血库作业指导书SOP

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1、 血库作业指导书文件编号：GGYY-1-XK-0110第A版兵文兵文生效日期：2012年6月1日开正医院检验科20 / 20目录序号主题容代号页号血库作业指导书局部1交叉配血凝聚胺法和盐水法GGYY-3-XK-0112ABO血型鉴定正定型和反定型GGYY-3-XK-0273Rh血型鉴定GGYY-3-XK-03114ABO正定型和Rh血型鉴定微柱凝胶检测法微柱凝胶检测法GGYY-3-XK-04155冰冻血浆解冻箱GGYY-3-XK-0420修订页序号文件编号页码需更改的容更改容批准人批准日期123456789101112131415161718192021交叉配血操作规程凝聚胺法和盐水法1.目的

2、本规程规定了红细胞交叉配血操作规程，以确保红细胞交叉配血试验准确无误。2.职责血型室工作人员按照此规程进展红细胞交叉配血操作。3.围本规程适用于红细胞交叉配血。4.原理交叉配血试验系指检查受血者与献血者或供血者的抗原与抗体成分是否相容，以与是否含不规那么抗体等，以保证安全输血。交叉配血分主侧交叉试验即为患者血清与献血者或供血者红细胞的相容性试验；次侧交叉试验，即献血者或供血者血浆与患者红细胞的相容性试验。5.材料与设备5.1抗AB型、抗BA型与抗A、BO型分型血清效价1：128。5.2患者血样。5.3献血者或供血者血液。5.4设备器材:滴管，试管架，试管10mm60mm，离心机。5.5试剂:低

3、离子聚凝胺试剂，抗人球蛋白血清。6、检测环境条件:温度：16-30湿度：25-75。7、方法步骤7.1盐水介质配血法试管法。7.1.1步骤抽取受血者静脉血34ml，后别离血浆，并将红细胞配成2红细胞悬液。将献血者或供血者血样以同样方法别离血浆，并配制2红细胞悬液。取洁净小试管10mm60mm3支，1支标明受血者血浆PS献血者或供血者细胞DC为主侧管，另1支标明献血者或供血者血浆DS受血者细胞PC为次侧管，第3支标明受血者血浆PS受血者细胞PC为自身对照管。按标记主侧管加受血者血浆2滴，加献血者或供血者2红细胞1滴。次侧管加献血者或供血者血浆2滴，加受血者2红细胞悬液1滴。自身对照管加受血者血浆

4、2滴，加受血者红细胞悬液1滴。混匀，以1300g离心15秒。轻轻摇动试管，观察结果。冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反响。7.2聚凝胺配血法7.2.1步骤取试管3支，标主次侧，主侧管加病人血清(血浆)2滴，加供血者35红细胞悬液1滴，次侧管反之。自身对照管同盐水配血法。各加LIM0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。1300g离心15秒，然后把上清夜倒掉。轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，那么必须重做。最后参加Resuspending2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果在3060秒凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异

5、性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，那么为红细胞抗原抗体结合的特异性反响，配血结果不相合。如反响可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。7.3抗人球蛋白配血法7.3.1步骤取试管3支，分别标明主侧、次侧和自身对照，主侧管加受血者血清2滴和献血者或供血者3红细胞盐水悬液1滴，次侧管加献血者或供血者血清2滴和受血者3红细胞悬液1滴，自身对照管同盐水配血法。混合置37水浴致敏30分钟，取出后用生理盐水洗涤3次，倾去上清液。加最适稀释度抗人球蛋白血清2滴， 1300g离心15秒，观察结8.结果分析与报告8.1以上三种配血方法主侧、次侧配血管和自身对照管均无凝集，均无溶血，表示无输血禁忌可以输注。8.2以

