微生物培养知识清单

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1、微生物的培养与应用 知识清单班级 #课题一、微生物的实验室培养一培养基1、为微生物的生长繁殖提供营养的基质叫做.从物理性质上划分,主要可分为与,其中的培养基成分均匀,微生物能充分接触和利用培养基中的养料主要用于工业生产与扩大培养,而扩大培养的目的是,要让培养基呈固态,一般需向其中加入这一凝固剂.该凝固剂为从海藻中提取的多糖,44以下凝固,98以上溶化.不会被微生物利用,这也是所有凝固剂的特点.固体培养基可以用于菌株的、鉴定、计数、菌种保存等.从功能上划分,可分为培养基与培养基,其中的培养基,是在培养基中加入某种化学物质,以不需要的微生物的生长,所需要的微生物的生长,如的培养基来筛选纤维素分解菌

2、；以的培养基来筛选自身固氮微生物；在培养基中加入筛选金黄色葡萄球菌；培养基中加入青霉素等抗生素抑制,从而筛选；以的培养基来筛选尿素分解菌.而鉴别培养基是根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种,来鉴别相应微生物,如在培养基中加入,可鉴别大肠杆菌,使其菌落呈色.选择培养基是/不都是固体培养基.2、不管哪种培养基,一般都含有、等营养物质,另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以与氧气、二氧化碳、渗透压等的要求.如在培养乳酸杆菌时需在培养基中添加；培养霉菌时需将PH调节至；培养细菌时需将PH调节至；培养厌氧微生物时则需提供条件.牛肉膏蛋白胨培养基中的牛肉膏能够为微生物提供,主要提供；蛋白胨能够

3、为微生物提供,主要提供.培养基中含量最多的化合物是,如果营养物质的浓度过高,会导致微生物脱水死亡二无菌技术1、获得纯净培养物的关键是,主要包括消毒与.对实验操作空间、操作者的衣服、双手应该进行清洁与；培养皿、培养基、接种用具应该；实验操作应该在进行.已经处理的材料用具不与周围的物品接触.2、消毒：用较的方法杀死物体表面的微生物,不能杀死、.芽孢：细菌芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、少数球菌形成的 逆性强的休眠体；孢子：某些低等植物、真菌如蘑菇、酵母菌、放线菌产生的脱离母体的繁殖体消毒方法：煮沸消毒法100煮沸56min 2巴氏消毒法 高温短时处理,常用来消毒奶制品,70-75,30min； 80,15

4、min；可以杀死牛奶中的微生物,并且牛奶中的不被破坏.3化学药剂消毒 操作者的双手一般用进行消毒；饮水水源用进行消毒；4紫外线消毒 接种室、超净工作台、接种箱在使用前可以用照射30min,进行消毒处理.为了加强消毒效果,在照射前,适量喷洒或等消毒液.3、灭菌：用的理化因素杀死物体内外的所有微生物,包括和.方法：灼烧灭菌将需要灭菌的物体通过酒精灯火焰的灼烧.接种环、涂布器、接种针、试管口等应该用灭菌；2干热灭菌：将灭菌物品放入干热灭菌箱,在160170加热12h灭菌的方法.玻璃器皿、金属用具等器材一般用法进行灭菌,所用器械是；高压蒸汽灭菌 将物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后,要首先打开排气阀,煮沸并

5、排除锅内的,目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热,气压升至,温度为,并维持1530min；切断热源使温度自然降温,气压务必降至零时打开锅盖,其目的是防止容器中的液体暴沸.培养基、无菌水等一般用法进行灭菌,所用器械是.不论是消毒还是灭菌,其主要的原理都是在理化因素的作用下使微生物变性或者破坏损伤,以杀灭微生物.三制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1、固体培养基的制备一般包括计算、称量、.1计算：根据配方比例,计算配制一定量的培养基所需各种成分的用量.2称量：准确称取各成分.称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速,目的是.牛肉膏通常放在称量纸上称量,溶化后再将称量纸取出.3溶化：加水加热熔化牛肉膏；加

