TAE与TBE的区别及在凝胶电泳的应用

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1、TAE是Tris-乙酸，缓冲容量小，但是溶解度大，易于储存TBE是Tris-硼酸，缓冲容量大，但是溶解度小，不易长期储存，易产生沉淀与的区别.首先要知道与缓冲溶液的成份如下:5010051051101055它们的分别有下列几点：1不能太浓它只可有10是不会有太大问题。的比会比较高。因为有离子出的进行下一步酵素处理，如1m因为会很容易沉淀，但一般有少许沉淀高，用来跑出来的，分辨率它会影向酵素的工作。因此，若要为分离或的话，就要切记不要让碰上的比较差，一般比较模糊，但它不会对影向酵素用三种缓冲液的配制方法乙酸（）:50X浓贮存液（每升）：碱51冰乙酸100050使用时再稀释50倍。用磷酸（）：10

2、X浓贮存液（每升）：10碱155%磷酸（1）0050使用时再稀释10倍。硼酸（）：5X浓贮存液（每升）：5碱硼酸5电泳缓冲液起什么作用呢默认分类2007-10-0520:29:30阅读11评论0字号：大中小订阅电泳缓冲液TAE起什么作用呢？缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（，负极发生的是还原反应（-长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，使溶液两极的保持基本不变。电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有的离子，离子的浓度太低时电泳速度变慢:太高时

3、就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。.电泳缓冲液还有一个组分是，加入浓度为，目的是螯合等离子，防止电泳时激活酶，此外还可防止离子与核酸生成沉淀。，加是：使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约，电泳大于的片段时用缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收片段时也易用缓冲系统进行电泳。的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用，并且当用于电泳小于的片段时分离效果更好。用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗

4、作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收片段的电泳中使用。转载实验室常用技术参数资料记事本我看世界2007-10-1815:47:27阅读13评论0字号：大中小订阅转载实验室常用技术参数资料（一）2007-10-1615:12一、核酸及蛋白质常用数据1核苷三磷酸的物理常数化合物子量分71摩尔溶液（时的最大吸收值7.）0中入2800.0入0752515000.15832710000.7235253137000.668262100000.3825152000.

5、15672713000.8075253137000.66822676000.712常用核酸的长度与分子量核酸核苷酸数分子量入8502（双链环状）3.0X107322363（双链）2.8X106288001.6X1062337001.2X106181006.1X105117005.5X10551203.6X104（大肠杆菌）752.5X1043常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算1pg=10-6g1pg=10-121ng=10-9g1fg=10-15g（2）分光光度换算：1260双链A=p5g0/ml1260单链A=p3g0/ml1260单链A=p4g0/ml（3）摩尔换算:1pg100bpD=1

6、.52末端3.031pR322=0.361p1000bpDpNgA=0.661ppBRp32g2=2.81k双链（钠盐）=6.6X105道尔顿1k单链（钠盐）=3.3X105道尔顿1k单链（钠盐）=3.4X105道尔顿（4）蛋白摩尔换算：100分子量100,000蛋白质=10p100分子量50,000蛋白质=5p100分子量10,000蛋白质=1p氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿（5）蛋白质换算：1个氨基酸编码容量=3.7X104MW蛋白质10,000MW蛋白质=27030,000MW蛋白质=1050,000MW蛋白质=1.35100,000MW蛋白质=2.7常用蛋白质分子量标准参照物()

7、咼分子量标准参照(2)中分子量标准参照(3)低分子量标准参照肌球蛋白分子量磷酸化酶B7碳酸酐酶3,肌球蛋白22牛血清白蛋白62大豆蛋白酶2,B半乳糖甘酶B1谷氨酶脱氢酶5抑制剂磷酸化酶B7卵白蛋白2马心肌球蛋白6牛血清白蛋白62醛缩酶溶菌酶4过氧化氢酶7碳酸酐酶3,肌球蛋白()8醛缩酶大豆蛋白酶2,肌球蛋白(262抑制剂肌球蛋白(32,溶菌酶4常用分子量标准参照物皿入/黑入/EC0R入/Hindlll+EcoRlpBR322/HaeIII233222222232333223223333223322223223232322续上表22/H:IinfQx174/HinfI0X174/HaeIII0X

