动物细胞融合pptPPT学习教案

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1、会计学1动物细胞融合动物细胞融合ppt “番茄马铃薯”（理想图） 通过长期的实验，科学家通过长期的实验，科学家们采用植物体细胞杂交技术获们采用植物体细胞杂交技术获得了得了“番茄番茄马铃薯马铃薯”植株。植株。第1页/共35页杂杂种种植植株株融合融合的原的原生质生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化过程过程植物细胞植物细胞A原生质体原生质体B原生质体原生质体A杂种杂种细胞细胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法？方法？植物细胞植物细胞B植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术纤维素酶纤维素酶、果胶酶、果胶酶等等物理法：物理法：离心、振动、电激等离心、振

2、动、电激等化学法：化学法：聚乙二醇等试剂聚乙二醇等试剂筛选筛选第2页/共35页如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？动物细胞也能融合吗？第3页/共35页动物细胞的全能性会动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到度的提高而逐渐受到抑制，分化潜能逐渐抑制，分化潜能逐渐变弱变弱第4页/共35页动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术制备单克隆抗体技术制备单克隆抗体技术动物细胞核移植技术动物细胞核移植技术动动物物细细胞胞工工程程常常用用技技术术第5页/共35页 酶解法，如纤维素酶或果胶酶酶解法，如

3、纤维素酶或果胶酶2.2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁无需，因为动物细胞无细胞壁3.3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；聚乙二醇等化学方法离心、振动、电激等物理方法；聚乙二醇等化学方法4.4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能能 还可以利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导5.5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养植物体细胞杂交应

4、先进行原生质体的融合再进行组织培养形形 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？物个体吗？不能，只能形成杂种细胞不能，只能形成杂种细胞可用胰蛋白酶将细胞分散可用胰蛋白酶将细胞分散第6页/共35页一、动物细胞融合技术一、动物细胞融合技术1.概念：概念： 动物细胞融合（动物细胞融合（cell fusion）也称为）也称为细胞杂交细胞杂交，是指是指两个或多个两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核单核细胞，称为细胞，

5、称为杂交细胞杂交细胞。结果：结果： “2个或多个动物细胞个或多个动物细胞”“1个杂交单核细胞个杂交单核细胞” 第7页/共35页2、诱导方法、诱导方法物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。举例：举例：仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性保留融合活性保留融合活性（诱导细胞融合（

6、诱导细胞融合）第8页/共35页用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞细胞核核 灭活的病毒颗粒黏附于灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成单核杂交细胞细胞融合，形成单核杂交细胞原理：细胞膜具有一定的流动性原理：细胞膜具有一定的流动性有丝分裂有丝分裂第9页/共35页4、过程、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合诱导，融合杂交细胞AB 有丝分裂有丝分裂（膜融合、质融合、核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。3、原理

7、：、原理：细胞膜的流动性第10页/共35页6、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。新品种培育等的重要手段。特别是利用特别是利用杂交瘤技术杂交瘤技术制备制备单克隆抗体。单克隆抗体。5、意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。第11页/共35页比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞融合前细胞融合前的处理的处理诱导方法诱导方法结果结果用途用途意义意义细胞膜的流动性细胞膜

8、的流动性、细胞的全能性、细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合使细胞分散后使细胞分散后诱导细胞融合诱导细胞融合物理（离心、振动、物理（离心、振动、电刺激）化学（电刺激）化学（PEG）物理、化学方物理、化学方法灭活的病毒法灭活的病毒培育新品种培育新品种 制备单克隆抗体、病制备单克隆抗体、病毒疫苗、干扰素等毒疫苗、干扰素等形成杂种植株形成杂种植株形成杂种细胞，形成杂种细胞，生产细胞产品生产细胞产品突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能第12页/共35页1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，

9、正确、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是的是A诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B所用的技术手段完全相同所用的技术手段完全相同 C所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞D第13页/共35页2、下列关于动物细胞融合，叙述正确的是、下列关于动物细胞融合，叙述正确的是A动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的双核或多核细胞称为杂交细胞胞遗传信息的双核或多核细胞称为杂交细胞 B原理是细胞的全能性原理是细胞的全能性C打破生殖障碍，使远缘杂交成为现实打破生殖障碍，使远缘杂交成为现实