6、上三种配血方法主侧和自身对照管均无凝集、均无溶血，而次侧管有一种或三种方法均凝集或均溶血经三洗后可少量输注。8.3以上三种配血方法主侧、次侧配血管均凝集或均溶血，而自身对照均无凝集、均无溶血，表示有输血禁忌不可以输注。8.4以上三种配血方法主侧管均凝集或均溶血，而次侧管和自身对照均无凝集均无溶血，表示有输血禁忌不可以输注。9.考前须知9.1送检血液标本的标识必须与送检单一致，要认真核对。9.2操作过程中必须认真细心，规操作。9.3 交叉配血试验中发现不配合时，首先要考虑受血者和献血者或供血者的ABO定型是否错误，必要时进展Rh血型鉴定与抗体筛检。其次应注意有无特异性同种抗体，或者病人的血清在室

7、温、37或抗球蛋白血清中凝集所有其它红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步做有关试验进展鉴定。9.4受血者和献血者或供血者的样本，在每次输血之后，在26保存7天。如果病人在输血中发生不良反响时，或在输血后数天发生迟发性、溶血性反响时，保存病人和献血者或供血者的血样就有可能要重做或追加试验，必要时从发生溶血性输血反响的病人重新采取血样与输血前病人血样同时检查比拟。9.5聚凝胺法配血时应注意以下问题9.5.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。9.5.2假设病人血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，须多加46滴Ploybrene溶液以中和肝素。9.5.3试剂使用前请回复室温再行操作。9.5.4加做辅助性抗

8、人球蛋白试验，目的是增加检测抗K的敏感性，对检测其他红细胞抗体无帮助。9.5.5在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现。假设有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置于37水浴中，轻轻转动试管混合，并在30秒观察结果。10.支持性文件中国输血技术操作规程血站局部1997版。ABO血型鉴定1. 原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型与O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。

9、可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或/和抗B。2. 标本采集2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。2.2 标本要求：2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主用EDTA K2/dL抗凝。2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，那么主采耳垂血。3. 标本储存：2小时完成实验，室温放置

10、下不超过8小时，4-8保存不超过48小时。4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定6. 试剂6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂6.2 试剂生产厂家：华欣药业生物工程6.3 试剂组成试剂1：抗A分型试剂蓝色，效价1：128，2-8避光保存，室温放置不宜过久。试剂2：抗B分型试剂黄色，效价1：128，2-8避光保存，室温放置不宜过久。试剂3：5A、B与O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取A、 B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。红细胞悬液的配制悬液浓度压积红细胞滴盐水滴25102011112ml400.8ml160

11、.4ml80.2ml4为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。7. 操作步骤7.1 玻片法7.1.1 取清洁玻片1或白瓷板1块，用肥皂水刷洗后晾干，用蜡笔划出小格，并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片或瓷盘上A、B处。分别取等体积待检血样5-10红细胞悬液或全血于抗A试剂和抗B试剂。7.1.2 另取洁净玻片1或白瓷板1块，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。7.1.3 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片或瓷

12、盘并观察血型凝集或溶血反响。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。7.2 试管法7.2.1 取洁净小试管径10mm60mm2支，分别标上A、B字样，用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5红细胞悬液各1滴，混合。7.2.2 另取洁净小试管径10mm60mm3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别参加受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管参加A、B和O型5红细胞悬液1滴，混合。7.2.3 摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象。如肉眼不见凝集，应将反响物倒于玻片

13、上，再以低倍镜检查。8. 结果判断8.1 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。8.2 凝集强度判断标准：4红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。8.3 按下表报告受检者红细胞ABO血型ABO血型正反定型结果分型血清受检者红细胞受检者受检者血清试剂红细胞抗A抗B抗AB

14、血型ABOABA细胞B细胞O细胞9. 临床意义：输血、器官移植与亲子鉴定10. 操作性能：快速简便、特异性强、灵敏度高、重复性好。11 超出围结果处理11.1 红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用37-40的生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞外表附着的导致红细胞凝集的冷集素。11.2 正反定型结果不一致原因11.2.1 分型血清效价太低、亲和力不强。如抗A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。11.2.2 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例那么不适当，使反响不明显，误判为阴性反响。11.2.3 受检者红细胞上抗原位点过少如亚型或抗原性减弱见于白血病或恶性肿瘤以与B类或cis