6、入蛋白胨和氯化钠继续加热；加入琼脂；用定容到100mL.整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止.4调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性.5灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用灭菌.6倒平板：待培养基冷却至左右时在附近操作进行.其过程是：在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过；左手将培养皿打开,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖.待平板冷却凝固后,将平板放置.注意：.锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是.倒平板的目的是.若皿盖和皿底之间粘有培养基,则该平板能否培养微生物？为什么？.配制斜面培养基中,试管要加塞棉塞的

7、目的是.试管培养基形成斜面的作用是.四纯化大肠杆菌1、接种方法：微生物的接种最常用的方法是、,其中除了可以用于微生物的分离、纯化外,还可以用于菌落的计数.除此之外还包括 、 等方法.虽然方法各不相同,核心都是要,保证培养物的 . 2、平板划线法：平板划线法是通过在琼脂固体培养基表面的操作,将的菌种逐步到培养基表面,在数次划线后,可以分离得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的.在划线操作中,第一次划线前要灼烧接种环的目的是；除第一次划线外,其余划线前都要灼烧接种环的目的是；划线结束后还需灼烧接种环的原因是；灼烧接种环后必须待其,才能进行划线操作,原因是；划线时,将皿盖打开一条缝隙,把接种环伸入平板内

8、划3-5条平行线,盖上皿盖,不要划破,否则会影响菌落的形态、生长.注意不要将最后一区划线与第一区划线,在做第二次以与以后的划线操作时,必须从开始,原因是.在打开试管棉塞后以与塞上棉塞前都必须使试管口.3、稀释涂布平板法：稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面,在的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成,从而在培养基表面形成单个.该方法主要包括两个步骤,即操作与操作.在稀释时,应该将分别盛有9ml水的各支试管进行,并编号.在将菌液用加入相应稀释倍数的试管时,应该用手指轻压移液管上的橡皮头,吹吸3次,使充分混匀.移液管事先应该处理,操作中试管口和移液

9、管应在离火焰 处.整个操作过程中使用了 支移液管.涂布平板操作,用到的涂布工具是,应该事先将其放入盛有的烧杯中,然后在涂布前将其取出在火焰上引燃,并,方可进行涂布.是/不是用涂布器从试管中取菌液,而是用,取的菌液一般不超过 ml. 4、若用平板划线法接种后培养基上的某条线上的菌落分布呈沟槽状,其原因是；若第二划线区域的第一条线上没有菌落长出,其原因可能是.若用稀释涂布平板法接种后的培养基的右下方没有菌落长出,而其他地方有较多的菌落长出,其原因最可能是.是/不是每次划线的菌种都来源于上次划线的末端；如果在平板上有5个划线区域,则接种环应该被灼烧次.培养结束后,发现培养基上菌落连成一片,可能的原因

10、是什么？ 5、在接种后,应该将一个与接种的培养基都放入进行同步培养,其目的是.在微生物培养时,有时候需要进行振荡培养,其主要目的是.接种后的培养基在12h与24h时,菌落的颜色、位置、形状,大小有无明显差异?.原因是时间越长,菌落中细菌繁殖越多,菌落体积越大；菌落的位置不动,但增多.6、对于频繁使用的菌种,可以采用的方法,首先将菌种接种在培养基上,在合适的温度下,待后,将试管放入的冰箱中保藏.但该方法的缺点是.对于需要长期保存的菌种,可采用的方法,在的冷冻箱中保存.微生物的培养与应用 知识清单班级 #课题二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一课题背景尿素是一种农业氮肥,能/不能被农作物直接吸收

11、,必须被土壤中的细菌分解成后,才能被植物吸收利用,土壤中的细菌之所以能分解尿素,直接是因为它们能合成,根本原因是,尿素被细菌分解的反应式是.二研究思路.1筛选菌株 在寻找目的菌株时,思路是.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件,同时或其他微生物生长. 选择培养基：在微生物学中,将允许种类的微生物生长,同时或其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基. 配制选择培养基的依据 根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的.例如,培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素,可以选择培养的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等. 2统计菌落

