P16_INK4_及Ki67在正常宫颈_慢性宫颈炎及宫颈上皮内瘤变中的表达及意义

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1、第 18 卷第 4 期2021 年 8 月中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRYVol1181 No14Aug1 2021P16IN K4及 Ki67 在正常宫颈 、慢性宫颈炎 及宫颈上皮内瘤变中的表达及意义陈瑛1黄磊1袁静萍2张庆华1敖启林3 3(1 湖北省武汉市中心医院妇产科 , 2 病理科 , 武汉 430014 ;3 华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所 , 同济医学院病理学系 , 武汉 430030)摘要 目的 探讨联合检测 P16 IN K4 、Ki67 的表达

2、在子宫颈上皮内瘤变 (CIN) 中的诊断价值 。方法 用免疫组化 S2P 法对 10 例正常宫颈 、20 例慢性宫颈炎 、CIN 、CIN 、CIN 各 30 例中 P16 IN K4和 Ki67 的表达进行检测 。结果 P16 IN K4在 CIN 的阳性表达明显高于与正常宫颈和宫颈慢性炎症组织中的表达 , 差异有显著性意义 ( P 0105) 。ki67 在 CIN 、CIN 、CIN 的表达三者比拟差异有显著性意义 ( P 0105) 。结论P16 IN K4 在判断是否有宫颈上皮内瘤变 (CIN) 时具有很高的特异性和敏感性 , 结合 Ki67 标记可以准确判断 CIN 级别 。联合检

3、测 P16 IN K4和 Ki67 可以作为判断慢 性宫颈炎与 CIN 的客观指标 。关键词 P16 IN K4 ;Ki67 ;免疫组化 ;子宫颈上皮内瘤变 ;诊断中图分类号 R361文献标识码 ADOI: 1013870/ zgzzhx1 20211041016EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF P16INK4 AND Ki67 IN THE NORMAL CERVIX, CHRONIC CERVICITIS AND CERVICAL INTRAEPITHEL IAL NEOPLASIAChen Ying1 , Huang Lei1 , Yuan J ingping

4、2 , Zhang Qinghua1 , Ao Qilin3 3(1 Department of Obstetrics & Gy necology ; 2 Department of Pathology , T he Cent ral Hos pital of W uhan , W uhan 430014 , 3 Institute of Pathology of Tongji Hospital , and Department of Pathology ofTongj i Medical College , H uaz hong Universit y of S cience and Tec

5、hnology , W uhan 430030 , China)Abstract Objective To explore t he diagnostic value of t he combined detection of P16IN K4 and Ki67 in cervical int raepit helial neoplasia1 Met hods The exp ression of P16IN K4 and Ki67 were measured by S2P immnohistochemistry , respectively , in 10 case of normal ce

6、rvical tissues , 20 chronic cervicitis , 30 CIN , 30 CIN and 30 CIN 1 Result s The expression of P16IN K4 in CIN was remarkably higher t han t hat in nor2 mal cervical tissues and chronic cervicitis ( P 01 05) 1 The expression of ki67 was notably different in CIN , CIN and CIN ( P 01 05) 1 Conclusio

7、n The detection of P16IN K4 expression is highly specific andsensible in judging cervical int raepit helial neoplasia , while t he detection of Ki67 can accurately determine t he grade of CIN1 The combined detection of P16IN K4 and Ki67 is recommended to be an objective indicator in defining t he ch

8、ronic cervicitis and CIN1Key wordsP16IN K4 ;Ki67 ;Immnohistochemistry ;Cervical int raepit helial neoplasia宫颈上皮内瘤变 ( Cervical int raeptt helial neo2 plasia , CIN) 是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前 病变 。2003 年的 W HO 肿瘤分类标准 1 中给出了 三个等级的显微镜下诊断标准 。由于标准中存在一收稿日期2021202118修回日期2021204220定的主观因素以及实际运用中出现的各种复杂的情 况 , 常常出现不同的病理医生

9、会对同一病例给出不 同级别的 CIN 诊断 , 尤其对于炎性反响性增生和 不成熟鳞状上皮化生与 CIN 的判断 , 常造成过诊 断或诊断缺乏 , 由此给临床治疗方案的选择带来困 难。作者简介陈 瑛 , 女 (1979 年) , 汉族 , 学士近年来许多研究者IN K4 2 , 3 认为细胞周期激酶抑制3 通讯作者 ( To whom correspondence should be addressed)剂 P16不仅在宫颈癌尤其在癌前病变的表达有第 4 期陈 瑛等 1 P16 IN K4及 Ki67 在正常宫颈 、慢性宫颈炎及宫颈上皮内瘤变中的表达及意义427特异性 , 因此可以用来辅助诊断宫

