ELISA及相关免疫分析技术PPT学习教案

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1、会计学1ELISA及相关免疫分析技术及相关免疫分析技术2022-6-12JSCCL XUBIN第1页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第2页/共54页2022-6-12JSCCL XUBINE EE EE EE EA bA bA bA bA bA bA bA bA bA bA bA bA bA bA bA bA gA gA gA gA gA gA g 待 测 抗 原用 抗 体 包 被微 量 滴 定 板 孔加 入 抗 原 温 育加 入 酶 联 抗 体温 育加 入 底 物 并 观 察颜 色 变 化 或 荧 光封 闭洗 涤洗 涤双 抗 体 夹 心 E L IS A 法 检 测 可 溶

2、 性 抗 原A g = 抗 原 ， A b = 抗 体 ， E = 酶第3页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN固相包被抗原待测抗体酶标记第二抗体底物第4页/共54页固相包被抗原待测抗体酶标记特异抗体底物第5页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第6页/共54页固相包被抗链抗体捕获的IgM抗体酶标记抗原底物第7页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第8页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第9页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第10页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN 第11页/共54页2022-6-12

3、JSCCL XUBINPRB941 Data SheetPage 3 of 3- INTERNATIONAL Anti-HIV 1/2 Test Kits -AbbottAbbottAbbottBehringBiotestBoeh. Mann.Diag. Past.3rd Gen. PlusAxSYMPRISMEnzygnostHIV 1/2Enzymun Gen 3 GenscreenMemberDays SinceRL19RL19RL23RL23RL29BBIRL29I.D. #1st Bleeds/cos/cos/cos/cos/cos/cos/coPRB941-0100.40.30.2

4、0.2 0.40.2 0.2PRB941-0240.40.40.30.1 0.40.2 0.3PRB941-0390.40.50.50.1 0.30.2 0.4PRB941-04186.65.06.25.97.80.4 1.5PRB941-05215.84.95.86.07.82.2 9.3PRB941-06254.74.85.55.47.87.514.9MurexOrg. Tek.OrthoRocheFujirebioIn-HouseIn-HouseICE HIV 1.0.2 Uniform II PlusCaptureDAGSSerodiaIgAIgMMemberRL19RL23RL29R

5、L23RL23RL12RL12I.D. #s/cos/cos/cos/coResult2s/cos/coPRB941-01 0.30.4 0.00.0-/-0.40.3PRB941-02 0.30.4 0.00.1-/-0.40.3PRB941-03 0.30.5 0.10.1-/-0.40.8PRB941-04 9.02.511.50.3+/-2.14.3PRB941-0511.03.711.52.2+/-2.34.5PRB941-0611.05.811.59.2+/-1.92.92Results for this particle agglutination assay are expre

6、ssed for HIV-1/HIV-2 respectively.June 1998, P2第12页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第13页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第14页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第15页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN基因型血清型基因长度 表达（前s1-55aa，s-226aa） 突变频率流行地域前s2聚合酶核心前C区（G1896A）核心启动子（1762/1764）Aadw2,ayw132211198451856.5%45%欧美非Badw2,ayw1321511984318350%16%

7、亚洲Cayr,adrq+,adrq-,adw2321511984318350%58%亚洲,澳洲,美国Dayw2,ayw3,ayw4318210883218343%12%地中海,俄美,印度Eayw4321211884218327%7%西非Fayw4,adw2,321511984318316%中南美洲Gadw23248108842195100%中北美洲Hadw43215119843183美洲第16页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第17页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第18页/共54页2022-6-12JSCCL XUBINn经济性：试剂在同等质量条件下通过大

8、规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。第19页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第20页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第21页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN对免疫項目（化学发光法）的影响对玻璃采血管的比例（）020406080100120AFPCEACA19-9TSHFT3FT4HBsAgVB12（）第22页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN0 00.050.050.10.10.150.150.20.20.250.250.30.3溶血溶血RFRFAFPAFP肝素肝素A A对照对照第23页/共54页2022-6-12

9、JSCCL XUBIN第24页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第25页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN加样器合格标准水合格标准第26页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第27页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第28页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第29页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第30页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第31页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第32页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN 水浴法 孵箱法 微波法A中央（