12、数目 1测定微生物数量的常用方法有或称和或称.其中的稀释涂布平板法能够统计是的数目,因此统计结果一般不用活菌数.在统计时一般选择菌落数在的平板进行计数,其目的是.选择30-300的原因主要包括以下几点：稀释度过高,容易计数不准确,造成实验误差稀释度过低,可能导致两个或者两个以上的菌体连在一起形成一个菌落,造成实验误差稀释度过低,会造成培养基中的微生物的种内斗争、种间竞争激烈,使得一些个体无法形成菌落,而造成实验误差稀释度过高,形成的菌落数过少,不具有代表性.该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目,原因是.在用该方法进行菌落计数时,每个稀释度下至少涂布个平板,当几个平板上的菌落数都在30-300

13、时,且数据相差不是很大的情况下,应该用几个数据的作为该稀释度下的菌落值做计算.计算公式为：每克土壤ml样品菌株数=其中,C代表某一稀释度下的平均菌落数,V代表涂布时用的稀释液体积,M代表稀释倍数.显微镜直接计数的计算公式可描述为：1ml原液中的菌体数=每中格平均菌落数25或16 =每小格平均菌体数400.该方法得到的数据比实际的活菌数目.2稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个.通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌.为了保证结果准确,一般选择菌落数在的平板进行计数.此外,测定微生物数量的常用方法还有直接

14、计数. 3设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响,提高实验结果的.例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需以培养的培养基作为空白对照. 三实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1取样：从肥沃、湿润的土壤中取样.能/不能直接选择表层土.用于取样的小铁铲和盛土样的信封在使用前必须,称取和稀释土样都应该在完成.土壤取样时,应先3cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的中.2制备培养基：制备_培养基作为对照组,尿素为唯一氮源的培养基作为_,用来判断选择培养基是否具有_.3样品的稀释测定土壤中细菌数量时,一般选用倍的稀释液进行涂布平板并培养,温度一般控制,培养时间一

15、般天；测定土壤中放线菌数量时,一般选用倍的稀释液进行涂布平板并培养,温度一般控制在,培养时间一般天；测定土壤中真菌数量时,一般选用倍的稀释液进行涂布平板并培养,温度一般控制在,培养时间一般天.若要初步判断培养基上的两个细菌是否为同种,可以根据的特征,这些特征主要包括其、.第一次做这个实验时可以放宽稀释范围,如稀释倍数为103107范围内的要分别涂布,而每个稀释度下需要_个选择培养基、_个牛肉膏蛋白胨培养基,因此需要_个选择培养基和_个牛肉膏蛋白胨培养基.两种培养基应各有一个作为_对照,此外还需准备8个灭菌的试管和1个灭菌的移液管.样品的稀释与涂布平板：将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥

16、形瓶中,充分摇匀,吸取上清液mL,转移至盛有_ mL无菌水的大试管,将土样以1、101、102依次等比稀释至107稀释度,并按照由107103稀释度的顺序分别吸取_进行平板涂布操作.按照浓度从低到高的顺序涂布平板,不必更换移液管.将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为,用来判断选择培养基是否起到了选择作用.3微生物的与观察测定土壤中细菌数量时,一般选用倍的稀释液进行涂布平板并培养,温度一般控制,培养时间一般天；测定土壤中放线菌数量时,一般选用倍的稀释液进行涂布平板并培养,温度一般控制在,培养时间一般天；测定土壤中真菌

17、数量时,一般选用倍的稀释液进行涂布平板并培养,温度一般控制在,培养时间一般天.若要初步判断培养基上的两个细菌是否为同种,可以根据的特征,这些特征主要包括其、.将涂布好的培养皿放在30温度下培养,与时观察和记录.每隔24h统计一次菌落数目,选取 时的记录作为结果,这样可以防止因不足而导致.挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含培养基的斜面中,观察能否产生如教材中图2-l0的颜色反应.注意：操作中试管口和移液管应在离火焰12cm处.整个操作过程中使用了1支移液管.培养未接种培养基的作用是对照,若有菌落形成,说明.在肉汤培养基上,大肠杆菌菌落呈白色,为圆形,光滑有光泽,边缘整齐.培养12h和24h后的

