预购2018动物疫病监测诊断试剂清单

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1、预购2018年度动物疫病监测诊断试剂清单序号种类参数数量单价金额1口蹄疫O型ELISA试剂盒1阻断ELISA2保存条件：28保存；3敏感性：98% 4特异性：99.2%5稳定性：批内及批间差异3%。6试剂盒规格：480孔（5板）/盒7试剂盒组成：rP13C蛋白包被板，样品稀释液，阴性对照血清，阳性对照血清，酶标抗体，底物液，终止液，洗液。8操作时间：2小时15操作步骤：（1）、使用前将试剂盒所有的组成恢复到室温（25+3），取出抗原被板；（2）、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液80ul，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20ul后进行震荡混匀；（3）、室温

2、孵育60分钟；（4）、洗板：每孔加入洗液300ul，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；（5）、每孔加入100ul酶标抗体，室温孵育60分钟；（6）、洗涤3次；（7）、每孔加入TMB底物反应液100ul.室温暗处放置15分钟。（8）、每孔加入终止液50ul，置酶标仪450nm波长处读数。9结果判定：SN值0.6，阴性；SN值0.6，阳性。10试剂盒有效期12个月。3盒2口蹄疫A型ELISA试剂盒1阻断ELISA2保存条件：28保存；3敏感性：98% 4特异性：99%5稳定性：批内及批间差异3%。6试剂盒规格：480孔（5板）/盒7试剂盒组成：rP13C蛋白包被板，样品稀释液，阴性对照血清，阳性对照血

3、清，酶标抗体，底物液，终止液，洗液。8操作时间：2小时15分钟。（1）、使用前将试剂盒所有的组成恢复到室温（25+3），取出抗原被板；（2）、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液80ul，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20ul后进行震荡混匀；（3）、室温孵育60分钟；（4）、洗板：每孔加入洗液300ul，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；（5）、每孔加入100ul酶标抗体，室温孵育60分钟；（6）、洗涤3次；（7）、每孔加入TMB底物反应液100ul.室温暗处放置15分钟。（8）、每孔加入终止液50ul，置酶标仪450nm波长处读数。9结果判定：SN值0.6，

4、阴性；SN值0.6，阳性。10试剂盒有效期12个月。2盒3口蹄疫亚1型ELISA液相阻断试剂盒1、规格：（10板*96孔）/盒，可检测100200份样品。2、用途：用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫亚洲型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。3、试剂盒主要组成：(1)兔抗包被ELISA板10块；(2)U型96孔抗原抗体反应板2块；(3)移液槽5个；(4)口蹄疫亚洲I型病毒抗原约2瓶，7ml/瓶；(5)口蹄疫亚洲I型豚鼠抗体工作液1瓶，55ml；(6)兔抗豚鼠IgG-HRP工作液1瓶，55ml；(7)口蹄疫亚洲I型阳性对照血清1管，1ml；(8)口蹄疫阴性对照血清1管，1ml；(9)2

5、5倍PBST浓缩洗液3瓶，180ml/瓶；(10)TMB底物A、B溶液，各1瓶，30ml/瓶；(11)终止液1瓶，50ml；(12)封膜板10张。4、操作步骤稀释血清：以图1为例操作，在U型反应板上，以50l/孔的量用1PBST2倍连续稀释血清，被检血清在第110列从1:4（即A1A10孔，75l1PBST加25l被检血清）稀释至1:512；在第11列稀释阳性对照血清，从1:2（即A11孔50l1PBST加50l阳性对照血清）稀释至1:256；A12B12孔稀释阴性对照血清，从1:2稀释至1:4；E12H12孔为病毒抗原对照孔。4.1.2加病毒抗原：将病毒抗原4.1.2用1PBST稀释至工作浓

6、度，以50l/孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，4孔病毒抗原对照孔仅加入100l/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，被检血清从1:81:1024，由于阳性对照血清已经预先作了8倍稀释，则变为1:321:4096。封板，振荡，4静置过夜或37温育90分钟。4.2.将抗原抗体混合液从U型反应板上按次序转移至已包被口蹄疫亚洲型兔抗的ELISA板上，50l/孔，封板，37温育60分钟。4.3.洗板5次，甩干，按50l/孔加口蹄疫亚洲型豚鼠抗体工作液（红色），封板，37温育30分钟。4.4.同上洗板5次，甩干，按50l/孔加兔抗豚鼠-IgG-HRP工作