10、颈癌前病变 。而 Ki67 在宫颈癌前病变 、宫颈癌 、炎症及反响性增 生组织中均有表达 , 用于判断疾病的分级有较好的 提示价值 。本研究检测了 P16IN K4 和 Ki67 在 CIN 及其相关病变中的表达 , 并探讨其在 CIN 中的诊 断价值。要分布在上皮层的下 1/ 3 局部 ; 中度阳性 ( +) , 即阳性细胞分布在上皮层的下 2/ 3 局部 ; 强阳性 ( ?) , 即阳性细胞分布到达了上皮层的全层 。41 统计学方法用 SPSS 111 0 软件统计分析软件处理数据 , 等 级资料多组比拟采用 t 检验 。11 材料材料和方法结果11 P16IN K4的表达 : 见表 1

11、。P16IN K4 在正常宫将武汉市中心医院 2004 年 7 月22007 年 7 月间 不同级别宫颈上皮内瘤样变宫颈活检及手术标本 、 非宫颈病变行子宫切除术经病理证实的正常宫颈组 织和慢性炎症宫颈组织按病种编号 , 采用单纯随机 抽样法分别取得 : 正常宫颈组织 10 例 ; 慢性宫颈 炎 20 例 ; CIN 30 例 , CIN 30 例 , CIN 30 例 ,共 120 例 。样本均经 2 名高年资病理医师阅片并统 一诊断 。标本均经 10 %中性福尔马林固定 , 石蜡 包埋。21 方法每例均作 3 张连续切片 , 1 张做 H E 染色 , 2 张 分 别 做 P16IN K4

12、 和 Ki67 抗 原 标 记 。P16IN K4 、 Ki67 鼠抗人单克隆抗体原液均购自北京中杉金桥 生物技术 , 分别按 1 50 和 1 100 稀释 ; 抗原修复用枸橼酸盐缓冲液 (p H 61 1) 行微波加 热修复 。免疫组化采用 S2P 法 , DAB 染色 。用已 知阳性片做阳性对照 , 用 PBS 代替一抗做阴性对 照。31 结果判断P16IN K4阳性结果判定参照文献 4 在组织切片 中显示细胞核或核/ 浆染为淡黄至棕黄色者为阳性 细胞标志 , 将阳性细胞按其数量及显色强度分为 4 级 : 阴性 ( - ) , 即阳性细胞比率 75 % , 多数细胞呈黄至棕黄色染色。Ki

13、67 阳性结果判定参照文献 4 在组织切片 中显示细胞核染为淡黄至棕黄色者为阳性细胞标 志 , 按照阳性细胞分布分为 4 级 : 阴性 ( - ) , 仅 限于基底层有表达 ; 弱阳性 ( + ) , 即阳性细胞主颈和宫颈慢性炎症组织中仅见个别基底旁细胞核/ 浆散在着色 , 定为阴性表达 ( 图 1A) , P16IN K4在 二类组织中的表达差异无显著性意义 ( P 01 05) ; 在宫颈上皮内瘤变 级中阳性表达率为 40 % (图 1B ) , 随 着 病 变 级 别 的 递 增 ( , , ) , P16IN K4的阳性表达 愈强 , 而且以中度阳性 ( +) 和强阳性 ( ?) 表达

14、为主 , 在宫颈上皮内瘤变 级 中阳性表达率为 80 % (图 1C) , 在宫颈上皮内瘤 变 级中阳性表达率为 861 7 % (图 1D) , P16IN K4 在 CIN 的阳性表达分别与正常宫颈 、慢性炎症中 的阳性表达比拟差异均有显著性意义 ( P 均 01 01) ; P16IN K4 在 CIN 的 阳性表 达与 CIN 、 CIN 中的阳性表达比拟差异均有显著性意义 ( P 均 01 05) 。提示 : P16IN K4 在诊断有无宫颈上皮内瘤变中具有很高的特异性和 敏感性 ; 在高级别 CIN ( CIN 和 CIN ) 中的表 达明显强于低级别 CIN ( CIN ) 。2

15、1 Ki67 的表达 : 见表 1 。在正常宫颈 , 可见个 别基底旁细胞核散在着色 , Ki67 主要为阴性 (2) 表达 ; 在宫颈慢性炎症组织中 , ki67 可有局部为 弱阳性 ( + ) 及中度阳性 ( +) 表达 , 阳性表达率 为 40 % (图 2A) ; Ki67 在宫颈慢性炎症中的阳性 表达与正常宫颈中的阳性表达差异有显著性意义 ( P 01 05) 。Ki67 在宫颈上皮内瘤变 级中主要为弱阳性( + ) 表达 , 阳性表达率为 861 7 % (图 2B) , 随着 病变级别的递增 ( , , ) , ki67 的阳性表达 愈强 , 在 CIN 主要为中度阳性 ( +)