18、菌落大小相同、不同；菌落分布位置相同、不同.原因是时间越长,菌落中细菌繁殖越多,菌落体积越大；菌落的位置不动,但菌落数增多.在某培养基上出现了3种特征不同的菌落,原因有等4细菌的计数当时,选取菌落数在的平板进行计数.在同一稀释度下,至少对3个平板进行重复计数,然后求出,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目.四课题延伸以尿素为唯一氮源的培养基具有选择作用的原因是.若要判断该培养基是否起到选择作用,可以用培养基做对照进行同步培养,如果对照培养基上长出的菌落数明显多于/少于该选择培养基,则说明该培养基起到选择作用.在选择培养基上生长的菌,一定/不一定就是我们的目的菌株. 本课题能对分解尿素

19、的细菌进行了初步的筛选. 这只是分离纯化菌种的第一步.对分离的菌种作进一步的鉴定,还需要借助的方法. 在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的酶将尿素分解成,会使培养基的碱性,PH,因此我们可以通过检测来判断该化学反应是否发生. 在以尿素为唯一氮源的选择培养基中加入指示剂,培养某种细菌后,如果PH,指示剂变,这样便可初步鉴定该中细菌能够分解尿素.细菌的数目还可以通过法来测定,如：测定饮用水中大肠杆菌的方法,将已知的饮用水过滤后,将滤膜放在培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌呈现色,根据培养基上该菌落的数目,可以计算出水样中大肠杆菌的数量.三：思考与讨论 1如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落

20、数？ 2为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿 素的细菌的数量,选用的稀释范围相同吗？微生物的培养与应用 知识清单班级 #课题三、分解纤维素的微生物的分离一、纤维素与纤维素酶1纤维素的化学组成：三种元素,是一种糖.纤维素是一种由首尾相连而成的高分子化合物,是含量最丰富的多糖类物质.纤维素能被土壤中某些微生物分解利用,这是因为它们能够产生2纤维素的分布：是自然界中纤维素含量最高的天然产物,此外,木材、作物秸秆等也富含纤维素.许多商品纤维素都是由天然纤维素制得的,如：水溶性的CNC-Na、不溶于水的 纤维素.3纤维素酶的作用：纤维素酶是一种,一般认为它至

21、少包括三种组分,即酶、酶酶,前两种酶使纤维素分解成,第三种酶将纤维二糖分解成.二、纤维素分解菌的筛选 1筛选方法：染色法.2筛选原理：刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,当纤维素被纤维素酶分解后,红色复合物无法形成,出现以为中心的透明圈,我们可以通过来筛选纤维素分解菌. 三、试验设计土壤中纤维素分解菌的分离的实验方案 ： 分解纤维素的微生物的分离的试验流程、1土壤取样：采集土样时,应选择富含的环境. 2选择培养： 阅读资料二选择培养基,回答以下三个问题：1个酶活力单位1U是指在温度为,其它反应条件情况下,在 min内转化 的底物所需要的酶量.思

22、考1纤维素分解菌选择培养基属于培养基,原因是.思考2培养基选择作用机制是什么？思考3若设置一个对照实验说明选择培养的作用,应控制的变量是什么？ 目的：增加纤维素分解菌的,以确保能够从样品中分离到所需要的微生物.制备选择培养基：参照课本旁栏中的比例配制. 选择培养：称取土样20 g,在无菌条件下加入装有30mL培养基的锥形瓶中,将锥形瓶固定在上,在一定温度下振荡培养12 d,直至培养液变.也可重复选择培养.4梯度稀释： 依次将培养液稀释101107倍.思考是如何操作的？将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上制备培养基：参照课本旁栏中的比例. 倒平板操作. 涂布平板：将稀释度为104106的菌悬液