15、AB等。11.2.4 受检者血清中蛋白紊乱高球蛋白血症，或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。11.2.5 受检者血清中缺乏应有的抗A和抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。11.2.6 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，局部溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。11.2.7 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。11.2.8 血清中有意外抗体，如自身抗I，常引起干扰。11.2.9 老年人血清中抗体水平大幅度下降。11.3 正反定型结果不一致的解决方法：11.3.1 另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。11.3.2 将红细胞

16、洗涤数次，配成2盐水细胞悬液，用抗A、抗B、抗AI，抗AB与抗H做试验可以得到其它有用的信息。11.3.3 对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。11.3.4 用A1、A2、B、O红细胞从自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗I，用O型或ABO相合的脐血红细胞检查。11.3.5 如果试验结果未见凝集，应将细胞与血清试验至少在室温和4放置30min，用显微镜检查核实。11.3.6 如疑为A抗原或B抗原减弱，那么可将受检红细胞与抗A或抗B血清作吸收与放散试验以与受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80HAB分泌型的人有用。11.3.7 如试验结果红细胞呈缗钱状

17、排列，加等渗盐水1滴，混合。往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。11.3.8 如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用以下方法进展鉴别：11.3.8.1 观察细胞与抗A与抗B的凝集强度，与抗A的反响要比抗B的反响强。这种区别用玻片法作试验更为明显。11.3.8.2 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗B不凝集自身红细胞上的类B抗原。11.3.8.3 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。11.3.8.4 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴件杆菌感染有关。12. 方法局限性12

18、.1 分型血清质量性能符合要求，用毕后，应放置冰箱保存，以免细菌污染。12.2 试管、滴管和玻片必须清洁枯燥，防止溶血。12.3 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。12.4 按理IgM抗A和抗B与相应红细胞的反响温度以4为最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般仍在室温20-24进展试验，37可使反响减弱。12.5 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。12.6 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以与缗钱状排列的区别。12.7 判断结果后应仔细核对、记录，防止笔误。12.8 试剂一旦发现浑浊不得使用。12.9 制红

19、细胞悬液时防止自凝现象。13. 参考文献中国人民国卫生部医政司编. 全国临床检验操作规程第二版. 1997，89-92RhD血型鉴定1、实验原理红细胞与抗D抗体发生凝集反响说明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象说明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。2、标本收集和制备无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进展实验。如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。收集在ACD、CPD、CPD2A液中的血液标本,不超过21天仍可进展实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天进展。3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以与其他所需物品：Rh(IgM)血型定型试剂单克隆抗体：血液生物医药XX公司

20、，产品注册号：国药准字S20060018,包装、规格：每盒装有1支试剂，10ml/支，储存要求：存放28，有效期使用。4、操作步骤4.1 玻片法：4.1.1干净玻片上加1滴抗D。4.1.2再参加1滴40%-50%的被检红细胞悬液。该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。4.1.3在圆形的玻片区域中混匀，前后缓慢摇晃玻片。2分钟左右肉眼判读结果。不要将试剂的枯燥与凝集相混淆。4.1.4如果是阴性，需要试管法重做一遍实验。4.2 盐水试管法4.2.1加一滴抗D试剂于预先标记好的试管中4.2.2再加1滴约3%5%红细胞生理盐水悬液于试管中。混匀。4.2.3离心，速度和时间

21、可选择以下二种之一：转速1000rpm，时间一分钟1分钟或3400rpm，时间15秒。4.2.4检查是否溶血溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染，然后轻轻摇晃，是细胞再悬浮起来。4.2.5观察凝集状况，并立即记录结果。必要时可借助显微镜。4.2.6假设是阴性结果，需在37孵育15分钟-30分钟，然后再离心观察结果。结果假设呈阴性需进一步确认是否是弱D。4.3 微量板法U型板4.3.1加一滴抗D试剂于U型底的微孔中。4.3.2再在微孔中一滴约3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中。4.3.3用机械的方法将U型板混匀。4.3.4用板式离心机离心：2000rpm,时间30秒。不同的离