7、液（蓝色），封板，37温育30分钟。4.5.同上洗板5次，加50l/孔底物溶液（底物溶液务必要加双氧水（H2O2），每1ml加10l配备的3%双氧水），37温育15分钟，每孔再加50l终止液终止反应，读取D492nm或D490nm值）。5、结果判定5.1.试验认可标准每块板设4孔病毒抗原对照，病毒抗原对照D492nm值应在1.50.5范围内。阳性对照抗体效价应在110241滴度以内，阴性对照血清抗体效价应 0.7 阳性对照平均 OD 值小于阴性对照的 30% OD PC / OD NC 0.3结果判定：对于每个样品，计算其 S/N 百分比（S/N%）每个样品得出一个（S/N）短时孵育或过夜孵育

8、的结果如下：值 结果值 结果S/N%50% 阳性S/N%50% 阳性50%S/N%60% 可疑50%S/N%60% 可疑S/N%60% 阴性S/N%60% 阴性3盒6禽流感H5-Re8株抗原禽流感病毒H5亚型（Re-8株）血凝抑制试验抗原，用于H5亚型（Re-8株）禽流感病原检测。2ml/瓶。1.抗原为禽流感病毒接种SPF鸡胚培养，收获鸡胚尿囊液，经纯化、甲醛溶液灭活后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。抗原效价不低于7Log2；2 .试剂在28保存，有效期不少于1年；在-20以下保存，有效期不少于2年；3.试验结果阴阳性对照成立；4.无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行

9、检验，应符合要求。2瓶7禽流感H7抗原禽流感病毒H7亚型血凝抑制试验抗原，用于H7亚型禽流感病原检测。2ml/瓶。1.抗原为禽流感病毒接种SPF鸡胚培养，收获鸡胚尿囊液，经纯化、甲醛溶液灭活后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。抗原效价不低于7Log2；2.试剂在28保存，有效期不少于1年；在-20以下保存，有效期不少于2年；3.试验结果阴阳性对照成立；4.无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。2瓶8禽流感H9抗原1. 抗原为禽流感病毒接种SPF鸡胚培养，收获鸡胚尿囊液，经纯化、甲醛溶液灭活后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。抗原效价不低于7Log2；2

10、. 试剂在28保存，有效期不少于1年；在-20以下保存，有效期不少于2年；3. 试验结果阴阳性对照成立；4. 无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。1瓶9新城疫抗原1. 抗原为鸡新城疫病毒La Sota株接种SPF鸡胚培养，收获鸡胚尿囊液，经纯化、甲醛溶液灭活后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。抗原效价不低于9Log2；2. 试剂在28保存，有效期不少于1年；在-20以下保存，有效期不少于2年；3. 试验结果阴阳性对照成立；4无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。2瓶10布病虎红平板凝集抗原1. 主要成分及含量：含灭

11、活的布氏菌菌株2. 性状：红色均匀悬浮液，久置后，上不澄清，底部有少量红色菌体沉淀。3. 作用与用途：用于虎红平板凝集试验诊断布氏菌病。4. 用法与判定取被检血清0.03mL与抗原0.03mL相混合，4分钟内观察结果。凡出现“+”以上反应者判为阳性。对出现阳性反应的动物，须进一步作补体结合试验或其他辅助诊断试验。凝集反应判定标准：+ 凝集块呈菌丛状，凝块间液体明显清亮。+ 凝集反应较强，液体较清亮。+ 形成较明显卷边，凝集块间液体稍清亮。+ 稍能查到凝集，稍有卷边形成：凝集物间液体呈红色。 无凝集，呈均匀粉红色。5. 规格：5 mL/瓶6. 贮藏与有效期：28保存，有效期为12个月。7. 有经

12、农业部颁发的兽药生产的批准文号。2瓶11禽流感H5-Re8株阳性血清禽流感病毒H5亚型阳性血清（Re-8株）， 用于血凝抑制试验检测H5亚型（Re-8株）禽流感病毒试验的阳性对照。 2ml/瓶1.阳性血清系用禽流感病毒灭活疫苗接种SPF鸡，采血、分离血清，经冷冻真空干燥制成。血凝一抑制效价不低于7Log2；2. 试剂在28保存，有效期不少于1年；在-20以下保存，有效期不少于2年；3. 试验结果阴阳性对照成立；4.无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。1瓶12禽流感H7阳性血清禽流感病毒H7亚型阳性血清，用于H7亚型禽流感病原检测的阳性对照，2ml/瓶。阳