23、各取01 mL涂布在平板培养基上,30倒置培养. 刚果红染色法：挑选产生的菌落,一般即为分解纤维素的菌落.思考4本实验流程与尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同？3刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种即.阅读资料三刚果红染色法,填表比较两种染色法的各自的优缺点染色法优点缺点方法一方法二是、.阅读资料三刚果红染色法,填表比较两种染色法的各自的优缺点：思考5为什么选择培养能够浓缩所需的微生物？四：结果分析与评价1为了确定分离得到的是纤维素分解菌,还需要进行实验,纤维素酶的发酵方法有发酵和发酵.2纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的含量进行定量测定.3为什么要在富含纤维素的环境中寻找

24、纤维分解菌?4、将滤纸埋在土壤中有什么作用？滤纸应该埋进土壤多深？ 5、为什么选择培养能够浓缩所需的微生物？ 6请分析下面的培养基配方,回答下面的问题： 纤维素分解菌的选择培养基 纤维素粉 5 g NaN031 g Na2HP047H 20 1.2 g KH2P04 0.9 g MgS047H 20 0.5 g KCl 0.5 g 酵母膏 0.5 g 水解酪素 0.5 g 将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000 mL上述配方是液体培养基还是固体培养基?为什么? 这个培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,又是如何选择的?如果要证明该培养基的选择培养作用可用培养基做实验.25.请你设计实验来

25、证明纤维素酶的作用.实验步骤：取2支20mL的试管,分别放入1cm6cm的. 再分别加入pH为4.8,物质的量浓度为0.1 molL-1的缓冲液10mL、11mL. 在加入lOmL缓冲液的试管中加入1mL.将2支试管固定在摇床上,振荡反应1.结果：加纤维素酶的滤纸条被分解,另一支中的未分解.则证明：. 答 案 一、培养基1培养基 液体培养基 固体培养基 液体培养基 大量繁殖,增加菌种数目 琼脂 分离 鉴别培养基 选择培养基 选择培养基 阻止或抑制 促进 以纤维素作唯一碳源 无氮 高浓度的NaCl 不抗青霉素的微生物 抗青霉素的微生物 尿素为唯一氮源 指示剂 伊红美蓝 黑 不2.水 无机盐 碳源

26、 氮源 维生素 酸性 中性或微碱性 无氧 碳源、氮源、磷酸盐和维生素 氮源 碳源、氮源和维生素 氮源 水二、无菌技术1、防止外来杂菌的入侵 灭菌 消毒 灭菌 酒精灯火焰附近 灭菌2、温和 大部分 芽孢 孢子 营养成分 酒精 氯气 紫外线 石炭酸 煤酚皂溶液3、强烈 芽孢 孢子 充分燃烧层外焰 灼烧 干热灭菌 干热灭菌箱 冷空气 100kPa 121高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌锅 蛋白质 核酸三制备牛肉膏蛋白胨固体培养基熔化 调pH 灭菌 倒平板 防止牛肉膏吸收空气中水分 蒸馏 琼脂糊底而导致烧杯破裂 高压蒸汽灭菌锅 干热灭菌箱 50 酒精灯火焰 火焰 一条缝隙 倒过来 消灭瓶口的杂菌,防止杂菌感

27、染培养基 防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面 不能空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖,并污染皿内培养基 保持通气并防止杂菌感染 增大接种面积四纯化大肠杆菌1、平板划线法 稀释涂布平板法 稀释涂布平板法 斜面接种 穿刺接种 防止杂菌的污染 纯度2、接种环 连续划线 聚集 稀释分散 培养 子细胞群体 消灭接种环上的微生物,防止污染菌液 消灭接种环上残留菌种防止细菌污染环境和操作者 冷却 防止高温杀死菌种 培养基 相连 上次划线末端 可获得由单个细菌形成的菌落 通过火焰3、梯度稀释 稀释倍数足够高 单个细胞 菌落 系列稀释 涂布平板 灭菌 移液管 菌液与水 灭菌 12cm 1 涂布器 酒精