16、 表达 , 阳性 表达率为 961 7 % (图 2C) ; 在 CIN 主要为强阳 性 ( ?) 表达 , 阳性表达率为 100 % (图 2D) 。三 者间比拟差异均有显著性意义 ( P 01 05) 。428中国组织化学与细胞化学杂志第 18 卷表 1P16IN K4和 Ki67 在不同病变宫颈组织中的表达Table 1The expressions of P16IN K4 and Ki67 in different lesions of cervixP16 IN K4蛋白表达比例 ( %)阳性率 ( %)Ki67 蛋白表达比例 ( %)阳性率 ( %)病变类型( Type)总例数( n

17、)( P16 IN K4 protein expression ratio) ( %)( Positive ratio) ( Ki67 p ro t ei n exp re ssio n ratio) ( %) ( Positive ratio)( - )( + )( +)( ?)( %)( - )( + )( +)( ?)( %)NC10100000 %91001111 %CC20191005 %1253040 %CIN 301883140 %419618617 %CIN 3061010480 %142239617 %CIN 304511108617 %01524100 %NC : norm

18、al cervical ; CC : chronic cervicitis讨论目前认为 , 正常宫颈组织演变为宫颈癌要经过 一个癌前病变的阶段 , 宫颈上皮内瘤变是与宫颈浸 润癌密切相关的一组癌前病变 。CIN 患者常无特殊 病症 , 需要行细胞学 、阴道镜以及宫颈活组织检 查 , 主要依靠组织病理学获得诊断后决定治疗方 法 5 。而临床常常出现 CIN 患者治疗前后病检结 果大相径庭 , 甚至给后继治疗带来困难 , 究其原 因 , 除了取材的限制 , 比拟重要一点是对于宫颈慢 性炎症 , 反响性增生以及 CIN 的病理诊断 , 包括 对良 、恶性判断 , 病理分级缺乏有价值的客观指 标 。因

19、此 , 找到对于 CIN 诊断有价值的客观指标 , 获得比拟客观的病理诊断 , 对于指导临床治疗具有 重要意义 。既往的研究指出 高危 型人类 乳头 状瘤病 毒 ( HPV) 感染是引起宫颈癌的主要原因 6 。高危型 H PV 所含有的 E7 基因可整合入宿主的基因组内 , 进而使 Rb 蛋白的功能失活 ; P16IN K4是细胞周期素 依赖激酶 ( CD K) 的抑制剂 , 正常情况下 Rb 蛋白 抑制 P16IN K4基因转录 , 当 Rb 通路失控 , P16IN K4 不能被有效抑制 , 引起原本正常的 P16IN K4蛋白反 馈性高表达 。所以 P16IN K4被认为是检测宫颈癌及

20、其癌前病变的一个有效的生物学标记 7 , 8 。Horn等 9 认为检测 P16IN K4蛋白可提高 CIN 的诊断在不宫颈炎症等良性病变和不同级别的 CIN 可能是一 个比拟敏感的客观指标 。Ki267 是由 Gerdes 等首先发现的一种核增殖 标志基因 , 是目前临床上广泛应用的检测细胞增殖 的标志 。但 Agoff 等 4 发现不仅在 CIN 而且在宫 颈炎症及反响性增生组织中 , 都发现了 Ki67 的高 表达 , 缺乏特异性 ; 而且 Ki67 高表达与高危型 HPV 感染没有相关性 , 因此以其作为筛查 CIN 的 客观指标存在问题 。本研究发现在宫颈慢性炎症和 CIN 中都表达

21、 Ki67 , 但随着 CIN 病变级别的增加 , Ki67 的阳性表达愈强 , 提示 Ki67 虽然不能作为判 断慢性炎症和低级别 CIN 的客观指标 , 但可能作 为 CIN 病变分级的良好客观指标。我们认为 , P16IN K4在判断是否有宫颈上皮内 瘤变 (CIN) 尤其是高级别 CIN 时具有很高的特异 性和敏感性 , 结合 Ki67 标记可以准确判断 CIN 级 别 。联合检测 P16IN K4和 Ki67 可以作为判断宫颈炎 性反响性增生 、不成熟鳞状上皮化生与 CIN 的客 观指标 , 具有相当地临床应用价值 。参考文献1 Tavassoli FA , Devilee P1 W

22、 HO Classification of Tumours Pathology and Genetics of Tumours of the Breast and Female Genital Organs1L yon : IARC Press , 2000 , 2692270同医师间的一致性 。而且 , 不仅在宫颈组织学标本2 Klaes R , Benner A , Friedrich T , et al1 P16IN K4Immu2中 , 在宫颈细胞学标本中同样可以作为一个筛查病 变性质的指标 10 。本研究发现 P16IN K4在 CIN 的阳 性表达明显高于正常宫颈和慢性炎症中的阳性

