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1、脐带间充质干细胞对CTX导致的药物性肝损伤大鼠的治疗作用 摘要】目的分析臍带间充质干细胞UC-MSC对环磷酰胺CTX导致的药物性肝损伤大鼠的治疗作用。方法以87只安康成年SPF级雄性SD大鼠为研究对象，根据随机数字表法分成溶剂对照组、CTX给药组、CTX结合UC-MSC治疗组，各29只。CTX结合UC-MSC治疗组第1、4、7及10天均予以UC-MSC进展尾静脉注射，第3天给予CTX腹腔注射;CTX给药组第3天施以CTX腹腔注射;溶剂对照组按照以上两组同样时间、同样方式给予生理盐水。比照三组体重、肝脏/体质量、血清肝功能生化指标天门冬氨酸氨基转移酶AST、丙氨酸氨基转移酶ALT、血清总胆红素T
2、BIL、血清碱性磷酸酶ALP、氧化应激超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px、谷胱甘肽GSH、一氧化氮NO、丙二醛MDA、过氧化脂质LPO损伤状况。结果CTX给药组、CTX结合UC-MSC治疗组体重分别为234.5215.18、253.4115.36g低于溶剂对照组的286.7520.79g，且CTX给药组体重低于CTX结合UC-MSC治疗组;CTX给药组、CTX结合UC-MSC治疗组肝脏/体质量分别为0.050.01、0.040.01高于对照组的0.030.01，且CTX给药组高于CTX结合UC-MSC治疗组，差异具有统计学意义P【关键词】环磷酰胺;脐带间充质干细胞;药物性肝损
3、伤2021ThetherapeuticeffectofumbilicalcordmesenchymalstemcellsonCTX-inducedliverinjuryinratsWANGJia.JiangsuZhengdaFenghaiPharmaceuticalCo.，Ltd，Nanjing210046，China【Abstract】ObjectiveToanalyzetheroleofumbilicalcordmesenchymalstemcellsUC-MSConcyclophosphamideCTX-inducedliverinjuryinrats.MethodsAtotalof87
4、healthyadultSPFmaleSDratsasstudysubjectsweredividedintosolventcontrolgroup，CTXgroup，andCTXbinedwithUC-MSCgroupaccordingtorandomnumericaltable，with29ratsineachgroup.InCTXbinedwithUC-MSCgroup，UC-MSCwasinjectedviacaudalveinon1st，4th，7thand10thday，andCTXwasintraperitoneallyinjectedon3rdday;CTXgroupwasgi
5、venintraperitonealinjectionofCTXon3rdday;thesolventcontrolgroupwasgivennormalsalineatthesametimeandinthesamemanner.Thebodyweight，liver/bodymass，serumliverfunctionbiochemicalindicatorsaspartateaminotransferaseAST，alanineaminotransferaseALT，serumtotalbilirubinTBIL，serumalkalinephosphataseALP，oxidative
6、responsekinasesuperoxidedismutaseSOD，glutathioneperoxidaseGSH-Px，glutathioneGSH，nitricoxideNO，malondioxidealdehydeMDA，lipidperoxideLPOofthethreegroupswerepared.ResultsTheweightofCTXgroupandCTXbinedwithUC-MSCgroupwere234.5215.18and253.4115.36gwerelowerthan286.7520.79gofthesolventcontrolgroup，CTXgroup