28、 冷却810s 不是 移液管 0.1 4、培养基表面被划破 接种环灼烧后在二区划线前未冷却或划线未从第一区域末端开始 右下方没有涂布涂布不均匀 是 6 稀释倍数不够,菌液的浓度太高；划线时,划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格,受到了其他微生物的污染5、未接种或接种无菌水的培养基 37恒温箱 作为空白对照,判断培养基是否被污染 给目的菌提供氧气 菌落的颜色、位置、形状无明显差异,大小有明显差异 菌落数目6、临时保藏 试管的固体斜面 培养 菌落长成 4 保存的时间不长,菌株容易被污染或产生变异 甘油管藏 -20微生物的培养与应用 知识清单课题二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

29、一课题背景不能氨脲酶细菌含有合成脲酶的基因 CO2+H2OCO2+2NH3二研究思路.1筛选菌株 要根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找 目的菌株 抑制 阻止 特定 抑制 阻止 自养型 固氮微生物 2统计菌落数目 显微镜直接计数法血球计数板法 稀释涂布平板法活菌计数法菌落 30-300 保证结果的准确性 少 当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落3 平均菌落数 稀释度 活菌 30300 显微镜 非测试因素 可信度 接种无菌水或不接种三实验设计不能 灭菌 酒精灯火焰旁 铲去表层土 灭菌的信封 牛肉膏蛋白胨 实验组 选择作用 3 1 15 5 空白 1 9 0.1多于 对照

30、 培养 酚红 104、105、106 30-37 1-2d 103、104、105 25-28 5-7d 102、103、104 25-28 3-4d 菌落 形状 大小 隆起程度 颜色 培养基灭菌不彻底 不同 相同 培养基灭菌不彻底或杂菌感染 菌落数目稳定时 培养时间 遗漏菌落数目 菌落数目稳定时 30300 平均值四课题延伸只有以尿素为氮源的微生物才能在该培养基中生长 牛肉膏蛋白胨 多余 不一定 生物化学 脲 氨 增强 升高 培养基PH的变化 酚红 升高 红 滤膜 伊红美蓝 黑一、1.C H O 多糖 葡萄糖 纤维素酶 2.棉花 羧甲基纤维素钠 微晶 3.复合酶C1 菜纤维素 葡萄糖纤维二糖

31、二 1. 刚果红 2.红色复合物,纤维素分解菌,是否产生透明圈三 1. 纤维素 25 最适 1 1mmol2思考1液体,没有添加琼脂成分.思考2以纤维素粉为唯一碳源,只有纤维素分解菌才能生存.思考3将纤维素粉改为葡萄糖.纯度 .摇床 混浊参照专题1的稀释操作, .透明圈思考4尿素分解菌的分离实验流程是将土样制成的菌悬液直接涂布在选择培养基上；本课题通过选择培养使细菌增殖后,再涂布在鉴别培养基上.其它操作基本基本共同.3填表染色法优点缺点方法一颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐刚果红会使菌落之间发生混杂方法二操作简便不存在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈,有些微生物能降解色

32、素,形成明显的透明圈.思考5在选择培养条件下,可使能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到浓缩的作用.四 1 发酵产纤维素酶, 液体 发酵和 固体 发酵2葡萄糖3由于生物与环境的相互依存关系,在富含纤维素的环境中,纤维素分解菌的含量相对较高,因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境.4.将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集,实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境.一般应将纸埋于深约10 cm左右腐殖土壤中.5.在选择培养的条件下,可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应这种营养条件的微生物的繁

33、殖被抑制,因此可以起到浓缩的作用6是液体培养基,原因是配方中无琼脂. 有选择作用,本配方中的碳源是纤维素,所以能分解纤维素的细菌可以大量繁殖,不能利用纤维素的微生物则难以生存. 牛肉膏蛋白胨对照.植物的组织培养技术 知识清单课题一、菊花的组织培养15、在植物或动物等的个体发育过程中,细胞在、上都会出现,形成这种差异的过程叫做细胞分化.细胞分化的根本原因是.一般而言,分裂能力强的细胞,分化程度较高/低,反之亦然；高度分化的细胞一般有/无分裂能力.已经分化的细胞,仍然具有发育成的潜能,称为细胞的全能性.全能性是否体现,根本上讲,是要看是否由发育成,如马铃薯块茎的无性繁殖,有/没有体现细胞的全能性.

