革兰氏染色及油镜的使用

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1、会计学1革兰氏染色及油镜的使用革兰氏染色及油镜的使用 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫碘的复合物，增强染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔经缩小，透性降低，从而使结晶紫碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂质含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫碘的复

2、合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。第1页/共13页第2页/共13页第3页/共13页油镜（ 100 x ），它们各有一定的放大率，不仅可以放大标本，而且有辨析能力。第4页/共13页第5页/共13页介质空气水石蜡油香柏油玻璃折射率1.01.331.471.5151.52第6页/共13页 三、器材： 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，革兰氏染色液， 载玻片，显微镜等 四、操作步骤： 1、涂片：将大肠杆菌（24h）和金黄色葡萄球菌 （24h）分别涂片、干燥、固定。 2、染色： （1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 （2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 （3）

3、脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约2030秒，立即用水冲净乙醇 （4）复染：用番红液染1-2分钟，水洗第7页/共13页3、镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。4、混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。五、实验报告： 1、结果：列表简述2株细菌的染色观察结果（形状、颜色、革兰氏染色反应）。 2、思考题： 1）作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败的关键步骤是什么？ 2）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？第8页/共13页使用时，直接删除本页！使用时，直接

4、删除本页！精品课件，你值得拥有精品课件，你值得拥有！精品课件，你值得拥有精品课件，你值得拥有！第9页/共13页使用时，直接删除本页！使用时，直接删除本页！精品课件，你值得拥有精品课件，你值得拥有！精品课件，你值得拥有精品课件，你值得拥有！第10页/共13页使用时，直接删除本页！使用时，直接删除本页！精品课件，你值得拥有精品课件，你值得拥有！精品课件，你值得拥有精品课件，你值得拥有！第11页/共13页操作步骤操作步骤涂片涂片蒸馏水蒸馏水接种环接种环草酸铵草酸铵结晶紫结晶紫 碘碘 液液95%乙醇乙醇 沙沙 黄黄自然干燥自然干燥媒染媒染1min脱色脱色2030s固定固定初染初染1min复染复染2min干燥干燥镜检镜检第12页/共13页