13、性血清系用禽流感病毒灭活疫苗接种SPF鸡，采血、分离血清，经冷冻真空干燥制成。血凝一抑制效价不低于7Log2； 试剂在28保存，有效期不少于1年；在-20以下保存，有效期不少于2年； 试验结果阴阳性对照成立；4.无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。1瓶13禽流感H9阳性血清1. 阳性血清系用禽流感病毒灭活疫苗接种SPF鸡，采血、分离血清，经冷冻真空干燥制成。血凝一抑制效价不低于7Log2；2. 试剂在28保存，有效期不少于1年；在-20以下保存，有效期不少于2年；3. 试验结果阴阳性对照成立；4. 无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进

14、行检验，应符合要求。1瓶14新城疫阳性血清1. 阳性血清系用鸡新城疫灭活疫苗接种SPF鸡，采血、分离血清，经冷冻真空干燥制成。血凝一抑制效价不低于8Log2；2. 试剂在28保存，有效期不少于1年；在-20以下保存，有效期不少于2年；3. 试验结果阴阳性对照成立；4. 无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。1瓶15伪狂犬ELISA试剂盒（gB）实验原理：微量滴定板已经用伪狂犬病毒抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与伪狂犬 gB 抗原剩余点位结合，形成复合物。经过洗板，加入含底物

15、TMB 液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比；若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在 450nm 波长检测 OD 值。注意：稀释缓冲液 4 加入血清稀释后会改变颜色试剂盒内容：试剂微量滴定板，已用伪狂犬 gB 病毒抗原包被酶结合物浓缩液（10X）阳性对照阴性对照稀释缓冲液 4稀释缓冲液 3浓缩洗涤液（20X）底物溶液终止液（H 2 SO 4 0.5M）1. 酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在 5（3）下贮存。2. 其它试剂可放置+2+26保存。3. 相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于 ID VET 所有系列产品。检测步骤：在使用前，所有

16、的试剂盒组分都必须回复到室温（215）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。1.血清1.1 短时间孵育1. 加样：s 每孔加入 50L 样品稀释液 4。s 孔 A1 和 B1 分别加入 50L 阳性对照。s 孔 C1 和 D1 分别加入 50L 阴性对照。s 剩下其他孔内加入 50L 待检测样品2. 37（2）下孵育 45min4min。1.2 过夜孵育1. 加样：s 每孔加入 75L 样品稀释液 4。s 孔 A1 和 B1 分别加入 25L 阳性对照。s 孔 C1 和 D1 分别加入 25L 阴性对照。s 剩下其他孔内加入 25L 待检测样品2. 21（5）下过夜孵育 16-20 小时。1.3

17、 不过过夜孵育或是短时间孵育，以下 1-9 步骤相同1. 甩干板中液体，用 300L 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。2. 用稀释液缓冲液 3 按照 1：10 的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1 份浓缩洗涤液加 9 份样品稀释液）。3. 吸取 100L 的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。4. 37（2）下孵育 30min。5. 甩干板中液体，用 300L 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次，洗涤过程中避免孔壁变干。6. 吸取 100

18、L 的底物溶液加入到每孔中。7. 21（5）下 暗室避光孵育 15min。8. 在每孔中加入 100L 的终止液终止显色反应。9. 在酶标仪的 450nm 波长读结果。实验有效性：在下列情形下实验有效： 阴性对照的平均 OD 大于 0.7 OD NC 0.7 阳性对照平均 OD 值小于阴性对照的 30% OD PC / OD NC 0.3结果判定：对于每个样品，计算其 S/N 百分比（S/N）每个样品得出一个（S/N）1盒16伪狂犬ELISA试剂盒（gE）实验原理：微量滴定板已经用伪狂犬病毒抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结

