动物细胞培养(2018.3.26)PPT学习教案

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1、会计学1动物细胞培养动物细胞培养(2018.3.26)第1页/共45页最基础的是 动物细胞培养技术第2页/共45页动物细胞培养技术第3页/共45页1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用2、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的学习目标：第4页/共45页 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？第5页/共45页第6页/共45页1、概念：从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2、原理：细胞增殖如何进行动物细胞培养?第7页/共45页第8

2、页/共45页 1、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？ 分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。 第9页/共45页 2、（旁栏思考）用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为。多数动物细胞培养的适宜pH为。 第10页/共45页3、（旁栏思考）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜

3、蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 第11页/共45页 4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？第12页/共45页定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。胰蛋白酶处理取出组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎单个细胞细胞悬液转入培养瓶内培养（贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。原代培养3、过程原代培养增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养去掉组织间蛋白加培养液第13页/共45页强调一：细胞贴壁过程细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。第14页/共45页当贴

4、壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。强调二：接触抑制细胞的接触抑制思考：如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？第15页/共45页传代培养第16页/共45页遗传物质未改变 原代细胞1050代细胞(细胞株)遗传物质己改变无限传代（细胞系）分瓶传代培养胰蛋白酶原代培养细胞贴壁接触抑制传代培养第17页/共45页细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40-50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传

5、代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。强调：细胞株、细胞系（了解即可，老课本体系）第18页/共45页总结：动物细胞培养过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官配置细胞悬液剪碎、用胰蛋白酶处理10代细胞转入培养瓶10-50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液稀释传代10代以内，遗传物质不改变传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变）分瓶传代培养原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。细胞株：一般说遗传物质未改变细胞

6、系：遗传物质已改变原代培养第19页/共45页多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的知识，认为体外培养动物细胞应该模拟内环境的哪些条件呢？第20页/共45页4.动物细胞培养的条件:1）无菌无毒 的环境： 4）气体环境：2）营养：3）温度和pH：对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。第21页/共45页旁栏思考：动物血清的作用？主要是：提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等。 第22页/共45页4.动物细胞培养的条件:1）无菌无毒 的环境： 适宜的温度：人和哺乳动

7、物细胞最适温度为0.5。适宜的酸碱度：PH：4）气体环境：2）营养：3）温度和pH：“95空气+5CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的； CO2维持培养液的PH。对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。第23页/共45页 生物制品的生产 用于基因工程 用于检测有毒物质 细胞的生理、病理、药理研究 第24页/共45页获得细胞细胞的全能性植物体培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比

8、较项目植物细胞和动物细胞培养的比较细胞群体第25页/共45页1动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是 A.动物细胞培养 B.动物细胞融合 C.单克隆抗体 D.胚胎核移植 2贴壁细胞的分裂方式具体是 A.无丝分裂 B.有丝分裂 C.减数分裂 D.增殖第26页/共45页3关于动物细胞培养的叙述，不正确的是 A.动物细胞培养前要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散开来 B.通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养 C.动物细胞培养只能传50代左右，所培育的细胞全部衰老死亡 D.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织 第27页/共45页再想一想利用动物体细胞核移植技术第28页/共45页理论基

9、础：动物的细胞核具有全能性第29页/共45页二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、定义： 将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易。动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难2、原理： 动物细胞核具有全能性第30页/共45页供体细胞培养（M卵母细胞）减数第二次分裂中期去核的卵母细胞供体细胞注入去核卵母细胞激活受体细胞，完成分裂、发育胚胎移植代孕牛子宫克隆牛4、过程：第31页/共45页供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（M中期：

10、供质）去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞构建重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体遗传基本相同的个体归纳:1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植2.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状第32页/共45页 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 保护濒危物种，增加存活数量 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 可以作为异种移植的供体 可以用于组织器官的移植第33页/共45页第34页/共45页 从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再将胚胎移到另一只母羊丙的子宫内，出生的小羊大多数性状 A. 难以预测 B. 像甲 C. 像乙 D.

11、 像丙 第35页/共45页2 .下列有关克隆的叙述，不正确的是A.生物体通过体细胞进行的无性繁殖 B.将某种瘤细胞体外培养繁殖成大量细胞C.扦插和嫁接实质上也是克隆 D.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA中第36页/共45页第37页/共45页幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞加培养液第38页/共45页细胞悬液10代细胞原代培养50代细胞传代培养无限传代遗传物质未改变遗传物质已改变第39页/共45页1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞

12、呢？、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？没有是成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质(胶原蛋白等)第40页/共45页、细胞膜的主要成份是什么？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？蛋白质和磷脂能注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近胚胎组织或幼龄动物的组织或

13、器官分裂、增殖旺盛第41页/共45页11、贴附性细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？13、如果此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？细胞株和细胞系通常是培养多少代的细胞?易于培养细胞贴壁，进行生长增殖 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。这样的过程叫做传代培养第42页/共45页14、如何理解原代培养和传代培养？15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？16、有些为何能一直传下去吗？动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？17、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？用于植皮的细胞培养应该不多于多少代？ 上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养不是都能发生突变，朝着癌细胞方向发展不是保存10代以内的细胞；因为1050部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展；10代第43页/共45页 体细胞核移植方法生产的克隆牛是对卢辛达进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。此外，还会受到不同环境的影响思考：第44页/共45页