遗传学实验参考.

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1、遗传学实验参考实验一有丝分裂(洋葱根尖有丝分裂染色体标本制备及观察)实验原理：有丝分裂是细胞均等增殖的过程,是体细胞分裂的主要方式. 在有丝分裂过程中 . 细胞内每条染色体都能复制一份,然后分配到子细胞中, 因此两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目, 形态和性质上均是相同的，在各种生长旺盛的植物组织中均存在着有丝分裂。分生组织固定解离染色压片观察（间期、前期、中期、后期、末期）材料洋葱或大蒜、 凤眼莲 或其它种子根尖方法：(1)取材 : 清水培养 根、当根长约2 厘米时, 从顶端剪取0.5 1 厘米长的一段,2、预处理：药物处理（秋水仙素0.1%） 12-24H 或冷冻处理（冰箱）(2) 固定

2、 : 使用 卡诺氏固定液 ( 甲醇 : 冰醋酸 =3:1) 。一般在室温下 , 材料固定 1 24 小时（ 40分钟 ）, 如果材料比较大可以适当延长时间。固定完毕后将根尖取出, 再用吸水纸将液体吸干。如暂时不用，可将根尖放入酒精中, 在 4冰箱中保存待用, 保存时间不能超过两个月。(3) 解离 : 无论酸解还是酶解都可以很好的软化细胞壁 , 使细胞分散开。酸解比较经济 , 效果也很好。将根尖取出 用 1mol/L 的盐酸解离 , 在 60水浴恒温处理 4 分钟左右 。时间要掌握好 , 如果时间过长 , 则易使分生区和伸长区脱节 , 既不利于操作又会影响染色 : 过短则解离不足, 压片时细胞不

3、易分散 , 互相重叠 , 不易观察。(4) 染色 : 在各种碱性染料中 , 卡宝品红 ( 石炭酸品红 ) 和苏木精等染色剂、 0.2龙胆紫溶液 在此实验中的效果都比较好。 用镊子将大蒜根尖取出来 , 在清水中漂洗后放在载玻片上 , 用镊子将根尖前端乌白色的根冠去掉 , 用镊子尖把根尖弄碎 , 用卡宝品红染色 , 这样可以使大多数细胞都充分的 染色 , 3 5 分钟 后 , 盖上盖玻片 , 用拇指压盖玻片 , 使细胞分散开来 , 用吸水纸吸干多余的液体 , 即可观察。(5) 观察 : 用低倍镜在生长点附近可观察到已被染成淡紫色的、 单层、排列紧密的呈正方形的细胞。换上高倍镜进行观察，即可找到处于

4、细胞分裂间期和有丝分裂前期、中期、后期、末期的细胞，可清晰地辨认出有丝分裂各时期染色体行为的变化植物多倍体诱发实验多倍体普遍存在于植物界， 目前已知道被子植物中有 1/3 或更多的物种是多倍体，除了自然界存在的多倍体物种之外，又可采 用分为物理的（温度剧变、机械损伤、各种射线处理等）和化学方法的（各种 植物碱、麻醉剂、 植物生长激素等）诱导方法。在诱发多倍体方法中，以应用 化学药剂更为有效。如秋水仙素、萘嵌戊烷、异生长素、富民农等，都可诱发多倍体，其中以秋水仙素效果最好，使用最为广泛 。其中，秋水仙素是诱导多倍体的最有效的方法之一。秋水仙素 具有麻醉作用，对植物种子、幼芽、花蕾、花粉、嫩枝等可

5、产生诱变作用。它的主要作用是抑制细胞分裂时纺锤体的形成， 使染色体不走向两极而被阻止在分裂中期， 这样细胞不能继续分裂， 从而产生染色体数目加倍的核。 若染色体加倍的细胞继续分裂， 就形成多倍性的组织， 由多倍性组织分化产生的性细胞，所产生的配子是多倍性的， 因而也可通过有性繁殖方法把多倍体繁殖下去。多倍体已成功地应用于植物育种， 用人工方法诱导的多倍体， 可以得到一般二倍体所没有的优良经济性状，如粒大、穗长、抗病性强等。三倍体西瓜、三倍体甜菜、八倍体小黑麦已在生产上应用。二、实验目的1了解人工诱导多倍体的原理，初步掌握用秋水仙素诱发多倍体的方法2了解 植物多倍体细胞染色体加倍的特点实验器具和

6、药品； 洋葱鳞茎和 其它种子 。0.2 秋水仙素溶液， 1molL HCl 溶液 、改良苯酚品红溶液等。实验步骤1待新长出的不定根长约 1.5 2mm左右时，移到盛有秋水仙素溶液的培养皿中，直到根尖膨大为止（或冰箱冷冻处理）。再恢复生长 24 小时，诱导后细胞为多倍体细胞。2取下已膨大的根尖或幼芽，水洗后进行常规制片（固定，保存，水洗，酸解，水洗，染色，压片等过程），染色时滴上一、二滴改良苯酚品红染液， 10 15 分钟以后压片。3观察多倍体细胞染色体的形态并统计其染色体数目。观察与鉴定处理后的植株和未处理植株在外部形态上和结构上， 是有区别的。常采用的方法是观察和比较两者气孔的大小。 将叶面