19、合物，它与伪狂犬 gE 抗原的剩余位点结合，形成抗原-酶结合物复合体。经过洗板，加入含底物 TMB 液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比，若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在 450nm 波长检测 OD 值。试剂盒内容：试剂微量滴定板，已用伪狂犬 gB 病毒抗原包被酶结合物标准液（直接使用）阳性对照阴性对照稀释缓冲液 13浓缩洗涤液（20X）底物溶液终止液（H 2 SO 4 0.5M试剂1. 酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在 5（3）下贮存。2. 其它试剂可放置+2+26保存。3. 相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于 ID VET

20、所有系列产品。检测步骤：在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（215）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。1.血清1.1 短时间孵育1. 加样：s 每孔加入 20L 样品稀释液 13。s 孔 A1 和 B1 分别加入 50L 阳性对照。s 孔 C1 和 D1 分别加入 50L 阴性对照。s 剩下其他孔内加入 50L 待检测样品。2. 37（2）下孵育 1h306min。1.2 过夜孵育( 可以提高检测能力)1. 加样：s 每孔加入 80L 样品稀释液 4。s 孔 A1 和 B1 分别加入 20L 阳性对照。s 孔 C1 和 D1 分别加入 20L 阴性对照。s 剩下其他孔内加入 20L

21、待检测样品。2. 21（5）下过夜孵育（16-20 小时）。1.3 不管过夜孵育或是短时间孵育，以下 1-8 步骤相同1. 甩干板中液体，用 300L 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。2. 吸取 100L 的酶标记结合物（直接使用）加入到每孔中。3. 21（5）下孵育 303min。4. 甩干板中液体，用 300L 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次，洗涤过程中避免孔壁变干。5. 吸取 100L 的底物溶液加入到每孔中。6. 21（5）下 暗室避光孵育 15mi

22、n2min。7. 在每孔中加入 100L 的终止液终止显色反应。8. 在酶标仪的 450nm 波长读结果。实验有效性：在下列情形下实验有效： 阴性对照的平均 OD 大于 0.7 OD NC 0.7 阳性对照平均 OD 值小于阴性对照的 30% OD PC / OD NC 0.3结果判定：对于每个样品，计算其 S/N 百分比（S/N）每个样品得出一个（S/N）短时孵育或过夜孵育的结果如下：值 结果值 结果S/N60% 阳性S/N60% 阳性60S/N70% 可疑60S/N70% 可疑1盒17小反刍兽疫试剂盒1.规格：96孔4板。竞争ELISA法检测小反刍兽疫病毒核蛋白的抗体。检测绵羊、山羊的血清

23、或血浆。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5（3）下贮存。其它试剂可放置+2+26保存。2.检测步骤： 在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（215）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2.1. 加样：每孔加入25L样品稀释液13。孔A1和B1分别加入25L阳性对照。孔C1和D1分别加入25L阴性对照。剩下孔内加入25L样品用于检测。2.2 37（3）下孵育45min4min。2.3 甩干板中液体，用300L左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。2.4用样品稀释液4按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1份浓缩洗涤液加

24、9份样品稀释液）。2.5 吸取100L的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。2.6 21（5）下孵育30min3min。2.7 甩干板中液体，用300L左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。2.8 吸取100L的底物溶液加入到每孔中。2.9 21（5）下暗处孵育15min2min。2.10 在每孔中加入100L 的终止液终止显色反应。2.11 在酶标仪的450nm波长读结果。3实验有效性：在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD 大于0.7 ODNC 0.7,阳性对照平均OD值小于阴性对照的30% OD PC/ ODNC 0.34结果判定：对于每个样品，计算其竞争

25、百分比（S/N%） S/N%= 100%每个样品得出一个（S/N %）：S/N值结果S/N%50%阳性50%S/N%60%可疑S/N%60%阴性5 试剂盒有效期不小于12个月, 到用户手上有效期应6个月。1盒18禽流感病毒 H5N1 亚型 荧光 PCR 检测试剂盒【作用与用途】本试剂盒采用荧光RCR技术，用于检测咽喉拭子、泄殖腔拭子、肌肉组织、脏器、血清或鸡胚尿囊液样品中H5亚型禽流感病毒核酸RNA，检测结果可用于对疑似H5亚型禽流感病毒感染的辅助诊断。【检测原理】本试剂盒以H5亚型禽流感病毒基因的高度保守序列为靶区域，设计特异性引物和探针，配以RT-PCR反应液，在荧光定量PCR仪上，应用实