22、心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，使反响板产生清晰的细胞扣与透亮的上清液。4.3.5检测溶血情况溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染。4.3.6结果判断：用机械震荡U型板，再悬浮细胞，根据悬浮情况来判断凝集。阳性反响，出现红细胞凝集，而阴性反响在微孔中会出现均匀细胞悬液。4.3.7可用肉眼和自动化判读结果。4.3.8如果呈阴性，需要试管法重做一遍实验。5、参考值围阳性反响：出现红细胞凝集，为RhD阳性。阴性反响：红细胞不出现凝集，为RhD阴性。6、产品性能指标抗DIgM效价大于等于1：64ccDeeO型7、方法的局限性本实验不能凝集CategoryDVI细

23、胞，对于阴性和弱阳性结果，按有关安全输血规进展确认实验，必要时送血型参比实验室进展确认。8、考前须知8.1 试剂含有0.1%W/V叠氮钠，如果摄入会中毒。8.2 试剂如出现混浊那么不能使用，假设开瓶使用时间较长后，最好用RhD阴性、RhD阳性红细胞检查结果是否符合，以防制品污染、变质失效，而造成错误。与时贴上时间标签，在效期使用。8.3 由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进展显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。8.4 Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反响凝块比拟脆弱，观察反响结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。8.5 对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检

24、验。9、操作性能概要9.1 假阳性反响原因分析：9.1.1试剂中存在具有其他特异性的抗体指不完全抗D抗体，因此，对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份实验。因为使用两份特异性一样的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步实验的必要。9.1.2多凝集红细胞与任何人血清会发生凝集。9.1.3当用未经洗涤的细胞做实验时，试样中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。9.14 试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。9.2 假阴性反响原因分析：9.2.1搞错抗血清每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。9.2.2试管中漏假抗血清在参加细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗

25、血清。9.2.3某种特定的抗血清不能和其他相应抗原的变异型起反响。9.2.4如某种抗血清含有主要对抗Rh复合抗原的抗体，那么可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反响。这在抗C血清最为常见，因为很多抗C血清含有反响性更强的抗Ce成分。9.2.5未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞的比例以与温育的温度和时间不正确。9.2.6抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。10、参考文献：全国临床检验操作规程第3版ABO正定型和Rh血型鉴定微柱凝胶检测法1. 原理ABO血型系统的红细胞遗传表型是根据每个人红细胞上是否存在A和/或B抗原以与血清中相应的抗体来决定的，将人分为四种血型：A型、B型、AB型

26、和O型。红细胞上有A抗原的A型血清中有抗B，红细胞上有B抗原的B型血清中有抗A，红细胞上有A和B抗原的AB型血清中无抗A和抗B，红细胞上无A和B抗原的O型血清中有抗A和抗B。Rh血型系统的鉴定是根据是否存在D抗原来决定的。微柱凝胶检测法是凝胶分子筛技术和免疫学抗原抗体反响相结合的产物，通过调节凝胶葡聚糖的浓度，控制凝胶间隙大小，只允许游离红细胞通过，从而达到别离游离红细胞和凝集红细胞的目的。如果红细胞沉积在凝胶管底部，说明红细胞未发生凝集，即凝集实验阴性；如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，说明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性。2. 标本采集2.1 标本种类：新抽取的抗凝血2.2 标本要求：2.2.