7、表皮撕下在显微镜下观察， 多倍体叶面气孔比二倍体大很多， 从外部形态上加倍后生长的植株比二倍体高大， 叶片肥厚。在形态观察的基础上，可进一步进行镜检观察染色体数目的变化。六 注意事项：1. 秋水仙素处理时间应根据供试材料的细胞周期而定， 当处理时间介于供试材料细胞周期的一倍到两倍之间时， 可观察到细胞由二倍体变为四倍体， 当处理时间多于供 试材料细胞周期的两倍以上时，供试材料的细胞可从四倍体变为八倍体，因此，在培养多倍体细胞时，应注意用秋水仙素的处理时间；此外，秋水仙素的浓度对处理 效果也有影响，应注意掌握。2. 多倍体细胞中染色体的形态有两种，一种为一条染色体含有一条单体，另一种为一条染色体

8、含有两条单体，应注意观察，并思考其形成原因。3. 秋水仙素为剧毒药品，实验中应注意不要将药品沾到皮肤上，眼睛中。如果沾到皮肤上，应用大量自来水冲洗。附： 0.2 0.4%秋水仙素的配制：取秋水仙素 1 克（先用少许 95%酒精助溶），溶于 250500 亳升蒸馏水中，配成 0.2 0.4%秋水仙素溶液。亦可制成较高浓度的母液，放入棕色玻璃瓶内，用时再稀释到所需的浓度。五、实验说明本实验采用种子浸渍法。处理种子时，可先在一定浓度秋水仙素中浸种 24 小时左右，在铺有滤纸的器皿上浸渍种子，再注入 0.1 0.025 浓度的秋水仙素溶液，为避免蒸发宜加盖并置于暗处，放入 20培养箱中，保持适宜的发芽

9、温度，干燥种子处理的天数应比浸种多 1 天左右。一般发芽种子处理数小时至三天，或多至十天左右。对于种皮厚发芽慢的种子，应先催芽后再行处理。已发芽的种子宜用较低的浓度处理较短的时间， 秋水仙素能阻碍根系的发育， 因而最好能在发根以前处理完毕。处理后用清水冲洗，移栽于盆钵或田间。染色体加倍后必须进行鉴别。 同源多倍体主要是根据形态特性来判断， 如叶色、叶形及气孔和花粉粒的大小。最为可靠的方法，是待收获大粒种子后，再将这些大粒种子萌发，制片根尖压片，然后检查细胞内的染色体数目，只有染色体数目加倍了，才能证明植株已诱变成多倍体。六、实验步骤（一）把玉米 2n=20（或大麦 2n=18、水稻 2n=24

10、）种子浸在 0.1 秋水仙素溶液 24 小时。（二）用自来水冲洗23 次。（三）将萌发种子移到盛有0.025 秋水仙素溶液润湿了吸水纸的培养皿里。（四）置入 20培养箱，培养发芽。（五） 48 小时后取出幼苗。（六）用自来水缓缓冲洗幼苗。（七）把处理后的幼苗栽种在大田或盆钵内。（八）同期播种未经处理的玉米种子作为对照。（九）田间给以良好管理。七、实验结果鉴定多倍体植物1. 制作四倍体玉米、二倍体玉米根尖细胞压片， 检查染色体数目 。2. 观察四倍体玉米、二倍体玉米表皮 细胞气孔的大小 。（1）在四倍体玉米叶的背面中部划一切口，用尖头镊子夹住切口部分，撕下一薄层下表皮，放在载玻片的水滴里，铺平，

11、盖上盖玻片，制成表皮装片。（2）按上述同样方法制作一张二倍体玉米的表皮装片，作为对照。（3）镜检比较四倍体与二倍体 气孔和保卫细胞的大小 ，用测微尺测量记载其大小。3. 观察比较 花粉粒的大小（1）从四倍体、二倍体玉米植株上分别采集花粉。（2）将采集到的花粉分别浸入45冰醋酸。（3）用滴管分别各取一滴花粉粒悬浮液，移到载玻片上。（4）滴上碘化钾溶液，盖上盖玻片，制成花粉粒制片。（5）镜检四倍体及二倍体玉米花粉粒大小。（6）用测微尺测定并记载其大小。在植物中多倍体的植株比正常二倍体植株茎粗、叶大、花大、果大、矮生，成熟迟，气孔大、气孔密度小、花粉粒大、叶片肥厚实验二减数分裂一、实验原理：减数分裂

12、是一种特殊方式的细胞分裂， 仅在配子形成过程中发生 。这一过程的特点是： 连续进行两次核分裂， 而染色体只复制一次， 结果形成四个核，每个核只含单倍数的染色体，即染色体数减少一半，所以称作减数分裂。另外一个特点是前期特别长，而且变化复杂，包括同源染色体的配对、交换与分离等。二、实验目的： 1. 了解动、植物的生殖细胞的形成过程。2. 掌握制片方法。三、实验材料蚕豆（ Viciafaba ）花蕾蝗虫精巢四、实验器具和药品1. 用具：镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，大培养皿，立式染缸，酒精灯，量筒，吸水纸，显微镜。2. 药品：无水乙醇，冰醋酸，洋红（ carmine ），甘油，松香石蜡。Carnoy

13、 固定液：无水乙醇3 份，冰醋酸 1 份。醋酸洋红：45醋酸 100 毫升，加洋红 1 克，煮沸（沸腾时间不超过 30 秒），冷却后过滤即成。也可以再加 1 2铁明矾水溶液 5 10 滴，色更暗红。封蜡：用等量的松香（ balsam）和 52石蜡加热混合而成，所以又称松香石蜡。五、实验说明在植物花粉形成过程中，花药内的一些细胞分化成小孢子母细胞（ 2n），每个小孢子母细胞进行二次连续的细胞分裂 （第一次减数分裂和第二次减数分裂） 。每一小孢子母细胞产生四个子细胞， 每个子细胞就是一个小孢子。 小孢子内的染色体数目是体细胞的一半（图 1-1 ）。在动物的有性生殖过程中， 也有一个由双倍体到单倍体