7、waslowerthanCTXbinedwithUC-MSCgroup;theliver/bodymassofCTXgroupandCTXbinedwithUC-MSCgroupwere0.050.01and0.040.01，whichwerehigherthan0.030.01ofthesolventcontrolgroup，andCTXgroupwashigherthanCTXbinedwithUC-MSCgroup.ThedifferencewasstatisticallysignificantP【Keywords】Cyclophosphamide;Umbilicalcordmesenc
8、hymalstemcells;Drug-inducedliverinjuryCTX属于广谱抗肿瘤药物，在多种恶性肿瘤中均可发挥良好作用【1】。但在CTX使用过程中，可出现一系列不良反响，特别是肝毒性，造成其应用范围受到一定影响【2】。CTX代谢在肝脏内进展，通过肝脏微粒体混合功能氧化酶系的作用，分解为4-羧基环磷酸胺，在31-51-核酸内切酶作用下转化为丙烯醛与磷酰胺氮芥，前者为引发不良反响的重要成分，后者那么为抗肿瘤活性成分【3】。丙烯醛属活动性不饱和醛，能诱发脂质过氧化反响，造成细胞损伤。现阶段，临床上主要利用保肝药治疗CTX所致药物性肝损伤，该种疗法虽能在一定程度上缓解患者肝功能损伤，但
9、不可改善其预后【4】。现有研究表示5-7，UC-MSC在失代偿期与终末期肝硬化、酒精性肝损伤治疗中均可发挥积极作用。鉴于此，为明确在CTX所致药物性肝损伤治疗中UC-MSC的作用，现对87只安康成年SPF级雄性SD大鼠展开研讨，详细报告如下。1材料与方法1.1材料CTX通化茂祥制药、苏木染色液厦门迈威生物科技、戊巴比妥钠山西云鹏制药、柠檬酸缓冲液北京百奥莱博科技、反转录试剂盒上海康朗生物科技、谷胱甘肽过氧化物海恒远生物科技、TRIZOL试剂北京华夏远洋生物科技中心、总超氧物歧化酶深圳思美泉生物医药要、一氧化氮常州凌肯自动化科技、脂质过氧化物上海亨代劳商贸、丙二醇山东富商化工。87只安康成年SP
10、F级雄性SD大鼠上海斯莱克实验动物有限责任公司，按照随机数字表法分为溶剂对照组、CTX给药组、CTX结合UC-MSC治疗组，各29只。方法1.2.1分组处理在SPF级条件下饲养SD大鼠，合理调整湿度、温度，予以充足食物与水。待大鼠熟悉环境1周后开展实验。以下实验流程均重复3次：CTX结合UC-MSC治疗组大鼠首次注射UC-MSC作为实验第1天，在第1、4、7及10天分别予以0.4ml浓度为5106/ml的UC-MSC施行尾静脉注射，第3天给予200mg/kgCTX进展腹腔注射;CTX组第3天给予CTX，方法与CTX结合UC-MSC治疗组一致;溶剂对照组和以上两组一样时间、一样方式进展生理盐水注
11、射。实验期间，亲密观察大鼠毛色、饮食、体重变化等，分别于第4、7、10及13天从以上三组中选取7只大鼠，腹腔注射40mg/kg戊巴比妥钠，搜集心脏血，将肝脏取出，测量其湿重，计算器官与体重之比，将部分肝脏组织浸泡于4%多聚甲醛内施行固定，其余组织用液氮速冻后放于-80条件下备用。1.2.2UC-MSC别离-培养-鉴定在无菌条件下提取脐血，以密度梯度法别离获取单个核细胞，按照5106/cm2在T25培养瓶中施行接种，每瓶内参加10ml含有10%血清FBS的DMEM/F12培养基液，并于5%CO2、37饱和湿度培养箱内培养。5d后进展换液，后期每隔3d换液1次。当细胞交融80%时，以0.05%胰酶