27、1 抗凝剂：EDTA浓度15g/L或枸橼酸钠浓度32g/L抗凝2.2.2 采血量：至少不低于5ml的静脉血参加试管后注意于抗凝剂混匀2.2.3 离心要求：转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟3. 标本储存：待测标本在2-8下的保存时间为48小时4. 标本运输：室温保存5. 标本拒收标准：不可使用溶血或受污染，或者含有凝块的样品。6. 试剂6.1 试剂名称：DianaGel Confirm凝胶卡、DianaSol 1号试剂6.2 试剂生产厂家：Diagnostic Grifols,S.A.西班牙6.3 试剂说明：每DianaGel Confirm凝胶卡由8个微孔管组成A-B-D-Ct

28、rl-A-B-D-Ctrl，微孔管含缓冲液浸泡的微粒筛，加上不同的试剂，试剂为：A：单克隆抗A克隆16243 G2+16247 E6，B：单克隆抗B克隆9621 A8-，D：单克隆抗-D克隆P3290+P335+P361+P321223 B10，质控孔Ctrl:无抗体的胶溶液微孔管做质控。7. 操作步骤7.1 将样品、DianaSol 1号试剂和DianaGel Confirm凝胶卡达到室温；7.2 将新DianaGel Confirm凝胶卡离心；7.3 红细胞悬液的制备： 用Diana 1号试剂来配制2-3的血红细胞稀释液25l压积极红细胞参加1ml的Diana 1号试剂中；7.4 在相应的

29、微孔1-6微管中分别参加25l的2-3的红细胞悬液；7.5 在DianaFuge离心机中离心9min；7.6 判读结果。8. 结果判断模式9. 临床意义：ABO、Rh血型鉴定不合出现溶血性输血反响。10. 操作性能10.1 为国际安全输血检查的推荐方法；10.2 操作简便方便；10.3 可节省样品红细胞和血浆；10.4 灵敏度高、特异性高、重复度好；10.5 客观性好，防止主观判读结果的影响；10.6 检测结果可较长时间保存；10.7 操作者更少接触血液标本。11. 超出围结果处理11.1 红细胞自凝：冷凝集素增高是最为常见的原因。用37-40生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞外表附着的导致红细胞

30、凝集的冷凝集素，可获得可靠的正定型。11.2 正反定型结果不一致原因11.2.1 自身免疫性溶血性贫血引起的红细胞被自身抗体包被；11.2.2 红细胞A或B抗原的弱化；11.2.3 红细胞悬液浓度过浓或过淡；11.2.4 红细胞抗原位点过少或抗原性减弱；11.2.5 病人感染细菌或病毒后，细菌或病毒产生的酶使红细胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血浆中都含有抗T抗体，因此可于正常人血浆中产生凝集反响，正定型实验假阳性；11.2.6 严重感染的病人，其血浆中白细胞过多，堵塞凝胶筛间隙，影响红细胞的沉降，引起假阳性。12 方法局限性：12.1 变质的或受到细菌等物污染的样品，试剂可能会带来错误的

31、阴或阳性结果；12.2 因为储运不当的原因，有时会发现在微管的顶部存有小水珠或在胶泡，在使用类似的凝胶卡前先离心，消除这类问题，如果无法消除，请弃之不用；12.3 如果发现有管胶量不足或干裂，请不要用之；12.4 如果所用的红血球的悬液浓度与建议使用的浓度不符，可能会引起错误结果；12.5 使用非原厂的稀释液来配制红血球悬液可能会导致不良结果；12.6 质控结果必须似阴性，如果是阳性，检测无效，用生理盐水清洗红细胞并重新配制悬液重新检测，如果得到阴性质控结果，那么可以判读结果；12.7 为了防止冷凝集现象的干扰，实验在室温25中进展。不规那么抗体筛选1、原理红细胞血型抗体分子的物理特性与血清学

32、的反响性之间有着直接的关系。可分为IgM和IgG球蛋白抗体IgM为天然抗体，在盐水介质中能直接相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反响。IgG为免疫抗体，常经妊娠或输血等免疫产生。在盐水介质中不能凝集而只能致敏抗原的红细胞，且必须通过特定的方法使致敏红细胞发生凝集。如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝胶或玻璃等方法。2、方法待检血清需要使用多种方法进展鉴定。一般使用盐水法、酶方法、抗球蛋白法、凝聚胺法或凝胶法检测抗体。在检测到弱抗体时，可以利用适当增加血清的细胞比例、适当增加孵育时间、参加低离子强度溶液增效剂或PEG聚氧乙烯乙二醇等方法增加反响的敏感性。不同的抗体在不同的方法和条件下可以有