23、表 达 ; 在 CIN 的阳性表达低于 CIN 和 CIN 中的 阳性表达 , 提示 P16IN K4对于区别正常宫颈 、慢性nohistochemistry Improves Interobserver Agreement inthe Diagnosis of Cervical Intraepithelial Neoplasia1 Am J S urg Pathol , 2002 , 26 (11) : 1389213993 Gurrola2Daz CM , Surez2Rincn A E , Vzquez2Cama2cho G , et al1 P16 IN K4 immunohistoc

24、hemistry improves the reproducibility of the histological diagnosis of cer2 第 4 期陈 瑛等 1 P16 IN K4及 Ki67 在正常宫颈 、慢性宫颈炎及宫颈上皮内瘤变中的表达及意义429vical intraepithelial neoplasia in cone biopsies1 Gynecol Oncol , 2021 , 111 (1) : 12021244Agoff SN , Lin P , Morihara J , et al1 P16 IN K4 expressioncorrelates with

25、degree of cervical neoplasia : a compar2 ison with Ki267 expression and detection of high2rish HPV types1 Mod Pathol , 2003 , 16 (7) : 66526735乐杰 1 妇产科学 ( 第 6 版) 北京 : 人民卫生出版社12004 , 28522886Bo sch FX , Lorincz A , Munoz N , et al1 The causal rela2 tion between human papillomavirus and cervical canc2

26、 er1J Clin Pathol , 2002 , 55 (4) : 24422657Sano T , Oyama T , Kashibwabara K , et al1 Expressionstatus of P16 IN K4 protein is associated with human papillomavirus oncogenic potential in cervical and geni2 tal lesions1 Am J Pathol , 1998 , 153 (6) : 1741217488 Hu L , Guo M , He Z , et al1 Human pap

27、illomavirus gen2otyping and P16 IN K4 expression in cervical intraepithe2 lial neoplasia of adolescent s1 Mod Pathol , 2005 , 18 (2) : 26722739 Horn L C , Reichert A , Oster A , et al1 Immunostainingfor P16 IN K4 used as a conjunctive tool improves inter2 observer agreement of the histologic diagnos

28、is of cervi2 cal intraepithelial neoplasia1 Am J Surg Pathol , 2021 , 32 (4) : 502251210Murp hy N , Ring M , Killalea A G , et al1 P16 IN K4 as amarker for cervical dyskaryosis : CIN and c GIN in cer2 vical biopsies and ThinPrep TM smears1J Clin Pathol , 2003 , 56 (1) : 56263图版说明图 1AP16 IN K4在宫颈慢性炎症

29、组织中仅见个别基底旁细 胞核/ 浆散在着色 , 为阴性表达 。S2P 法200图 1B P16 IN K4在宫颈 CIN 中呈弱阳性 ( + ) 表达 。S2P法200图 1C P16 IN K4在宫颈 CIN 呈中度阳性 ( +) 表达 。S2P 法200图 1D P16 IN K4在宫颈 CIN 中呈强阳性 ( ?) 表达 , 与上皮及间质比照鲜明 。S2P 法200图 2AKi67 在宫颈慢性炎症中主要为阴性 , 少数基底旁 细胞核呈局部弱阳性表达 。S2P 法200图 2BKi67 在宫颈 CIN 中呈弱阳性 ( + ) 表达。S2P 法200图 2CKi67 在宫颈 CIN 中呈中度

30、阳性 ( +) 表达 。S2P 法200图 2DKi67 在宫颈 CIN 中呈强阳性 ( ?) 表达。S2P 法200EXPLANATION OF FIGURESFig1 1A The expression of P16 IN K4 is negative in chronic cervicitisis1 There are only scattered positive stai2 ning in few parabasal cells in nucleus/ cyto2 plasm1 IHC SP method 200Fig1 1B The expression of P16 IN K4

31、is weakly positive ( + )in cervical intraepithelial neoplasia 1 IHCSP method 200Fig1 1CThe expression of P16 IN K4 is moderately positive ( +) in cervical intraepithelial neoplasia 1 IHC SP method 200Fig1 1D The expression of P16 IN K4 is st rong positive ( ?) in cervical intraepithelial neoplasia s

32、howing sharp contrast to epithelial and mesenchymal1 IHCSP method 200Fig1 2A The expression of Ki67 is mainly negative with weak positive for few parabasal cells in nuclei in chronic cervicitis1 IHC SP method 200Fig1 2B The expression of Ki67 is weak positive ( + ) incervical intraepithelial neoplasia 1 IHCSP method 200Fig1 2C The expression of Ki67 is moderate positive ( +) in cervical intraepithelial neoplasia 1 IHC SP method 200Fig1 2D The expression of Ki67 is st rong positive ( ?) in cervical intraepithelial neoplasia 1 IHC SP method 200 430中国组织化学与细胞化学杂志第 18 卷