东川雪上一支蒿的化学成分研究

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1、东川雪上一支蒿的化学成分研究 摘要雪上一支蒿是著名的有毒中药，但其化学成分研究报道较少，为进一步阐明其化学成分，作者开展了其80%乙醇提取物的化学成分研究，利用各种色谱方法从其块根中分离得到17个化合物，经过波谱学鉴定为：次乌头碱（1）、中乌头碱（2）、塔拉地萨敏（3）、尼奥灵（4）、附子灵（5）、乌头胺（6）、雪上一支蒿甲素（7）、雷乌宁（8）、宋果灵（9）、异可利定（10）、-谷甾醇（11）、胡萝卜苷（12）、硬脂酸（13）、三十烷醇（14）、软脂酸（15）、苯甲酸（16）、肌苷（17）。除化合物1，7外，其余15个化合物为首次从该植物中分离得到。 关键词雪上一支蒿；短柄乌头；化学成分；生

2、物碱 收稿日期2013-08-11 通信作者饶高雄，教授，主要从事中药化学及中药质量控制研究工作，E-mail： 作者简介王洪云，讲师，从事天然药物活性成分研究工作，E-mail：雪上一支蒿为毛茛科乌头属植物短柄乌头Aconitum brachypodum Diels.的块根，主要分布在云南省北部、东北部的东川、会泽、宣威等地，在四川西北部、甘肃西部及青海省也有少量分布。雪上一支蒿是著名的有毒中草药，具祛风、镇痛等功效，可用于风湿疼痛、跌打损伤等1-2。但雪上一支蒿药材主要来源植物短柄乌头的化学研究很少，目前报道的只有乌头碱（aconitine）、次乌头碱（hypaconitine）、雪上一支

3、蒿甲素（bullatine A）3等。作者对昆明市东川区产的雪上一支蒿药材（短柄乌头的块根）的化学成分进行了研究，从中分离鉴定了17个化合物，其中9个为二萜生物碱，1个为异喹啉生物碱，其余7个化合物为非生物碱成分。 1材料 熔点用Yanaco显微熔点仪测定，温度未校正；红外光谱用Shimadzu IR Prestige-21型红外光谱仪测定，KBr压片；质谱用Autospec-3000质谱仪测定；核磁共振谱（1D和2D）用AM-400或DRX-500型核磁共振波谱仪测定，TMS为内标。 柱色谱所用硅胶、薄层色谱硅胶板为青岛海洋化工厂或烟台大学生物科学与工程研究所产品；中性氧化铝为上海陆都化学试

4、剂厂产品；葡聚糖凝胶LH-20为Pharmacia公司产品；大孔吸附树脂AB-8为南开大学化工厂产品。所用试剂为一般工业纯或化学纯。 雪上一支蒿药材购于云南省昆明市东川区，海拔3 700 m，经云南省农业科学院药用植物研究所李绍平副研究员鉴定为毛茛科乌头属植物短柄乌头A. brachypodum的干燥块根。 2提取分离 干燥的雪上一支蒿药材（30 kg）粉碎后以80%乙醇回流提取3次，回收溶剂得棕色浸膏（6 kg），浸膏用3.6%盐酸溶液反复捏溶，过滤，滤液合并后滤清，用氨水调pH至9，用氯仿多次萃取，合并氯仿萃取液，回收溶剂得总生物碱膏423 g，记为Fr.A；上述酸不溶物以甲醇溶解，活性炭

5、脱色，趁热过滤，回收溶剂得浸膏210 g，记为Fr.B；氯仿萃取后的碱水液调pH至中性，浓缩成浸膏，以95%乙醇溶解，过滤，滤液回收溶剂得浸膏900 g，记为Fr.C。 Fr.A组分利用硅胶柱色谱（200300 目）分离，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（3011511）溶剂系统梯度洗脱，经TLC检查合并为6个流分段A-1A-6。其中A-2流份用环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（3011511）溶剂系统进行氧化铝色谱，得A-2-1A-2-4流分。A-2-1A-2-3流分，分别用葡聚糖凝胶LH-20柱色谱（丙酮）纯化，再用丙酮、甲醇等溶剂重结晶，得化合物1（1.5 g），2（118 mg），3（1.5 g）；