8、174/aI1172141521451771111711755551724452274441712124142114122111422717222442454154224147515111272二、常用缓冲液1分子克隆常用缓冲液(无)2磷酸缓冲液(1)25C下1磷酸钾缓冲液的配制H1/2H41/H245515122124277221147571557271728.21.8.686.61.8.8.28.6.2(2)25C下.1磷酸钠缓冲液的配制pH12H(10H25.8.2.16.12.88.6.21.882.26.25.5.56.65.26.86.86.5.5.2.268.1.6.22.6.6

9、8.515.5.88.61.8.26.8：用蒸馏水将混合的两种1贮存液稀释至10根据HH方程计算其pH值：pH=pK+1g(质子受体质子供体)在此，pK=6.86(25C)。3电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺(pH8.0)25二%甲苯青0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Do混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用ama号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于70C。常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris乙酸（TE1X:0.04mol/LTris乙酸50X

10、：242gTris碱0.001mol/LEDT57.1ml冰乙酸100ml0.5mol/LEDTH.0Tris磷酸（TE1X：0.09mol/LTris磷酸10X：10gTris碱0.002mol/LEDT15.5ml5磷酸（1.79g/ml40ml0.5mol/LEDTH.0Tris硼酸（TBE）a0.5X0.045mol/LTris硼酸5X：54gTris碱0.001mol/LEDT27.5硼酸20ml0.5mol/LEDTH.0碱性缓冲液1X：50mmol/LNaOH1X：5ml10mol/LNaOH1mmol/LEDT2ml0.5mmol/LEDTH.0Tris甘氨酸1X：25mmol

11、/LTris5X：15.1gTris250mmol/L甘氨酸94g苷氨酸（电泳级）（H.）0.1SDS50ml10SDS电泳级说明： TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5X溶液，出现沉淀后则予以废弃。以片都以1XTBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5X的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1XTBE以提供足够的缓冲容量。 碱性电泳缓冲液应现用现配。 Tris甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

12、2XSDS凝胶加样缓冲液：100mmol/LTris?HCl（6.8）200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）4SDS(电泳级)0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2XSDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取贮存液现加于上述缓冲液中。4凝胶加样缓冲液缓冲液类型6X缓冲液贮存温度0.25溴酚蓝I0.25二甲苯青FF4C40()蔗糖水溶液0.25溴酚蓝II0.25二甲苯青FF室温5聚蔗糖F4000.25溴酚蓝III0.25二甲苯青FF4C0甘油水溶液IV0.25溴酚蓝4C40蔗糖水溶液碱性加样缓冲液006DT聚蔗糖F400V0.5溴甲酚绿4C0.25二甲苯青FF使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三

13、：增大样品密度；以确保D均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5XTBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长00的双链线状D相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4的双链线状D相同。在琼脂糖浓度为0.5.4的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。5.各种值的T缓冲液的配制各种值的T缓冲液的配制所需值（25C）的体积7.4

14、5.77.244.77.4347.442.7.54o7.857.767.457.22922222247254724757某一特定值的5缓冲液的配制：将5碱溶液与上表所示相应体积（单位：）的混合，加水将体积调至（2）温度对5液值的影响4C25C7C7.5.27827.7()常用缓冲液的值缓冲液分子量缓冲范围120a：三羟甲基氨基甲烷；：N2乙基哌嗪N2乙磷酸；：（N吗啉代）丙磺酸；：N,N双（2乙磺酸）哌嗪；：2（N吗啉代）乙磺酸。7温度对常用缓冲液P的影响缓冲体系pKa(20C)pKa/10C10110a00110000002001010p2000100200p0011021000100100020