14、的减数过程。 动物的精巢分化出精母细胞，精母细胞减数分裂，形成单倍染色体的精子。在适当的时机采集植物的花蕾或动物的精巢， 经固定、染色压片后， 就可以在显微镜下观察到细胞的减数分裂。 整个减数分裂可分为下列各个时期。 下面图 1-2 至图 1-9 是以雄性雏蝗（ Chorthippusbrunmeus ）的减数分裂各个时期的照片。第一次减数分裂前期 细线期：第一次分裂开始， 染色质浓缩为几条细而长的细线。 每一染色体已复制为二个单体，但在显微镜下还看不出染色体的双重性。偶线期： 染色体形态与细线期没有多大变化，同源染色体开始配对。粗线期：同源染色体配对完毕， 这种配对的染色体叫双价体， 每个双

15、价体含有四个染色单体，但仅有两个着丝粒。染色体继续短粗。双线期： 配对的同源染色体开始分开。由于染色单体间起过交换， 同源染色体有交叉现象。 染色体螺旋化程度加深。浓缩期：又叫终变期 ，交叉向染色体端部移动，交叉数减少，染色体变得更短粗。浓缩期末核膜消失。中期各个双价体排列在赤道上，纺锤体形成，两个同源染色体上的着丝粒逐渐远离。双价体开始分离。染色体数仍为 2n，但每一染色体含有两个染色单体。后期两条同源染色体分开， 分别移向两极。 每一染色体有一着丝粒， 带着两个染色单体。每一极得到 n 条染色体。染色体数已减半。末期染色体解旋，又呈丝状，核膜形成，胞质分裂，成为二个子细胞。间期在第二次分裂

16、开始以前，两个子细胞进入间期。但有的植物如延龄草（ Trillium ）和大多数动物不经过末期和间期， 直接进入第二次减数分裂的晚前期。第二次减数分裂前期染色体缩短变粗， 染色体开始清晰起来。 每个染色体含有一个着丝粒和纵向排列的两条染色单体。前期快结束，染色体更短粗，核膜消失。中期染色体排列在赤道面上，每个染色体含一个着丝粒、两条染色单体。两条染色单体开始分离。 此时细胞的染色体数为n，每一染色体有两条染色单体。后期两条染色单体分离，移向两极，每极含n 条染色体。末期染色体逐渐解螺旋，变为细丝状，核膜重建，核仁重新形成。胞质分裂，各成为两个子细胞。减数分裂结束，一个细胞经减数分裂形成四个子细

17、胞，每个子细胞中只有 n 个染色体。因为细胞分裂两次，染色体只复制一次。六、实验步骤（一）蚕豆花的观察取材：春季花序嫩绿饱满、总苞光滑（在分裂高峰期）1. 采集刚现蕾的花序置于固定液内固定三小时后，换入 70的乙醇中。若需保存较久，可放在 70乙醇一份、甘油一份的溶液中。2. 取已固定好的花序，按其花蕾大小，排列在小培养皿中。3. 剥开花蕾（先取中等大小的花蕾）取出花药，放在载玻片上。4. 加一滴醋酸洋红在花药上。5. 加上盖玻片，上面再放吸水纸，用拇指适当加压，把周围的染色液吸干。6. 用封蜡封片，作成临时标本。7. 显微镜下观察。（二）蝗虫精巢的观察1. 随蝗虫物种的不同， 采集时间有变化

18、。 泉州地区一般在四月至十月都可采到蝗虫。2. 采集方法可用手捉或用扫网捕捉。 如蝗虫喜温暖， 可在十月左右， 在晴天阳光下的草地上用扫网捕捉。3. 用镊子夹住雄虫尾部， 向外拉。可见到一团黄色组织块， 这就是蝗虫的精巢。剔除精巢上的其它组织， 将其放到 Carnoy 固定液中固定 1.5 2 小时，再放入 70酒精溶液中。4. 将醋酸洋红滴在染色板内，取固定好的精巢放入染液中染色十五分钟以上。5. 用解剖针从精巢上挑取几条丝状物 （精细管）放在载玻片上，加一滴染液，压片。6. 用封蜡封片，作成临时标本。7. 显微镜下观察。（三）制做永久片上述压片所得到的片子，只能做临时观察，要长期保存时，可

19、做永久片。步骤如下：1. 用玻棒沾一点甘油蛋白（甘油 1 份+新鲜鸡蛋白 1 份）在载玻片上，用手指涂匀。将载玻片在酒精灯上烘一下（ 1 3 秒）。2. 挑取一条已染色的精细管，加一滴染液在载玻片上，加盖玻片，压片。3. 压片后在酒精灯上烘一下，很快掠过，约 56 次。4. 用封蜡封片。5. 在显微镜下观察。6. 如有分裂相多、染色良好的片子也可制作永久标本，方法如下：皿内置一短玻棒，倒入约 2/3 的固定液。将选好的片子剔除封蜡， 翻过来（有材料的面向下），一端搭在玻棒上，在固定液中浸泡。待盖玻片自然脱落后，与载玻片一起轻轻移入以下各缸：加 Eupral 一滴，封片。贴上标签。七、实验结果绘