34、细胞具有全能性的原因是,而植物细胞要表现出全能性的一个必要条件是.全能性的体现有难易程度之差异,如植物细胞比动物细胞更难/容易；体细胞比生殖细胞,生殖细胞比受精卵都更难/容易；幼嫩细胞比衰老细胞难/容易；分化程度低的细胞比分化程度高的细胞更难/容易；分裂能力强的细胞比分裂能力弱的细胞难/容易.16、植物组织培养技术的理论基础是或者说体现了；离体的植物组织、细胞被称为,由它到愈伤组织的过程称为或；由愈伤组织继续培养,又可重新分化成根或芽的过程称为.愈伤组织细胞特点是,而根尖分生区的细胞特点是.组织培养技术的应用包括能够实现一些植物的,并培育无病毒植物可以通过组织培养来生产药物用于诱导的形成,进而

35、形成人工种子用于基因工程中转基因植物的获得.17、影响植物组织培养的因素较多,主要包括以下几个方面：组织培养的材料,不同的植物组织,培养的难易程度差别很大；同种植物材料的、也会影响组织培养结果.一般而言,容易进行的植物,也就容易进行组织培养；菊花组织培养一般选择未开化植株的茎上部,其原因是这里的细胞.组织培养有特殊的营养需求,植物组织培养常用的培养基是,该培养基主要成分包括：、.其中有机物里的甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素的作用是；蔗糖的作用包括提供,以与.植物激素,包括,是/不是植物细胞的营养物质,他们是启动、的关键性激素.在植物组织培养过程中,往往使用植物激素,来人为控制细胞的与.激素的使用顺

36、序与都会影响组织培养的结果,如先用,再用,有利于细胞的分裂,但细胞不分化；若先使用细胞分裂素,后使用生长素,细胞；若二者同时使用,可以,故在植物组织培养时一般都是,以提高分化的可能性.在二者同时使用的前提下,二者的使用比例,也会影响组织培养结果,如生长素/细胞分裂素的比值时,有利于根的分化,而抑制芽的形成；比值时,有利于芽的分化,抑制根的形成；比值适中时,促进的形成.MS培养基与微生物培养基的主要差异是MS培养基中需.光照、PH、温度也将影响组织培养,菊花组织培养时,PH一般控制在,温度控制在,并且每日光照 h.微生物的感染也是影响组织培养的另一重要因素,因为组织培养的外植体一般体积,抗性,所

37、有组织培养对无菌的要求高/低. 18、由于MS培养基的成分较多,而用量一般较小,所有需要配制,无机盐中的大量元素浓缩倍,微量元素浓缩倍,激素、维生素一般可按照的质量浓度单独配制母液.菊花组织培养必需/不必添加植物激素.MS培养基配制过程中,在各种成分熔化定容后,需,再进行分装灭菌,且为了减少污染,应该先分装/灭菌,MS培养基的灭菌用到的方法是.在外植体的消毒时,既要考虑常用反映,又要考虑植物的常用反映,外植体消毒一般要用、两种药剂.接种操作都必须在进行,且每次使用器械后,都需要灭菌,在再次接种前必须待其.接种的菊花等茎段插入培养基时,应该注意插入的方向,不能.如果接种后的外植体,在培养过程中死亡,其原因可能是：等.19、接种后的锥形瓶应该放到中培养,期间定期消毒.培养其实是一个比较漫长的过程,首先应该是的培养阶段,当其长到一定大小时,才能够进行培养,进而进行培养.这三个重要阶段的培养基组成上相同/不相同,即在生芽后欲生根,必须,且培养基应该提高生长素/细胞分裂素的含量.在移栽试管苗之前,应该先打开培养瓶的,让试管苗在生长几日.然后才将幼苗移植到消过毒的或等环境下生活一段时间,等幼苗长壮后再移栽到土壤.12 / 12