10、D常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、离心等常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、离心等3、动物细胞融合的目的中最重要的是、动物细胞融合的目的中最重要的是 A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞DB第14页/共35页1.1.什么是抗体？什么是抗体？2.2.主要分布在哪里？主要分布在哪里？3.3.由什么细胞产生由什么细胞产生提问提问？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有发生特异性结合的具有免疫免疫功能的功能的球蛋白球蛋白。二、制备单克

11、隆抗体技术二、制备单克隆抗体技术主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。第15页/共35页 抗体抗体 抗原抗原 B B淋巴细胞淋巴细胞刺激刺激增殖分化增殖分化效应效应B B细胞细胞（浆细胞浆细胞）分泌分泌每一个浆细胞只能分泌一种抗体每一个浆细胞只能分泌一种抗体4. 传统抗体的生产方法及缺陷？传统抗体的生产方法及缺陷？反复注射抗反复注射抗原原克隆单一的效应克隆单一的效应B细细胞胞不能无限增殖不能无限增殖产量低、纯度低产量低、纯度低抗体特异性差抗体特异性差第16页/共35页1 1、设计方案：、设计方案：一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异

12、性抗体只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖米尔斯坦和科勒米尔斯坦和科勒杂交细胞杂交细胞2 2、制备过程：、制备过程：继承了双亲细胞的遗传物质继承了双亲细胞的遗传物质：既能无限增殖，又能产生特异性抗体既能无限增殖，又能产生特异性抗体第17页/共35页注入小鼠注入小鼠细胞融合细胞融合分离分离抗原注入小鼠体抗原注入小鼠体内内骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞培养细胞培养选择培养细胞选择培养细胞培养基培养基体内培养体内培养体外培养体外培养从腹水提取从腹水提取从培养液提取从培养液提取经过免疫经过免疫的的B淋巴细胞淋巴细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体单克隆抗体第18页/共35页 抗

13、原（羊的红细胞）注射到小鼠体内抗原（羊的红细胞）注射到小鼠体内获取获取经过免疫经过免疫的的B淋巴细淋巴细胞胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞融合融合灭活的病毒灭活的病毒、 PEG多种杂交细胞多种杂交细胞选择性培养基选择性培养基杂交瘤细胞杂交瘤细胞抗体阳性检测抗体阳性检测足够数量的、能产生特定抗体的杂交瘤细胞群足够数量的、能产生特定抗体的杂交瘤细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔培养液培养液小鼠腹水小鼠腹水单克隆抗体单克隆抗体筛筛选选克隆化培养克隆化培养筛选筛选(动物细胞培养技术动物细胞培养技术)(动物细胞融合技术动物细胞融合技术)第19页/共35页成的杂交瘤细胞也有很多种，所以需筛选

14、出产生特定抗体的杂交瘤细胞。第20页/共35页优点：特异性强，灵敏度高，产量大优点：特异性强，灵敏度高，产量大第21页/共35页 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合特异性结合用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤细胞，又减少了用药剂量，既不损伤细胞，又减少了用药剂量，疗效高、毒副作用小的新型药物疗效高、毒副作用小的新型药物优点：准确、高效、简易、快速优点：准确、高效、简易、快速第22页/共35页动物细胞动物细胞融合技术融合技术制备单克隆制备单克隆抗体技术抗体技术

15、过程：不同的动物细胞过程：不同的动物细胞杂交细胞杂交细胞原理：原理： .应用：主要用于制备应用：主要用于制备 。 制备：获取制备：获取 细胞和骨髓瘤细胞细胞和骨髓瘤细胞 融合、筛选融合、筛选 细胞细胞 动物细胞培养动物细胞培养 提取单克隆抗体提取单克隆抗体应用：作为应用：作为 ，用于治疗，用于治疗疾病或运载药物。疾病或运载药物。 诱导剂诱导剂细胞膜的流动性细胞膜的流动性单克隆抗体单克隆抗体B淋巴淋巴杂交瘤杂交瘤生物导弹生物导弹课堂小结：第23页/共35页1 1、单克隆抗体是指（单克隆抗体是指（ ） A.A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.B.单个单个B B淋巴细胞