20、制观察到的染色体图，同时也可拍摄显微照片。实验三、果蝇的形态生活吏一、教学基本要求：1、 能够辨别果蝇雌雄性别及常见突变型。及实验中的处理方法和技术。2、 掌握实验果蝇的饲养以目的和要求 果蝇具有生活史短、 繁殖率高、 饲养简便等特点通过这一实验 , 可以让学生了解果蝇生活史及各个阶段的形态特征变型的特征，掌握实验果蝇的饲养 , 以及实验的处理方法和技术,是研究遗传学的好材料, 雌雄性别特征，常见突, 为果蝇的杂交实验做准备。.实验原理果蝇具有生活史短、繁殖率高、饲养简便等特点，是研究遗传学的好材料，尤其在基因分离、连锁、交换等方面，对果蝇的研究更是广泛而充分。 雄蝇体型较小 , 末端钝而圆

21、. 颜色深（黑斑） , 腹背面有 4 个腹片 , 腹背面的有 3 条黑色条纹第一对足的跗节前端有性梳 , 而雌蝇体型较大 , 末端尖，颜色浅，腹背面的有 5 条黑色条纹。腹面有 6 个腹片，无性梳。材料和方法1、生活史观察：卵、幼虫、蛹、成虫。果蝇生活史长短及决定因素。2、果蝇的麻醉及性状观察方法：麻醉瓶、乙醚。3、雌雄成蝇的区别：腹部背面、体型、腹部形状、第一对前足跗节。4、果蝇常见突变型的形态特征：（野生型）、（白眼）、（残翅、黑檀体）、（小翅、白眼、焦刚毛5、果蝇的饲养：培养瓶、高压锅、培养基。步骤果蝇（ Drosophila melanogaster）的饲养一、果蝇的生活史果蝇属于昆虫

22、纲，双翅目，与家蝇是不同的种。它的生活史包括卵幼虫蛹成虫。果蝇的生活周期长短与温度关系很密切，30以上的温度能使果蝇不育和死亡，低温则使它生活周期延长，同时生活力也减低，果蝇培养的最适温度2025。从表中可以看出25时，从卵到成虫约10 天；在25时成虫约活15 天。果蝇一般是培养在恒温箱内，盛夏时，要注意降温。果蝇有雌雄之分，幼虫期区别较难，成虫区别容易（图1）。雄性的腹部环纹5 节，末端钝而圆，颜色深。第一对脚的跗节前端表面有黑色鬃毛流苏，称性梳（sexcombs）。雌性腹部环纹7 节，末端尖，颜色浅，跗节前端无黑色鬃毛流苏。二、果蝇的繁育果蝇在水果摊或果园里常可见到，但它并不是以水果为生

23、，而是食生长在水果上的酵母菌，因此实验室内凡能发酵的基质，均可作为果蝇饲料。目前果蝇饲料较好的配方如下：A：糖6.2 克，加琼脂0.62 克，再加水38 毫升，煮沸溶解。B：玉米粉8.25 克，加水38 毫升，加热搅拌均匀后，再加0.7 克酵母粉。A 和 B 混合加热成糊状后，加0.5 毫升丙酸，即可分装到培养瓶中。除了以上的饲料外，常用的还有米粉饲料和香蕉饲料。1. 米粉饲料的配制：琼脂 0.9 2.5 克加入 100 毫升水中，加热煮沸溶解；再加红糖， 待溶解后将 8 克米粉（或麸皮）倒入正在煮沸的琼脂红糖溶液中去，不断搅拌煮沸数分钟，待成稀粥状后即可分装使用。10 克2. 香蕉饲料配制：

24、将熟透的香蕉捣碎，制成香蕉浆（约50 克）。将1.5 克琼脂加到48毫升的水中煮沸，溶解后拌入香蕉浆，再煮沸后即可分装。以上两种饲料容易生霉菌，必要时需加少量防霉剂。培养果蝇的饲养瓶，常用的有牛奶瓶，大中型指管，用纱布包裹的棉花球作瓶塞（有条件的地方可改用泡沫塑料作瓶塞）。饲养瓶先消毒，然后倒入饲料（ 2 厘米厚），待冷却后，用酒精棉擦瓶壁，然后滴入酵母菌液数滴，再插入消毒过的吸水纸，作为幼虫化蛹时的干燥场所。三、果蝇处理对果蝇进行检查时，可用乙醚麻醉，使它保持静止状态。 因果蝇对乙醚很敏感，易麻醉，麻醉的深度看实验要求而定 （作种蝇以轻度麻醉为宜 ，做观察可深度麻醉， 致死也无妨。果蝇翅膀外

25、展 45角表示已死亡 ）。麻醉后的果蝇放在白瓷板上检查， 完毕后倒入煤油或酒精瓶中（死蝇盛留器）。四、原种培养在作为新的留种培养时，事先检查一下果蝇有没有混杂，以防原种丢失。亲本的数目一般每瓶 5 10 对，移入新培养瓶时，须将瓶横卧，然后将果蝇挑入，待果蝇清醒过来后，再把培养瓶竖起，以防果蝇粘在培养基上。原种每 24 周换一次培养基（按温度而定），每一原种培养至少保留两套。培养瓶上标签要写明名称，培养日期等，作为原种培养，可控制到1015，培养时避免日光直射。五、实验交配果蝇雌体生殖器官有受精囊，可保留交配所得的大量精子，能使大量的卵受精，因此在做品系间杂交时，雌体必须选用处女蝇。雌蝇孵出后

