脱的原理。2、我们一般都用硅胶膜来浓缩DNA片断，尤其是PCR产物，那硅胶膜能对RNA吸附吗？ 效率有多少？ 可以，在酸性条件下可以结合，国外公司试剂盒所用大多是此原理。效率中等。3、硅胶膜对双链DNA有吸附作用，那对单链DNA有吸附作用吗？对DNA/RNA杂合链能 吸附吗？吸附效率分别有多少？对单链DNA有吸附作用。DNA/RNA杂合链能吸附，但在裂解条件下DNA/RNA可能会解 离，可以尝试一下。另外可以尝试用 Desaltfast200 快速脱盐试剂盒，对 D

2、NA/RNA 影响较 小，纯化速度快。二 一般试剂盒的用法1 试剂盒的产品包括溶液1（融胶液）溶液II（洗涤液）（第一次使用前按照说明加入无水乙醇）溶液III（洗脱液）DNA 纯化柱废液收集管2 使用方法（按照说明，不同公司产品操作方法有差异这里以其中一种为例）a 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内用 1ml 枪头捣碎。b 加入等体积的溶液I （如胶为lOOmg，则加100微升溶液I），vortex或颠倒混匀。c 50-60C水浴加热约10分钟至胶全融，期间，需vortex或颠倒混匀3-4次，以加速凝胶 融解。果胶碎片较小， 3-5 分钟即可全融，凝胶碎片较大则需较长时间，胶全融后至少 再

3、在50-60C水浴加热2分钟。50-60C间任一温度都适合于本试剂盒。如果DNA片断 大于5kb,宜颠倒混匀。Vortex容易导致大片断DNA断裂。d 加入到 DNA 纯化柱内，室温放置 1 分钟。如果体积较大， DNA 纯化柱内容纳不下， 可以把部分样品加入到纯化柱内，经离心处理后，再加入剩余的样品继续处理。e 最高速（16000g，约12000-14000rmp左右）离心1分钟，倒弃收集管内的液体。注意：这一步一定要达到16000g，较低离心速度会导致回收效率下降。f 在DNA纯化柱内加入700微升溶液II,室温放置1分钟。g 最高速离心 1 分钟，洗去杂质。倒弃收集管内的液体。h 再加入

4、500微升溶液II,最高速离心1分钟，进一步洗去杂质。倒弃收集管内的液体。i 最高速再离心 1 分钟，除去残留液体并让残留的乙醇充分挥发。j.将DNA纯化柱置于1.5毫升离心管上，加入30微升溶液III至管内柱面上，放置1分 钟。用 1.5ml 离心管作为收集管。溶液 III 需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化 柱吸收。如果不慎将溶液III沾在管壁上，一定要震动管子，使液体滑落到管底，以便 被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液III，但是水的pH应不小于 6.5。如需得到较高浓度的DNA，可以只加20微升溶液III，但产量会略有下降。放置 较长时间例如 3-5 分钟，会对提供产量略有帮助。k.最高速离心1分钟，所得液体即为高纯度DNA。