6、A-2-4流分利用氧化铝色谱以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（1011511）梯度洗脱及葡聚糖凝胶LH-20柱色谱（甲醇）纯化，再用甲醇重结晶，得化合物7（30 g）；A-3流分用环己烷-丙酮-二乙胺（15111011）溶剂系统进行硅胶柱色谱分离，用环己烷-乙酸乙酯（12181）溶剂系统反复进行中性氧化铝柱色谱纯化，再用丙酮或者甲醇溶剂重结晶，得化合物4（200 mg），9（21.8 g），10（25 mg）；A-5流分用环己烷-丙酮-二乙胺（1011811）溶剂系统反复进行硅胶柱色谱分离，用环己烷-丙酮（8151）溶剂系统反复进行中性氧化铝柱色谱纯化，再用丙酮重结晶，得化合物5（0.6 g），6（

7、7 mg）；A-6流分用环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（811511）溶剂系统反复进行硅胶柱色谱，再用甲醇重结晶，得化合物8（58 mg）。 Fr.B组分用甲醇溶解吸附于210 g硅胶（200300目）上，利用硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇系统梯度（401201）洗脱，收集流分（150 mL/份），经TLC检查后合为6个流分段B-1B-6。其中B-2流分用丙酮重结晶得到化合物11（0.5 g）；B-4流分用甲醇重结晶得化合物12（1.1 g）；B-5流分用丙酮重结晶得化合物13（31 mg）；B-6流分用丙酮重结晶得化合物14（6.2 mg）。 Fr.C组分利用D101大孔吸附树脂，以乙醇-水梯度（水，2

8、0%，60%，95%乙醇）洗脱，水部分弃去，经TLC检查合并斑点相同的流分，20%，60%乙醇部分合并为C-1，95%乙醇部分为C-2。其中C-1流分用甲醇溶解吸附于50 g硅胶（200300目）上，利用硅胶柱色谱以氯仿-甲醇系统梯度（301101）洗脱，得化合物15（5.5 mg），16（92 mg）；C-2流分用甲醇溶解吸附于20 g硅胶（200300目）上，利用硅胶柱色谱以氯仿-甲醇系统（301201）梯度洗脱，再用葡聚糖凝胶LH-20柱色谱（甲醇）纯化，得化合物17（87 mg）。 3结构鉴定 化合物1无色颗粒状结晶（丙酮），碘化铋钾反应呈阳性；mp 191192 ；ESI-MS m/

9、z 616M+H+；IR（KBr）max 3 500，2 927，2 821，1 718，1 597，1 452，1 381，1 276，1 107，952，715 cm-1；1H-NMR（CDCL3， 400 MHz）：8.0（2H，d，J = 6.5 Hz，H-2，6），7.46（2H，t，J=7.6 Hz，H-3，5），7.58（1H，t，J=7.2 Hz，H -4），4.90（1H，d，J=4.8 Hz，H-14），4.45（1H，dd，J=5.2，3.2 Hz，H-15），3.96（1H，d，J=8.4 Hz，H-6），3.72（3H，s，16-OCH3），3.61（1H，d，J=8

10、.4 Hz，H-18），3.30（1H，d，J=3.6 Hz，H-16），3.27（3H，s，1-OCH3），3.27（3H，s，6-OCH3），3.17（3H，s，18-OCH3），3.11（1H，d，J=8.0 Hz，H-18），3.07（1H，d，J=10.2 Hz，H-1），2.93（1H，m，H-12），2.92（1H，dd，J=6.8，5.0 Hz，H-9），2.87（1H，br s，H-7），2.32（3H，s，NCH3），2.13（1H，br t，J=5.0，10.0 Hz，H-10），2.13（1H，br t，J=10.2，6.0 Hz，H-2），2.07（1H，br t，J

11、=6.0 Hz，H-2），1.63（2H，J=9.2，6.0 Hz，H-3），1.36（3H，s，CH3CO）；13C-NMR（CDCL3，100 MHz）数据见表1。以上数据与文献4报道的数据基本一致，鉴定为次乌头碱。 化合物2无色颗粒状结晶（丙酮），碘化铋钾反应呈阳性；mp 208210 ；ESI-MS m/z 632 M+H +；IR（KBr）max 3 512，2 931，2 885，1 710，1 560，1 456，1 278，1 095，1 028，717 cm-1；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）：8.01（2H，d，J=7.0 Hz，H-2，6），7.57（1H，t