26、几小时内不会交配，所以把老果蝇除去后， 几小时内所收集到的雌体必为处女蝇。 由于雌蝇两天内不产卵， 所以雄蝇可直接放到处女蝇培养瓶中 （也可以放在盛有食物的小瓶中暂养两天， 直到雌蝇将要产卵时放回培养瓶中） 。贴好标签， 写好交配日期， 当子蝇即将孵化出来以前，也就是说23培养 7 9 天，倒出亲本，以免和亲代混淆。另一方面应该注意，杂交的 F1 代的计数安全期是自培养开始的 20 天内（因为再晚些时， F2 也可能有了）。收集处女蝇： 由于雌蝇生殖器官中有贮精囊，一次交配可保留大量精子，供多次排卵受精用，因此做杂交实验前必须收集未交配过的处女蝇 。由于孵化出的幼蝇在 12 小时内（更可靠是

27、8 小时）不交尾，因此必须在这段时间内把、蝇分开培养，所得的蝇即为处女蝇。附注：果蝇的价值果蝇容易饲养，生活周期短（约 2 星期），突变性状多、唾腺染色体大，适宜于用作科学实验材料，尤其受到遗传学家的“宠爱” 。平时常用于药品检验、环境保护、食品卫生、职业防护和肿瘤研究等方面。在世界卫生组织规定的毒理学 8 个主要检测项目中，果蝇检测是其中重要的一项。哪些食品和药物中含有致癌、致畸、致基因突变的物质？只要通过果蝇新品系检测一下，就可知晓。实验四、果蝇唾腺染色体的制作和观察一、实验原理果蝇唾腺染色体是处于体细胞同源染色体的配对状态，由于多次复制而不分开，因而形成具有1000-4000 根染色体丝

28、的巨大染色体, 又称为多线染色体 .本实验利用剖离果蝇三龄幼虫的唾腺, ，压制染色体玻片标本的方法，观察多线染色体的特征。二、实验目的1. 练习取出果蝇等幼虫唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的方法。2. 观察多线染色体的特征： a. 巨大； b. 体细胞配对，所以染色体只有半数（ n）； c. 各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心； d. 横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列。三、实验材料：黑腹果蝇的三龄幼虫四、实验器具和药品1. 用具：双筒解剖镜，显微镜，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，滤纸。2. 药品： 2的乳酸醋酸地衣红：称 2 克地衣红，溶解于浓度为 4

29、5的 100 毫升醋酸溶液中煮沸，冷却。使用前和等量的乳酸混合后过滤使用。生理盐水：称取 NaCl0.7 克、 KCl0.35 克、 CaCl20.21 克溶解于 1000 毫升蒸馏水中。五、实验步骤1、 饲养幼虫：黑腹果蝇的 三龄幼虫 。这种材料既易饲养， 又易取得唾腺， 但为了得到更好的染色体标本，需要在 2025和营养良好的条件下饲养幼虫。 选择行动迟缓、肥大，爬上管壁的三龄幼虫 （就要化蛹了） 做标本最佳。2、 拉取唾腺：把载玻片置于双筒镜下。 载玻片上 滴加生理盐水一滴 ，取三龄幼虫放在其中， 操作者两手各握一枚解剖针， 左手的解剖针压住幼虫后端 1/3 处，固定幼虫。右手的解剖针按

30、住幼虫头部，用力向右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾腺是一对透明的棒状腺体。3、 剥离脂肪：在载玻片上除去幼虫其他组织部分，还要把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。4. 染色和压片：固定染色 30 分钟后，盖上干净的盖玻片，用滤纸先轻轻压一下，吸去多余的染液。然后放在平的桌子上，用大拇指用力压住，并横向揉几次（注意：不要使盖玻片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉！）。5、观察标本（1）. 先用低倍物镜观察片子，找到好的染色体图像后，放到视野中心，再用高倍镜观察。（2）. 果蝇的唾腺染色体是2n=24=8，但因体细胞配对，又因短小的第4染色体和 X 染色体的着丝粒在端部，所以染色体的一端在染

31、色中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状染色体。只有第 2 和第 3 染色体的着丝粒在中央， 它们从染色中心以V 字形向外伸出（ 2L，2R，3L，3R），因此共有 6 条。在显微镜下，短小的第 4 染色体有时不易观察到，所以最容易识别的是第5 条。雄果蝇的 Y 染色体几乎包含在染色中心里， 因为是异染色质， 看起来染色可能淡些。有经验的人可以发现雄果蝇的 X 染色体比雌果蝇 X 染色体要细些， 因为雄性只有一条 X 染色体。（3）. 唾腺染色体上的横纹宽窄、 浓淡是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不连续的膨胀，这称为疏松区（ puff ），目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。

32、六、作业：绘制所观察到的唾腺染色体图。实验难点： 剥离脂肪实验五人体 X- 染色质的观察实验目的通过实验掌棱鉴定人类X 染色质的方法，在显微镜下正确鉴别Barr 小体的特征及其所在的位置。了解 X 染色体失活的有关理论假说以及失活染色休上的甚因所控制的遗传性状的特点。实验原理雌性个体的细胞内有 2 条 x 染色体，有条在间期是处于不活动的异固缩状态，从而形成 x 染色质又称 Barr 小体 。后来人们知道，这种情况在哺乳类动物的雌性个体都存在，即雌性哺乳类动物细胞内的 X 染色体在间期内仅有一条呈松散状态，参加细胞生理活动，另一条则保持异固缩状态。 Barr 小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细

33、胞核边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状态 所致，Morishima 等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色体与其他异染色质样，在 DNA复制时总落后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质在人类中，正常男性个体不可能出现Barr 小体，正常女性的细胞只可能出现1 个 Barr 小体。对于具有性染色体畸变的个体来说，Barr 小体出现的数目等于细胞内 X 染色体的数目减1。剂量补偿效应是指 XY型性别决定的生物，由X 性染色体上的基因决定的性状在两性的表现几乎相同。 也就是说 X 染色体上的基因的表达产物在雌、雄细胞中是等量的。这种剂量补偿效应可以通过两种途径实现：一是X 染色

