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1、影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法一一.影响影响ELISA试验效果常见问试验效果常见问题原因分析及解决办法题原因分析及解决办法 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法(1)试剂试剂1.观察外包装，内主份有无漏液，注意效期等。2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。3.操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性剂的溶解。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法(2)加样过程应注意的问题加样过程应注意的问题标本 ：1.血清或血浆标本分离不好即进行加样。 2.不加抗凝剂（以HBsAg影响较大）。 3.漏加样品或加样量不足的，加液
2、器的校正。 加样时间： 4.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵 箱前等待时间过长(以HIV试剂较为明显。)； 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法(3)孵育过程中出现的问题孵育过程中出现的问题 1.温箱孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底； 2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合，难以清洗彻底。3.孵育时温度不符合说明书的规定范围。影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法(4)洗板过程中易出现的几点情况洗板过程中易出现的几点情况1.采用手工洗板,孔与孔之间液体容易交叉，切不可随意洗板。2.采用洗板机洗板时，洗液注入孔中量不足，导致洗板不彻底
3、，造成本底高。3.由于血液中纤维原蛋白，造成洗板针堵塞，抽吸不完全，造成洗板不畅，导致洗板效果差，直接影响本底。 4.反应板过多，不能保证及时洗板，造成洗板等待时间过长，影响结果。 5.洗板前先将孔内液体甩出包被板。影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法(5)显色过程中易出现的问题显色过程中易出现的问题 显色剂配制后放置时间过长或使用已经变色失效的显色剂； 2. 用排枪加A、B混合液时，加样槽不够干净，造成花板 。3. 不同厂家试剂的显色液混用。影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法(6)终止和读数时的注意事项终止和读数时的注意事项1加完终止后30分钟内读取数据。2读板时板
4、底如果不清洁，就会导致所读的数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标板的底部是清洁的。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法二二.实验完成后异常结果出实验完成后异常结果出现的原因分析现的原因分析影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法问题1：只有单次实验出现灵敏度偏低或 者偏高。 处理意见：重新实验，并在实验中注意试 剂盒的温度平衡、温育的时间、 显色的时间等影响因素的控制 。影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法问题2：质控品漏检 处理意见：检查质控品是否有反复冻融 的情况、质控品是否有批内 差异、质控品是否为4摄氏度 久置。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析
5、及解决办法问题3：日常使用中出现弱阳性标本漏检。 处理意见：A标本本身由于各种因素影响而表现 为弱阳性，实际上为阴性标本。 B由于标本自身含量较低，易随实 验水平位试剂盒调整等因素波动， 对这部份标本的处理应格外慎重， 有条件的地区应进行确证实验。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法处理意见：C注意检查实验中所用的仪器设备 是否定期校准。 D注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否相同，不同批号 试剂不得混用。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法问题4：质控品灵敏度偏高 。处理意见：卫生部临检中心的质控品存在 批间批内差异。 实验室相关条件改变导致质控变化，看阳
6、性对照品是否有明显变化。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法问题5：多次实验灵敏度一直偏低。处理意见：A保存环境不规范。 B孵箱温度不足。 C温育时间不足。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法问题6：单次实验中出现假阳性 处理意见：注意实验过程中的影响因素，特 别是实验中的洗板应设置浸泡 30-60秒时间。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法问题7：临床实验中出现假阳性偏高。 处理意见：A注意检查洗涤液中结晶部份是否 完全溶解。 B注意检查实验中所使用的仪器设 备是否定期校准 。 C注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否相同，不同批号 试剂不得混
7、用。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法处理意见：D假阳性标本表现在临界值附近较 多，通常与当时实验的水平有关， 注意检查实验条件的波动 。 E避免加样时间过长 。 F由于试剂盒灵敏度过高而造成临 床假阳性偏高的结果。 影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法问题8：多次实验重复性差。处理意见：A加样后充分混均。 B尽可能使用同一加样器，装紧 枪头。 C测量波长保持一致。 D加样量、加试剂量保持一致。影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法三.血型常见问题分析1.关于效价的问题： 目前公司内部质量规程规定A,B细胞均需达到1：128 O细胞需达到1：8。2.关于凝集的问题： A , B细胞 1：128 + O细胞 1：8 + 此处的“+”为肉眼可见清晰的凝集颗粒。3.关于变色及溶血的问题：当细胞近效期时，有可能出现细胞浊液颜色发暗红，属正常现象。正常细胞沉淀后，颜色鲜红色，摇匀后细胞浊液颜色鲜红。当细胞受污染或细胞破碎，细胞沉淀后颜色暗红甚至发黑。细胞浊液暗红或发黑。当细胞本身衰老或破碎后，有可能引起效价偏低，凝集不实。
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