12、，J=7.0 Hz，H-4），7.46（2H，t，J=7.5 Hz，H-3，5），4.87（1H，d，J=5.0 Hz，H-14），4.57（1H，d，J=2.5 Hz，H-15），4.34（1H，d，J=2.7 Hz，H-16），4.03（1H，d，J=7.0 Hz，H-1），3.63（1H，d，J=9.0 Hz，H-18），3.55（1H，d，J=9.0 Hz，H-18），2.75（1H，d，J=11.5 Hz，H-17），2.33（3H，s，NCH3），1.37（3H，s，CH3C=O）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）数据见表1。以上数据与文献5报道的数据基本一致，鉴定为中

13、乌头碱。 化合物3无色颗粒状结晶（丙酮），碘化铋钾反应呈阳性；mp 135136 ；EI-MS m/z 421（M+）；IR（KBr）max 3 522，3 419，2 966，2 922，2 826，2 792，1 454，1 396，1 085 cm-1；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）：4.12（1H，dd，J=4.4，9.2 Hz，H-14），3.32（3H，s，16-OCH3），3.28（3H，s，1-OCH3），3.25（3H，s，18-OCH3），3.08，2.97（各1H，d，J=8.8 Hz，H-18），2.35（2H，m，N-CH2-），1.02（3H，t，J=6

14、.8 Hz，NCH2CH3）；13），13C-NMR（CDCl3，100 MHz）数据见表1。以上数据与文献6报道的数据基本一致，鉴定为塔拉地萨敏。 化合物4无色块状结晶（丙酮），碘化铋钾反应呈阳性；mp 154156 ；ESI-MS m/z 438 M+H+；IR（KBr）max 3 529，3 400，2 933，2 870，2 816，1 205，1 114，985，740 cm-1；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）：4.20（1H，dd，J = 7.5，4.5 Hz，H-14），4.15（1H，d，J=7.0 Hz，H-6），3.63（1H，br s，H-1），3.60（1H

15、，d，J=8.0 Hz，H-18），3.33（3H，s，6-OCH3），3.32（3H，s，16-OCH3），3.31（3H，s，18-OCH3），3.25（1H，d，J=8.0 Hz，H-18），2.95（1H，br s，H-17），2.50（2H，br s，H-19），2.37（2H，m，N-CH2-），1.99（1H，br s，H-7），1.60（2H，m，H-2），1.48（2H，m，H-3），1.12（3H，t，J=6.2 Hz，NCH2CH3）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）数据见表1。以上数据与文献7报道的数据基本一致，鉴定为尼奥灵。 化合物5无色块状结晶（丙酮），

16、碘化铋钾反应呈阳性；mp 214215 ；ESI-MS m/z 454 M+H+；IR（KBr）max 3 533，3 458，2 933，2 823，1 296，1 107 cm-1；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）：4.40（1H，t，J = 1.8 Hz，H-15），4.12（1H，d，J=7.0 Hz，H-6），4.06（1H，br s，H-14），3.62（1H，d，J= 8.0 Hz，H-1），3.42（3H，s，16-OCH3），3.34（3H，s，6-OCH3），3.31（3H，s，18-OCH3），3.15（1H，dd，J=8.5 Hz，H-16），2.35（2H，

17、m，N-CH2-），2.01（1H，m，H-7），1.62（2H，m，H-2），1.48（2H，m，H-3），1.12（3H，t，J=7.1 Hz，NCH2CH3）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）数据见表1。以上数据与文献8报道的数据基本一致，鉴定为附子灵。 化合物6无色块状结晶（丙酮），碘化铋钾反应呈阳性；mp 132133 ，ESI-MS m/z 500 M+H+；IR（KBr）max 3 530，3 452，2 933，2 819，1 286，1 111 cm-1；1H-NMR（C5D5N，400 MHz）：4.42（1H，t，J=1.9 Hz，H-15），4.10（1H，

18、d，J=7.2 Hz，H-6），4.03（1H，br s，H-14），3.77（3H，s，16-OCH3），3.45（1H，d，J=8.0 Hz，H-1），3.31（3H，s，18-OCH3），3.24（3H，s，6-OCH3），3.21（3H，s，1-OCH3），3.13（1H，dd，J=8.2 Hz，H-16），2.37（2H，m，N-CH2-），1.12（3H，t，J=7.1 Hz，NCH2CH3）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）数据见表1。以上数据与文献9报道的数据基本一致，鉴定为乌头胺。 化合物7白色粉末状结晶（甲醇），碘化铋钾反应呈阳性；mp 249250 ；EI-M

