细胞工程 微生物细胞工程

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1、会计学1细胞工程细胞工程 微生物细胞工程微生物细胞工程菌种选育的目的生产科研提高产量改进质量合成新化合物简化生产工艺适应原材料缩短生产周期改变产品组分了解菌种遗传背景增加菌种遗传标记分析生物合成机制提供分子遗传学研究材料第2页/共33页第3页/共33页第4页/共33页第5页/共33页遗传变异类型遗传变异类型细胞核细胞核细胞质细胞质质粒、噬菌体和质粒、噬菌体和线粒体线粒体DNADNA体外重组体外重组转化或转染进入转化或转染进入宿主细胞中宿主细胞中DNADNA染色体数目（单、双、多染色体数目（单、双、多倍体和非整倍体）倍体和非整倍体）突变突变重组（转化、转重组（转化、转导、接合和融合）导、接合和融

2、合）点突变点突变（DNADNA分子中某一个碱基发分子中某一个碱基发生顺序或数目的变化所致）生顺序或数目的变化所致）区段突变（染色体或区段突变（染色体或DNADNA片段的片段的缺失、易位、倒位、替换、添缺失、易位、倒位、替换、添加等造成的突变）加等造成的突变）第6页/共33页卡介苗的获得卡介苗的获得吡哆醇高产菌株的获得吡哆醇高产菌株的获得第7页/共33页第8页/共33页第9页/共33页诱变育种中的几个原则诱变育种中的几个原则第10页/共33页n抗生素法 青霉素n制霉菌素(抑制甾醇的合成)n菌丝过滤法(适于真菌和放线菌)第11页/共33页检出缺陷型检出缺陷型基本培养基基本培养基基本培养基基本培养基

3、(含菌含菌)基本培养基基本培养基完全或补充培养基完全或补充培养基夹层培养法夹层培养法第12页/共33页限限量量补补充充法法1%蛋白胨蛋白胨大，野大，野小，变小，变检出缺陷型检出缺陷型第13页/共33页逐逐个个检检出出法法完全培养基完全培养基基基本本培培养养基基完完全全培培养养基基检出缺陷型检出缺陷型第14页/共33页培养培养完全培养基完全培养基基本培养基基本培养基影印培养法影印培养法检出缺陷型检出缺陷型第15页/共33页鉴定缺陷型鉴定缺陷型含菌基本培养基含菌基本培养基含营养物滤纸含营养物滤纸片片生长谱法生长谱法(氨基酸、维生氨基酸、维生素、碱基等素、碱基等)第16页/共33页诱变剂浓度处理时间

4、（min）缓冲液终止反应方法效 应备 注亚硝酸（液体）0.010.1M510pH4.5,1M醋酸缓冲液pH8.6,0.07M Na2HPO4溶液脱去碱基中的氨基后引起碱基转换，造成突变有致癌作用，小心操作硫酸二乙酯（液体）o.51%(V/V)孢子1530，菌丝1824hpH7.0磷酸缓冲液Na2S2O3或大量稀释诱变作用较强，杀菌作用较弱，使DNA的碱基和磷酸基发生烷化作用，引起突变。不溶于水，加微量乙醇可溶解亚硝基胍（固体）0.11.0mg/ml，孢子3mg/ml(高浓度及碱性pH)孢子30120,菌丝90120pH6.0, 1M磷酸或醋酸缓冲液或三羟基甲基氨基甲烷-缩苹果酸缓冲液大量稀释p

5、H低于55.5时，同硫酸二乙酯形成亚硝酸，碱性条件下产生重氮甲烷，引起杀菌和变异有致癌作用，小心操作，避光保存，易产生突变群第17页/共33页氮芥（液状物）0.11mg/ml密闭反应510甘氨酸或大量稀释烷化剂，引起染色体畸变与NaHCO3作用即释放N 芥子气糜烂性毒气，小心操作乙烯亚胺（液体）1:1001:100028或低温处理3060稀释烷化剂，高浓度效果较好有剧毒，易燃，可在4冰箱小心操作，避光保存盐酸羟胺（液体）0.15%数小时或生长过程中诱变稀释与胞嘧啶作用产生转换，引起CGAT突变有损健康，注意安全操作氯化锂（白色粉末）0.30.5%加入培养基中，在生长过程中诱变稀释需与紫外线、亚

6、硝酸、硫酸二乙酯等复合处理才有效易溶于水，易潮解5-溴鸟嘧啶（白色粉末）2030mg/ml与孢子悬浮液混合振荡培养，处理一定时间后，稀释涂皿稀释有机体缺乏胸腺嘧啶时较易掺入DNA中引起突变，能诱发正突变与回复突变碱基类似物第18页/共33页第19页/共33页第20页/共33页（3）酶解条件温度、时间、酶成分配比等第21页/共33页第22页/共33页第23页/共33页第24页/共33页第25页/共33页第26页/共33页第27页/共33页第28页/共33页第29页/共33页基插入的频率，从而可用来实现基因的定向进化。第30页/共33页第31页/共33页v难点：设计一个高效的分析和筛选方法第32页/共33页感谢您的观看！感谢您的观看！第33页/共33页