16、增殖产生的抗体淋巴细胞增殖产生的抗体 C. C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体 D. D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体单个抗体通过克隆化，产生大量抗体C2 2、“生物导弹生物导弹”是指是指 （ ） A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 C. C.产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D.D.在单克隆抗体上连接抗癌药物在单克隆抗体上连接抗癌药物 D练一练练一练第24页/共35页3.3.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤

17、细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）淋巴细胞淋巴细胞 B B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞自身融合细胞骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A.A. B B C.C. D D C第25页/共35页4.生产单克隆抗体时，在培养基中加入某种试剂能筛生产单克隆抗体时，在培养基中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，该试剂的作用是选出杂交瘤细胞，该试剂的作用是 A能选择性抑制骨髓瘤细胞的能选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制复制B能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活能阻止淋

18、巴细胞的原癌基因被激活C能抑制淋巴细胞的能抑制淋巴细胞的DNA复制复制D能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成A第26页/共35页植物组织培养技术植物组织培养技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术基因工程基因工程BD第27页/共35页下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案菌抗体的实验方案2 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4 4、图中、图中B B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂

19、，该细胞继承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,_,又能又能_。1 1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3 3、A A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5 5、C C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其中培养两个阶段，其中_代代以内的细胞可以保持正常的二倍体核型。以内的细胞可以保持正常的二倍体核型。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B B淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病灭活病毒毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代10B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂

20、交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC因为没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生此种抗体的效应因为没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生此种抗体的效应B细胞细胞第28页/共35页作业：作业：完成创新设计P3034第29页/共35页A A 、 B B细胞为动物细胞细胞为动物细胞, ,请据图回答问题请据图回答问题: :A细细胞胞B细胞细胞C细细胞胞D细细胞胞(1)(1)若若A A细胞为骨髓瘤细胞，细胞为骨髓瘤细胞，B B细胞为淋巴细胞细胞为淋巴细胞, ,那么那么D D细胞称为细胞称为 细胞细胞, ,由由D D细胞连续分裂产生细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称

21、为大量细胞的过程，称为 。杂交瘤杂交瘤克隆克隆练一练练一练第30页/共35页(2)D(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是细胞中产生的抗体其化学本质是 , ,合成该物质的场所是合成该物质的场所是 , ,它是由它是由 控制合成的控制合成的, ,合成过程包括合成过程包括 和和 两个重要步骤两个重要步骤. .球蛋白球蛋白核糖体核糖体基因基因转录转录翻译翻译(3)D(3)D细胞中产生的抗体具有细胞中产生的抗体具有 作用作用, ,与血清抗体相比其优越之处在于与血清抗体相比其优越之处在于 强强 高高. .免疫免疫特异性特异性灵敏度灵敏度第31页/共35页(4)(4)若若A A为人细胞为人细胞,B,B为鼠细胞

22、为鼠细胞, ,用同位素标记用同位素标记A A细胞膜细胞膜上的蛋白质上的蛋白质,B,B不标记不标记, ,在在C C细胞时细胞时, ,检测结果发现整个检测结果发现整个细胞一半有放射性另一半没有细胞一半有放射性另一半没有. .在在D D细胞时细胞时, ,检测结果检测结果发现整个细胞都有放射性发现整个细胞都有放射性, ,请解释原因请解释原因 . .构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动第32页/共35页 如果把如果把B B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起，会淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起，会有几种融合方式？有几种融合方式？B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞+ + + +B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B淋巴细胞淋巴细胞第33页/共35页如下图所示细胞是经如下图所示细胞是经HAT培养基筛选出的能产培养基筛选出的能产生单克隆抗体生单克隆抗体A的杂交瘤细胞，关于该细胞中的杂交瘤细胞，关于该细胞中标出的三个基因的开闭状态，下列说法正确的标出的三个基因的开闭状态，下列说法正确的是是A其中有一个是打开的，其中有一个是打开的，即即A抗体基因抗体基因B其中有两个是打开的其中有两个是打开的C其中有一个是打开的，其中有一个是打开的，即即ATP合成酶基因合成酶基因D其中三个都是打开的其中三个都是打开的B第34页/共35页