水蛭粉中天然水蛭素的测定方法

《水蛭粉中天然水蛭素的测定方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《水蛭粉中天然水蛭素的测定方法（2页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、产品中天然水蛭素的测定方法中国药典2010 年版1部规定的测定方法）方法提要（凝血酶滴定法）水蛭素能与凝血酶直接结合，使凝血酶失活，其结合比例为1:1，抗凝血酶单 位以ATU表示，即每消耗一个凝血酶单位（U）相当于一个抗凝血酶单位（ATU）。 仪器设备0.75cmX10cm小试管；微量移液器（1500 “1、15ml）；45 度角试管架；秒表；恒温水浴箱；分析天平，感量0.0001克；pH测试仪；普通玻璃仪器。试剂（人）纤维蛋白原；凝血酶；0.2 mol/L的Tris-Hcl缓冲液（pH7.4）； 0.2mo1/L三羟甲基氨基甲烷溶液；0.1mo1/L盐酸溶液；氯化钠； 0.9生理盐水。溶液的

2、配制1、Tris-HC 1缓冲液（pH7.4）的配制将0.2mo1/L三羟甲基氨基甲烷溶液约25 ml、0.1mo1/L盐酸溶液约40ml和氯 化钠0.8766g混合、溶解，调节pH值至7.4,然后加蒸馏水定容100ml（含0.15 mol 氯化钠）即成Tris-HCl缓冲溶液，备用。2、0.5（人）纤维蛋白原的配制用上述已配制好的Tris-HCl缓冲溶液溶解（人）纤维蛋白原，配成0.5%纤维 蛋白原溶液（以凝固物计， 现用现配），备用。3、凝血酶溶液的配制用0.9%生理盐水配制成凝血酶浓度为40 U/ml的溶液（现用现配），备用。分析步骤取lg样品粉末（过三号筛），精密称定，精密加入0.9%

3、氯化钠溶液5ml，充 分搅拌，浸提30分钟，并时时振摇，离心，精密量取上清夜100M 1置试管中，加 入0.5 %（人）纤维蛋白原溶液2001、摇匀，用移液器在试管内的溶液中吹一小 气泡作为观察标记（注意避免产生其它气泡），接着加入已配制好的凝血酶溶液， 轻轻摇匀（35s，下同）、计时，然后将试管插入位于37C恒温水浴箱的45度 角试管架中，轻轻旋转并观察气泡随液面转动情况，如气泡随液面转动即为反应 终点，否则按每分钟滴加5 1凝血酶溶液至凝固（如滴加凝血酶溶液次数超过5 次不凝固者应稀释样品，直至在35次为止）。记录消耗凝血酶溶液的体积。 结果表述水蛭素含量按下列公式计算：C XV 样品中水蛭素含量= C XV22 式中水蛭素含量单位为 ATU/g；C凝血酶溶液的浓度， U/ml；C供试品溶液的浓度， g/ml；2V 消耗凝血酶溶液的体积， l；1V 供试验品溶液的加入量， l；2