12、消化并进展传代。选择第3代细胞，用小鼠单克隆抗体CD105-FITC、CD34-PE标记细胞，并用流式细胞仪施行检测。生理盐水，以超声波破碎细胞法将其制成10%组织匀浆，频率控制为10s/次，间隔时间控制为10s，反复5次。离心后，提取上层清液，根据试剂盒说明书采用硝酸复原酶法、分光光度法测定浆液内GSH、SOD、GSH-Px、LPO含量。外周血肝脏生化指标检测：将心脏血以3500r/min的速度离心20min，搜集上层清液，以全自动生化分析仪测定TBIL、ALP、AST、ALT。观察指标比照三组体重、肝脏/体质量、血清肝功能生化指标AST、ALT、TBIL、ALP、氧化应激SOD、GSH-P
13、x、GSH、NO、MDA、LPO损伤状况。方法以GraphpadPrism6作为数据制图工具，采用SPSS24.0统计学软件进展统计分析。计量資料以均数标准差x-s表示，采用F检验。P2结果2.1三组体重、肝脏/体质量比照CTX给药组、CTX结合UC-MSC治疗组体重分别为234.5215.18、253.4115.36g低于溶剂对照组的286.7520.79g，且CTX给药组体重低于CTX结合UC-MSC治疗组;CTX给药组、CTX结合UC-MSC治疗组肝脏/体质量分别为0.050.01、0.040.01高于对照组的0.030.01，且CTX给药组高于CTX结合UC-MSC治疗组，差异具有统计
14、学意义P2.2三组血清肝功能生化指标比照CTX给药组、CTX结合UC-MSC治疗组AST、ALT、TBIL、ALP程度分别为180.4620.78U/L、102.4323.49U/L、2.310.38mol/L、167.4620.78U/L及162.3520.46U/L、82.6720.16U/L、0.870.02mol/L、158.1520.57U/L均高于溶剂对照组的98.7612.49U/L、36.854.57U/L、0.140.01mol/L、105.8225.13U/L，且CTX给药组高于CTX结合UC-MSC治疗组，差异具有统计学意义P2.3三组氧化应激酶损伤状况比照CTX给药组、
15、CTX结合UC-MSC治疗组SOD、GSH-Px、GSH低于溶剂对照组，且CTX给药组低于CTX结合UC-MSC治疗组，差异具有统计学意义P3讨论间充质干细胞MSC在体外与体内环境中均具有分泌充足营养因子的才能，包括肝细胞生长因子HGF、表皮生长因子、碱性成纤细胞生长因子、血管内皮生长因子VEGF等8。当外源性UC-MSC注入动物体内时，可诱发损伤部位VEGF程度的增加，其作用机理可能为MSC通过促使肝脏微环境的改变，来协助部分肝脏前体细胞分化、增殖，从而改善损伤组织灌注与微循环，为损伤组织提供充足营养物质，防止本质细胞凋亡;而良好的血供可帮助周边内皮细胞增殖，促进营养因子分泌，进步损伤组织修
16、复速度9。体外研究显示10，MSC能下调白介素-6、肿瘤坏死因子、白介素-1等促炎因子的表达，分泌白介素-10、白介素-12等抑炎因子，组建免疫耐受环境，促使淋巴细胞凋亡。所以，当MCS进入损伤组织后，通过营养因子的分泌，能有效改善微环境，协助组织再生，减轻炎症反响，防控本质细胞凋亡与组织纤维化，促使心血管产生。诸多研究均证实11，12，MSC能有效减轻多种原因所致的肝损伤。综合现有研究结论，可将MSC移植干预受损肝脏的途径归纳为以下几点：防控肝脏纤维化：阻止HSC增殖，引导细胞外基质降解，促使HSC凋亡。协助内源性细胞增殖及分化：协助肝细胞分化、增殖，防控肝细胞凋亡，改善内源性异常状况。免疫
17、调节：激活T细胞，阻碍抗原提呈细胞增殖，减少刺激T调节细胞、淋巴细胞的增殖。转变为本质细胞：MSC于体外可转变为肝本质细胞，且具有肝细胞的储藏、合成、代谢功能。经以上途径作用下，可有效缓解小鼠肝功能损伤，促进其肝功能的修复。在本研究中，CTX给药组体重、肝脏/体质量、血清肝功能指标、氧化应激酶损伤均出现显著变化，而CTX结合UC-MSC治疗组也出现同样变化，但相较于CTX给药组，CTX结合UC-MSC治疗组变化幅度较低，这说明UC-MSC能有效改善CTX造成的小鼠肝功能损伤状况。综上所述，在CTX所致药物性肝功能损伤治疗中，UC-MSC可发挥良好作用，值得临床理论及应用。参考文献【1】郭成永，
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脐带间充质干细胞对CTX导致的药物性肝损伤大鼠的治疗作用