10、S） 0.307（0.023） 0.282（0.028） 0.151（0.059） A周围（S） 0.290（0.038） 0.357（0.047） 0.097（0.038） P 0.05 0.01 0.01第33页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第34页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第35页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第36页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第37页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第38页/共54页2022-6-12JSCCL XUBINCV为该试剂的批内CV (一般在15-20%

11、间）；2）C.O2s，s为实验室做室内质控ROC的s。第39页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第40页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第41页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第42页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第43页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第44页/共54页2022-6-12JSCCL XUBINHBsAg HBeAg HBcAb-IgG HBcAg-IgM HBeAb HBsAb 临床意义临床意义 + + 急性急性HBV感染早期感染早期HBV复制活跃复制活跃 + + + + 急慢性急慢性H

12、BV感染，感染，HBV复制活跃复制活跃 + + + 急慢性急慢性HBV感染，感染，HBV复制中跃复制中跃 + + + + 急慢性急慢性HBV感染，感染，HBV复制低跃复制低跃 异型慢性乙型肝炎异型慢性乙型肝炎 + + + HBV复制停止或极低复制停止或极低 + + 平静的平静的HBV携带状态，携带状态，HbsAg 极低测不出，极低测不出，HBsAg/抗抗HBs空白期空白期 + HBV既往感染，未产生抗既往感染，未产生抗-HBs + + + 抗抗HBs出现前期，出现前期，HBV复制低复制低 + + + HBV感染恢复期感染恢复期 + + HBV感染恢复期感染恢复期 + + + 不同亚型再感染不同

13、亚型再感染+ 整合整合 病后或接种疫苗后获得免疫病后或接种疫苗后获得免疫第45页/共54页2022-6-12JSCCL XUBINHBsAg A. 急、慢性肝炎的诊断。 B. 献血员和各种血制品的筛选。 C. 急性肝炎最早期的预后指标。 D.流行病学调查。 注意事项注意事项：一、 HBsAg假阳性 血清分离不佳或肝素抗凝血；二、 HBsAg假阴性 感染早期易形成抗原抗体复合物，这种情况需要检测抗HBc-IgM及HBV DNA； 多数商用试剂盒检测系统采用的为多克隆抗体检测HBsAg的adr、ayw型，S区的点突变即可导致临界测定值或阴性结果； 由于慢性病毒携带者（低水平HBsAg携带者）或HB

14、V感染潜伏期， HBsAg浓度低于检测水平的下限。 第46页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN抗抗-HBs： A. 预后预后：抗HBs经常在肝炎症状出现后4-6个月出现，一般表示病毒清除，感染开始恢复。近年来的研究发现在抗HBs 阳性患者体内有5%HBV DNA阳性，慢性肝炎中的一些抗HBs阳性者，肝细胞中可检出HBsAg、HBeAg、HBV DNA，因此尽管自然感染者抗HBs阳转后，大多数预后良好，但也不能过于乐观，应定期复查。 B. 流行病学调查。流行病学调查。 C. 疫苗接种对象的筛选和效果观察疫苗接种对象的筛选和效果观察。接种疫苗后，抗HBs浓度超过10 IU/L，表明

15、其具有保护性。加强免疫后4-8周，大于100 IU/L，即便以后有所降低，其免疫力能维持10年以上。 注意事项：注意事项： A 怀疑假阳性结果时要进行中和试验。 B 抗HBs经常在HBsAg消失几周至几月后方呈阳性（窗期），极少数在HBsAg消失后即为阳性，同时可检出抗同时可检出抗HBs及及HBsAg见于以下几种情形见于以下几种情形：前后或同时感染两种亚型HBV，抗HBs及HBsAg同时检出通常要持续很久，且浓度均很高； 抗HBs假阳性；编码HBsAg的基因变异使得HBsAg抗原性改变，原型抗HBs不能将其清除。第47页/共54页2022-6-12JSCCL XUBINHBeAg： A. 评价