26、时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现对H5亚型禽流感病毒RNA的检测。【主要成分】试剂盒组分数量规格（50T/盒）备注RT-PCR反应液600l/管1管酶反应液48l/管1管引物探针混合物96l/管1管阳性对照300l/管1管需要参与核酸提取阴性对照300l/管1管需要参与核酸提取无菌无核酸酶水750l/管1管【结果分析】1.对于测定样品FAM通道Ct值35，报告H5亚型禽流感病毒核酸阳性；2.对于测定样品FAM通道35Ct值40，报告H5亚型禽流感病毒核酸可疑，需要重新检测。若重新检测仍界于35Ct值40，可报告样品阳性，否则报告样品阴性；对于测定样品FAM通道No Ct或Ct值

27、40，报告H5亚型禽流感病毒核酸阴性。2盒19禽流感病毒 H7 亚型 荧光 PCR 检测试剂盒【作用与用途】本试剂盒采用荧光PCR技术，用于检测咽喉拭子、泄殖腔拭子、肌肉组织、脏器、血清或鸡胚尿囊液样品中H7亚型禽流感病毒核酸RNA，检测结果可用于对疑似H7亚型禽流感病毒感染的辅助诊断。【检测原理】本试剂盒以H7亚型禽流感病毒基因的高度保守序列为靶区域，设计特异性引物和探针，配以RT-PCR反应液，在荧光定量PCR仪上，应用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现对H7亚型禽流感病毒RNA的检测。【主要成分】试剂盒组分数量规格（50T/盒）备注RT-PCR反应液600l/管1管酶反应

28、液48l/管1管引物探针混合物96l/管1管阳性对照300l/管1管需要参与核酸提取阴性对照300l/管1管需要参与核酸提取无菌无核酸酶水750l/管1管【结果分析】1. 对于测定样品FAM通道Ct值35，报告H7亚型禽流感病毒核酸阳性；2. 对于测定样品FAM通道35Ct值40，报告H7亚型禽流感病毒核酸可疑，需要重新检测。若重新检测仍界于35Ct值40，可报告样品阳性，否则报告样品阴性；3. 对于测定样品FAM通道No Ct或Ct值40，报告H7亚型禽流感病毒核酸阴性。【包装规格】50T/盒【储存条件及有效期】试剂盒储存于-205条件下，避免反复冻融。如储存得当，试剂盒有效期为12个月。【

29、适用仪器】适用于ABI系列仪器、罗氏系列仪器、安捷伦系列仪器等。2盒病毒DNA/RNA提取试剂盒II主要从无细胞样本中提取病毒的DNA/RNA，如血清，血浆体液以及感染病毒的细胞悬浮液等样本。主要原理是使用裂解液破坏病毒的外套膜，在高盐的条件下DNA或RNA会吸附于管柱内的质膜上，洗涤去杂后，再用洗脱液提取DNA或RNA。20病毒核酸柱式提取试剂盒试剂盒组份 裂解 结合 洗脱洗涤 说明:只需 200 l 样品: 只需20分钟即可完成，产物可用于 RT-PCR/PCR, Real-time PCR/Real-time RT-PCR, DNA 自动荧光测序等分子生物试验 。1盒21鸭瘟ELISA试

30、 剂盒实验原理：应用双抗体夹心法测定标本中鸭瘟（DVE）表达。用纯化的鸭瘟（DVE）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中鸭瘟（DVE）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中鸭瘟（DVE）的存在与否。 试剂盒内容：30 倍浓缩洗涤液20ml1 瓶终止液6 ml1 瓶酶标试剂6ml1 瓶阳性对照0.5 ml1 瓶酶标包被板12

31、 孔8 条阴性对照0.5 ml1 瓶样品稀释液6ml1 瓶说明书1份显色剂 A 液6ml1 瓶封板膜2张显色剂 B 液6ml1/瓶密封袋1个试剂盒保存：；2-8。检测步骤：1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30

32、 倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。7.温育：操作同 3。8.洗涤：操作同 5。9.显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15 分钟。10.终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。计算和结果判定试验有效性：阳性对照孔平均值1.00; 阴性对照平均值0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品 OD 值 临界值（CUT OFF）者为鸭瘟（DVE）阴性，阳性判定：样品 OD 值 临界值（CUT OFF）者为鸭瘟（DVE）阳性。1盒合 计