34、体的转录速率的差异，即雌性细胞中的两条 X 染色体的转录速率低于雄性细胞中单条 X 染色体的转录速率，因而造成雌性和雄性细胞的总体表达水平接近； 二是雌件细胞中有一条 X 染色体在功能上是失活的。1966 、MFLyon 根据许多研究结果提川了 X 染色体失活的假说。主要内容为：在正常的雌性哺乳动物的体细胞中， 一条 X 染色在遗传上有活性， 而另一条处于失活状态， 这种失活发生在胚胎发育的早期， 失活是随机的。 但是旦发生了失活，这个细胞的后代将处于失活状态。 X 染色体上的杂合基因将出现嵌合现象。 Lyon 假说虽然可以解释些问题似不是全部，如人类中的 44AXO型个体表现为 Turner

35、 综合症、 44AXXY表现为 Klinefelter 综合症。随着生物学和医学的发展现在人们已经认识到单条 X 染色体失活现象是普通存在的， 但失活的染色休上存在失活区和非失活区。如人类中位于失活 X 染色体上的基因， G6PD(葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 ) 、AHF(抗溶血第因子 ) 等是非失活的，而 Xg 血型基因是失活的。利用 X 染色质的鉴别技术可以对性染色体畸形、胎儿早期诊断等提供有益的参考。实验用具及材料显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、吸水纸、离心机、吸管、固定液 ( 甲醇与冰醋酸二者体积比 3： 1) 、2Og/L 甲苯胺蓝染色液、生理盐水等实验方法及步骤1) 取材：先漱口三次，

36、将口腔内杂物漱出。 然后用牙签的钝面刮取口腔颊部粘膜细胞，将其放入盛有 3mL理盐水的离心管中。 轻轻摇动使细脑分散于生理盐水中。2) 离心收集细胞：以 800 一 1000r/min 进行离心 10min。3) 固定：离心结束后轻轻将上清液除去。留下的沉淀物用固定液固定10min。4) 离心： 1000r/min 离心 10min。5 ）制备细胞悬液：去掉上清液根据细胞沉淀的多少适量加入几滴新配制的固定液液用吸管吸打细胞悬液。6) 滴片：用吸管将细胞悬液滴在载玻片上，在空气中干燥、7 ）酸解当载玻片上的固定液全部挥发干以后，在载玻片上滴加 5MHCL，处理 10min 。然后用清水漂洗几遍。

37、8) 染色：在 2 Og/L 甲苯胺蓝染色液中染色 30 min 。染色结束后，用清水漂洗以去掉浮色，在空气中自然干燥。9) 镜检：在油镜依次观察细胞核着色均勾、核膜完整的细胞80-100 个，计数具有 X 小体的细胞数。Barr 小体的辨认：首先要低倍镜下检出细胞分散且染色均匀的视野然后转到高倍镜和油镜进行仔细观察。 良好的标本应该具备以下条件：核质呈网状或细颗粒状分布，核膜清晰，核无缺损，染色适度，细胞周围无杂茵。 Barr 小体在镜下观察呈一浓染小体，其轮廓清楚，大小为 1P 左右，常附在核膜边缘或靠近内侧。形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形等。若 Barr 小体不在核膜的内侧，就不容易

38、与其他染色质块相区别了，一般以在核膜内检测到为阳性。操作步骤（一）方法二l 取材、涂片：取女性口腔上皮细胞均匀涂布在洁净载玻片上。2 略风干。3 染色： 2的乳酸醋酸地衣红30 分。4 镜检、 正常女性间期细胞中 X 小体阳性率约为 30 50%。（二）方法三l 取女性口腔上皮细胞涂片。待干燥。2 Carnoy 固定液中固定 15 分钟。干燥。3 5N HCl 中 10 分钟。水洗。干燥。4 0.2%甲苯胺兰染色 2 5 分钟。水洗。气干。5 镜检。实验六染色体组型分析实验一、实验原理各种生物的染色体数目是恒定的。大多数高等动植物是二倍体（diploid）。也就是说，每一个体细胞含有两组同样的

39、染色体，用2n 表示。其中与性别直接有关的染色体，即性染色体，可以不成对。每一个配子带有一组染色体，叫做单倍体（ haploid ），用 n 表示。两性配子结合后，具有两组染色体，成为二倍体的体细胞。如蚕豆的体细胞2n=12，它的配子n=6，玉米的体细胞2n=20，配子n=10。水稻 2n=24， n=12。有些高等植物还是多倍体。染色体在复制以后，纵向并列的两个染色单体（ chromatids ），往往通过着丝粒（ centromere ）联在一起。着丝粒在染色体上的位置是固定的。由于着丝粒位置的不同，可以把染色体分成相等或不等的两臂（ arms），造成中间着丝粒，亚中间着丝粒、 亚端部着丝

40、粒和端部着丝粒等形态不同的染色体。 此外，有的染色体还含有随体或次级缢痕。 所有这些染色体的特异性构成一个物种的染色体组型。染色体组型分析是细胞遗传学、 现代分类学和进化理论的重要研究手段， 也是一种简便的方法。二、实验目的1. 通过实验，初步掌握染色体标本的制做方法，进一步了解各操作步骤的原理 2. 通过组型实验，掌握染色体组型分析的基本方法。三、实验材料蚕豆、玉米、黑麦或水稻的根尖（或木本植物的茎尖），或幼嫩花蕾，经固定，染色，压片，显微摄影，得染色体照片。也可以由实验室提供染色体制片或放大照片。 改用尾蛆蝇的染色体放大照片四、实验器具和药品显微镜，测微尺，毫米尺，镊子，剪刀，绘图纸。如无