16、血清传染性：慢性HBsAg携带者中，HBeAg及HBV-DNA检测可以用来评估其传染危险性，90% HBeAg阳性HBsAg携带者可以传染给她们的新生儿，而HBeAg阴性或抗HBe阳性的孕妇中只有10%会传染给婴儿。 B. 预后：急性期HBeAg的消失通常伴随ALT的降低，预示着疾病的好转；HBeAg持续阳性超过12周，提示HBV感染趋向慢性；HBeAg阳性的无症状者较少。 注意事项：注意事项： （1）假阴性：前C区基因变异导致不能生成和分泌HBeAg，血清中HBeAg阴性，但这种突变并不影响乙肝病毒的复制，仍可形成完整的病毒颗粒，该种情况下尽管检测不到HBeAg，慢性HBV感染炎症反应也相当

17、强。HOOK 效应 （2）假阳性： 包被抗体不纯（含有抗C）第48页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN电化学发光HBeAg检测的高线性第49页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN抗抗-HBe： A、反映血清感染性：通常情况下HBsAg（+）、抗HBe（+）病例的传染性较低； B、监视急性和慢性HBV感染：血清HBeAg消失、抗HBe出现对监视急慢性HBV感染很有诊断价值，特别是抗HBe出现更有预见价值，在干扰素治疗中出现表明疾病状况的改善； C、预后：抗HBe阳转出现在HBeAg阴转后早期（2周内），可能预示急性肝炎恢复顺利；如出现在晚期（HBeAg阴转后6周以上

18、）或不出现抗HBe，可能发展为慢性肝炎。 注意事项：注意事项： 抗HBe不宜作流行病学调查，因为其阳性率远远低于抗HBc，且实际上抗HBe阳性者抗HBc 往往也呈阳性。 HBeAg和抗HBe测定一般适用于HBsAg阳性者，几乎所有急性感染者均出现HBeAg或抗HBe阳性，偶尔两者同时阳性，只有少数HBsAg携带者（通常其浓度较低）， HBeAg和抗HBe均阴性。 第50页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN乙肝抗原/抗体检测的血清转型(Seroconversion)第51页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN抗抗-HBc： A、诊断急慢性HBV感染：急性HBV感染时

19、抗HBc的滴度平均为1:500-1:1000，健康携带者的滴度一般为1:10，慢性HBV感染者一般为1:100，HBsAg(-)若抗HBc滴度很高提示为慢性HBV感染（隐匿性感染）。 B、调查特定人群HBV感染的流行率或危险性；该指标在感染后可持续存在几年至几十年，因此很适合调查感染的流行率性。 C、验证抗HBs及HBsAg阳性结果。 注意事项：注意事项：A、 临界阳性一般是假阳性，是由于临界阳性一般是假阳性，是由于IgM型引起的交叉反应。型引起的交叉反应。B、 抗抗HBc阴性而阴性而HBsAg阳性一般发生在免疫缺陷病例，这时存在阳性一般发生在免疫缺陷病例，这时存在HBV复制的复制的其他标志如

20、其他标志如 HBeAg及高滴度的及高滴度的HBV DNA。C、 对抗对抗HBc单独阳性，排除假阳性后，美国单独阳性，排除假阳性后，美国CDC有以下解释：有以下解释： 急性感染后的恢复早期（窗期）在急性感染后的恢复早期（窗期）在HBV急性感染消退时，急性感染消退时，HBsAg减少甚至减少甚至消失，抗消失，抗HBs尚未出现，抗尚未出现，抗HBc是唯一能检出的特异性指标，此时抗是唯一能检出的特异性指标，此时抗HBc IgM也为阳性。也为阳性。 被动转移：被动转移：HBsAg携带者母亲所生的婴儿可因母体抗体被动转移（抗携带者母亲所生的婴儿可因母体抗体被动转移（抗HBc可通过胎盘）而呈现抗可通过胎盘）而呈现抗HBc单独阳性。单独阳性。 远期感染伴抗远期感染伴抗 HBs消失，这种情况通常在感染后多年才会发生，且相当少消失，这种情况通常在感染后多年才会发生，且相当少见（见（0.5%）。）。 远期感染伴有低水平远期感染伴有低水平HBsAg。 HDV重复感染继发重复感染继发HBsAg产生下降产生下降 第52页/共54页2022-6-12JSCCL XUBIN第53页/共54页