19、S m/z 343（M+）；IR（KBr）max 3 381，2 924，2 879，2 792，1 643，1 458，1 085，898 cm-1；1H-NMR（C5D5N，400 MHz）：5.76，5.29（各1H，t，J=2.0 Hz，H-17），4.67（1H，br s，H-15），4.08（1H，d，J=9.5 Hz，H-11），2.50（2H，m，N-CH2-），1.06（3H，t，J=7.2 Hz，NCH2CH3）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）数据见表2。以上数据与文献10报道的数据基本一致，鉴定为雪上一支蒿甲素。 化合物8白色颗粒状结晶（甲醇），碘化铋钾反应

20、呈阳性，mp 291292 ；EI-MS m/z 360 M+H+；IR（KBr）max 3 381，3 025，2 924，2 879，2 782，1 643，1 458，1 085，898 cm-1；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）：5.17（1H，br s，H-17a），4.97（1H，br s，H-17b），4.32（1H，d，J=9.0 Hz，H-11），4.16（1H，br s，H-15），4.07（1H，dd，J=7.0，7.4 Hz，H-1），1.75（2H，m，H-2），1.27（2H，m，H-3），1.13（3H，t，J=7.1 Hz，NCH2CH3），0.78（

21、3H，s，H-18）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）数据见表2。以上数据与文献11报道的数据基本一致，鉴定为雷乌宁。 化合物9无色块状结晶（甲醇），碘化铋钾反应呈阳性；mp 202204 ；ESI-MS m/z 358 M+H+；IR（KBr）max 3 522，3 439，2 954，2 889，1 707，1 649，1 240，1 109，877 cm-1；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）：5.30（1H，br s，H-17），5.21（1H，br s，H-17），4.36（1H，d，J=8.4 Hz，H-15），3.85（1H，dd，J=15.6，7.6 Hz，

22、H-1），3.09（1H，br d，J=4.0 Hz，H-13），2.55，2.34（各1H，d，J=12.4 Hz，H-19），2.55（2H，m，N-CH2-），1.37（3H，t，J=6.8 Hz，NCH2CH3），0.78（3H，s，H-18）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）数据见表2。以上数据与文献10报道的数据基本一致，鉴定为松果灵。 化合物10无色棱柱状结晶（丙酮-甲醇），碘化铋钾反应呈阳性；mp 177179 ；ESI-MS m/z 342M+H+；IR（KBr）max 3 450，3 147，2 954，2 837，2 787，1 591，1 460，1 380

23、，1 319，1 238，1 188，1 001，806 cm-1；1H-NMR（CDCl3，500 MHz）：6.85（1H，d，J=8.0 Hz，H-9），6.82（1H，d，J=8.0 Hz，H-10），6.70（1H，s，H-4），3.92（3H，s，2-OCH3），3.90（3H，s，3-OCH3），3.70（3H，s，11-OCH3），3.21（1H，dd，J=20.0，9.0 Hz，H-6），3.05（1H，dd，J=15.0，12.0 Hz，H-8），3.04（1H，dd，J=12.0，3.2 Hz，H-7a），2.93（1H，br t，J=16.0，6.8 Hz，H-6），2

24、.70（1H，dd，J=15.0，3.2 Hz，H-8），2.56（3H，s，NCH3），2.48（2H，dd，J=20.0，9.0 Hz，H-5）；13C-NMR（CDCl3，125 MHz）：125.9（C-1），129.9（C-1a），142.2（C-2），151.4（C-3），111.2（C-4），129.8（C-4a），29.1（C-5），52.9（C-6），62.9（C-7a），35.7（C-8），129.8（C-8a），118.9（C-9），111.0（C-10），149.5（C-11），144.0（C-12），120.1（C-13），62.0（3-OCH3），56.2（2-OC

25、H3），55.8（11-OCH3），43.7（NCH3）。以上数据与文献12报道的数据基本一致，鉴定为异可利定。 化合物1117分别鉴定为-谷甾醇13、胡萝卜苷13、硬脂酸、三十烷醇、软脂酸、苯甲酸、肌苷14。 参考文献 1肖培根.新编中药志.上卷M.北京：化学工业出版社，2002：946. 2中国药典.一部 S.1977：530. 3江苏植物研究所.新华本草纲要.第1册M.上海：上海科学技术出版社，1988：99. 4王宪楷，赵同芳，赖盛.中坝鹅掌叶附子中的生物碱研究IJ.中国药学杂志，1995，30（12）：716. 5赵安幸，彭崇胜，张晨虹，等.黄山乌头中的二萜生物碱J.中国天然药物，2

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