41、现成的染色体照片需备摄影显微镜以及有关摄影器材。五、实验说明染色体组型分析方法分为两大类， 一类是分析体细胞有丝分裂时期的染色体数目和形态。另一类是分析减数分裂时期的染色体数目和形态， 均能得到染色体组型。臂率为 1.0 1.7 的归为中间着丝粒染色体，用（ M）表示。1.7 3.0 的归为亚中间着丝粒染色体，用（ SM）表示。3.0 7.0 的归为亚端部着丝粒染色体，用（ St ）表示。7.0 更大的归为端部着丝粒染色体，用（ Ot）表示。用 SAT代表具随体的染色体， 计算染色体长度时， 可以包括随体也可以不包括，但均要注明。六、实验步骤（一）有丝分裂时期染色体组型分析萌发的种子的根尖，或

42、木本植物的茎尖（特别是倒数第二、第三张嫩叶，通过固定、染色、压片等可以进行组型分析， 但染色体分散程度差而且形状不固定，需要制备较多的片子， 才能得到满意的结果。 而这些材料通过“去壁低渗法”制备染色体，可以较快得到优良染色体组型的制片及照片。1. 测量：若同染色体制片标本进行直接测量时，必须利用显微镜与测微尺，事先要用台微尺对目微尺的单位长度进行标定后再进行工作， 仅对染色体长度较大的标本适合。一般标本还是先行拍照放大，后进行测量，可得较好数据。根据显微测量或放大照片测量、记录染色体形态测量数据如下：（1） 臂指数 (arm index):指染色体长臂与短臂的比率，臂指数=长臂 / 短臂。染

43、色体的臂数 :对于端部着丝粒染色体，臂数为1，其它为 2。（2）着丝粒指数 (centromere index):指短臂占整个染色体长度的比率，着丝粒指数 =短臂 / 整个染色体长度 100%, 该比率决定了着丝粒在染色体中的相对位置。（3）总染色体长度 =该细胞单倍体全部染色体长度（包括性染色体）之和（4）相对长度 (relative length):指单个染色体的长度与包括X 染色体在内的单倍体染色体总长度之比，相对长度 =单条染色体的长度 /( 单倍常染色体+X染色体 ) 的总长度 100。（5）例表（表格于实验结果中）（6）配对：根据测量数据，即染色体相对长度、臂率、着丝粒指数、次缢痕

44、的有无及位置、随体的形状和大小等进行同源染色体的剪贴配对。（7）染色体排列：染色体对从大到小，短臂向上、长臂向下，各染色体的着丝粒排在一条直线上。 有特殊标记的染色体 （如含有随体的） 以及性染色体等可单独排列。（8）翻拍或绘图。完成上述步骤的染色体剪贴，可以通过翻拍摄影或描图成为染色体组型图。高等植物属异源多倍体种类的较多， 进行组型分析时， 不完全根据染色体的大小进行排列， 而事先要根据系统发育的来源进行分组， 然后各组按大小进行编排。例如，人工培育的小黑麦。来自小麦的染色体组是 AABBDD，来自于黑麦的染色体组是 RR，组型分析时不仅应将 RR分开，而且小麦本身是个天然的异源多倍体，又

45、应分成 AA、BB、DD组几组进行分析。经常见到的植物如棉花、烟草、马铃薯以及许多果树、花卉均具有多倍体品种，分析时应特别注意。七、实验结果列表并文字、图片说明，两种组型分析法，各分析一种植物所得结果。也可用两种方法同时分析一种植物，比较它们的结果。果蝇的单因子实验一、实验原理一对基因在杂合状态中保持相对的独立性， 而在配子形成时， 又按原样分离到不同的配子中去。理论上配子分离比是 11，子二代基因型分离比是 121，若显性完全，子二代表型分离比是 31。这就是分离定律。二、实验目的1. 理解分离定律的原理 2. 掌握果蝇的杂交技术 3. 记录交配结果和掌握统计处理方法三、实验材料黑腹果蝇（

46、Drosophilamelanogaster）品系1. 长翅果蝇 +/+2.残翅果蝇 vg/vg四、实验器具和药品1. 用具：麻醉瓶，白瓷板，海绵，放大镜，毛笔，镊子，培养瓶。2. 药品：乙醚，玉米粉，琼脂，蔗糖，酵母粉，丙酸。五、实验说明1. 性状特征：野生型果蝇的双翅是长翅，（+/+ ）翅长过尾部。残翅果蝇（ vg/vg ）的双翅几乎没有，只有少量残痕，无飞翔能力。vg 的座位是第二染色体67.0 。长翅对残翅显性完全。2. 交配方式：用长翅果蝇与残翅果蝇交配， 得到子一代都是长翅， 子一代雌雄个体间相互交配，子二代产生性状分离，出现两种表型，呈 31之比。现以长翅雌蝇与残翅雄蝇交配为例，

47、如图 3-1 所示。在这个实验中，子一代基因型为 +/vg ，可以产生两种配子， +和 vg，各占 1/2 。雌雄都是这样。用棋盘法表示这个杂交实验，见图3-2 。因为长翅对残翅显性， +/+ 、+/vg 基因型都表现出长翅性状。只有 vg/vg 才呈残翅。所以 F2 代群体中，长翅与残翅比为 31。其中长翅中有 2/3 是杂合体 +/vg ，1/3 是纯合体 +/+ ，但在表型上无差别。 F2 代群体越大，越接近理论比。实得比数符合理论比数的程度如何，需要进行x2 测验。六、实验步骤1. 选野生型和残翅果蝇为亲本，做正交和反交组合。雌蝇一定要选处女蝇。处女蝇在实验前 2 3 天陆续收集，数目

48、多少根据需要而定。2. 把长翅果蝇和残翅果蝇进行杂交，正交与反交各一瓶。即： 长翅（）残翅（）；长翅（）残翅（） 。（1）把长翅处女蝇倒出麻醉，挑出 56 只移到杂交瓶中。（ 2）其次把残翅倒出麻醉，在放大镜下，白瓷板上仔细挑出 56 只雄蝇，移到上述杂交瓶中。（3）贴好标签：杂交瓶放到 23温箱中培养。反交与正交方法一样。3.7 8 天后，倒去亲本果蝇。4. 再过 45 天， F1 成蝇出现，观察 F1 翅膀，连续检查 23 天。5. 麻醉 F1 成蝇，移出 56 对果蝇，放到另一培养瓶内。这里雌蝇无须处女蝇，在23温箱中培养（反交同样做一瓶）。6.7 8 天后，移去 F1 亲本。7. 再过

49、 45 天，F2 成蝇出现，开始观察。连续统计 78 天。被统计过的果蝇放到死蝇盛留器中。七、实验结果填写下列表格x2 测验自由度 =n-1=查 x2 表实验八果蝇的伴性遗传一、实验原理位于性染色体上的基因， 其传递方式与位于常染色体上的基因不同， 它的传递方式与雌雄性别有关，因此称为伴性遗传（ sex-linkedinheritance ）。果蝇的性染色体有 X 和 Y 两种，雌蝇为 XX，是同配性别；雄蝇为 XY，是异配性别。三、实验材料野生型（红眼）， wildtype （+）突变型（白眼）， whiteeye （w），此基因在 X 染色体上五、实验说明1. 交配方式：若 A 为正交，F

50、1 代、都为野生型 +， F1 相互交配得野生型 +，性则野生型 +和白眼 w 涓髡家话耄 壤F2 代，则都是*11。B 是 A 的反交，F1 代与 A 不同，为野生型现象又称为绞花式遗传（ lriss-crossinheritance红眼与白眼比例为11，的红眼与白眼比例也是+，而湮籽郏踳，此）。F1 相互交配得 F2 代，的11。注意：1. 常染色体性状遗传的正、反交所得子代、性状相同，而伴性遗传则有不同。2. 在进行伴性遗传实验时，也有例外个体产生，这是由于两条 X 不分离造成的（B 杂交组合），F1 中出现了不应该出现的性白眼， 但这种情况极为罕见，约几千个体中有一个。3. 不分离现象

51、 。六、实验步骤1. 收集处女蝇：由于雌蝇生殖器官中有贮精囊，一次交配可保留大量精子，供多次排卵受精用，因此做杂交实验前必须收集未交配过的处女蝇。由于孵化出的幼蝇在 12 小时内（更可靠是 8 小时）不交尾，因此必须在这段时间内把、蝇分开培养，所得的蝇即为处女蝇。x2 测定：根据 x2 测定，查 x2 表，若 P5，说明观察值与理论值之间的偏差是没有意义的，也就是说，可以认为观察值是符合假设的。具体对这个实验来说，所得到的实验结果应该是符合伴性遗传的假设， 也就是说眼色的这对性状是由于位于性染色体上 X 上的一对等位基因控制的。实验要点：处女蝇的正确收集实验九果蝇的二对因子的自由组合一、实验原

52、理位于非同源染色体上的两对基因， 它们所决定的两对相对性状在杂种第二代是自由组合的。因为根据孟德尔第二定律， 一对基因的分离与另一对 （或另几对）基因的分离是独立的，所以一对基因所决定的性状在杂种第二代是31之比，而两对不相互连锁的基因所决定的性状，在杂种第二代就呈9331之比。三、实验材料黑腹果蝇（ Drosophilamelanogaster）的突变品系黑檀体突变型，（ e）位于第三染色体残翅突变型，（ vg）位于第二染色体五、实验说明1. 性状特征：黑檀体果蝇（ e）的体色乌黑，与黑体（ b）相似，但是它们是不同染色体上基因所决定。与（ e）相对应的野生型性状是灰体。 （ e）的座位是第

53、 3 染色体 70.7 。残翅果蝇（ vg）的双翅几乎没有，只有少量残痕，与（ vg）相对应的野生型是长翅。（ vg）的座位是第二染色体 67.0 。2. 交配方式：由于（ e）和（ vg）是在不同对的染色体上，两对因子杂种在形成生殖细胞时会产生四种不同类型配子，比例为1111，如子一代个体相互交配，则通过配子相互结合，在子二代可得到16 种组合，其中 9 种灰长， 3 种黑长， 3 种灰残， 1 种黑残。如下图所示：整理后：1+， 2+e+，2+vg，4+e+vg，共 9 种 +1+vgvg，2+evgvg，共 3 种 +vg1ee+， 2ee+vg，共 3 种 e+1eevgvg，共 1evg所以表型比例是 9331。若用反交：即 vgvg+ee 其结果应该与前面正交相同，但因残翅果蝇不能飞，只能爬行，所以作雌体亲本比较好，若作雄亲本，得到的子代将减少很多，因而在本例中反交比正交好。七、实验结果F2（正、反交合瓶统计）果蝇数目：用 X2 方法测验观察数与理论数符合程度（好适度）。X2 测验：2=自由度 =4-1=3X 3若 P 0.05 ，说