33、不同的表现。这些特性为判定抗体特异性提供了参考信息。3、试剂3.1、红细胞：选取三个以上的O型红细胞组成一组筛选细胞抗原。3.2、谱细胞：选取八个以上的O型红细胞组成一组谱细胞抗原。4、操作4.1、不规那么抗体的筛选：用筛选细胞1、2、3号，同患者血清在三种介质中盐水、凝聚胺、看球蛋白反响，需做自身细胞对照。4.2、不规那么抗体的鉴定：对筛选阳性的患者应检查其抗体的特异性。用一组谱细胞1-11同患者血清在三种介质中盐水、凝聚胺、抗球蛋白，进展抗体的筛选，需做自身细胞对照。5、结果判断阳性反响：出现红细胞凝集。表示红细胞上有相应抗体存在。阴性反响：出现红细胞不凝集。表示红细胞上没有相应抗体存在。

34、结合谱细胞反响格局，确定抗体特异性。6、临床意义6.1、定血型；6.2、测效价6.3、可能几率：正确的抗体鉴定，必须有充分的谱细胞支持。7、标本要求7.1、按照一般的血液样本采集步骤采集血液标本。该标本可于4或0以下冷冻保存三周或数年。一般不需特殊处理。7.2、应用EDTA抗凝标本，可反响体红细胞被补体致敏的真实情况。抗凝标本也用于直接抗球蛋白试验，并可提供洗脱技术所需的红细胞来源。7.3、需要一管新鲜收集的凝固的血液标本用作血清研究。假设怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试验阳性，其血液标本凝固应保持在37，直到血清被别离出来为之。8、考前须知8.1、仅用于体外诊断8.2、试剂贮藏温度2-8；8.

35、3、试剂有效期两个月。冰冻血浆解冻箱1. 原理KJX-IA型冰冻血浆解冻箱是由加热箱、解冻槽、循环管路、仪器箱等组成。水在加热箱被加热至设定温度，由循环泵送入解冻槽，冰冻血浆放在专用的不锈钢解冻夹中，水的流体静力压力包住血浆袋，与冰冻血浆袋进展热交换后再循环入加热箱加热。循环的水流既能加快冰冻血浆与水的热交换，又能使冰冻血浆快速安全地融解至适合输入人体的温度。由于加热箱与解冻槽别离，加热管与周围的高温水不会破坏血浆的有效成分。2. 性能参数：存水量：32kg 水泵能力：25kg/分钟控制温度：34-37 控制精度：0.5加热功率：1500W 解冻10-18分钟最大化浆量：6袋每袋50-200m

36、l3. 操作规程：3.1解冻：将冰冻血浆装入专用塑料袋后再放入解冻专用夹，置解冻槽，按“启动键进展解冻3.2当发“嘟-一长声提示音时，解冻程序完毕，“完成灯亮，循环泵自动关闭。解冻槽的水流回加热箱，解冻完成4. 维护保养与考前须知：4.1每月对水箱温度进展一次检测校正，其方法为：4.1.1按住面板上的“1”档键开机，循环泵随即打开，水箱水上升至解冻槽，温度窗口显示即时水温。4.1.2用计量准确的水银温度计测量解冻槽的水温，假设温度不一致可按温度“十一键假设干次直至两者温度一样。4.1.3最后按一次“存储键确认即完成校正。4.2浆袋破损或水有污物应与时清洗，方法为：4.2.1非解冻状态下，按“清洗键，机器进入清洗状态。温度显示窗口显示“清洗符Q，并有“清洗图案提示。4.2.2时间窗口显示清洗遍数2，增加或减少清洗遍数按“清洗键即可围1-3遍4.2.3清洗完成时，时间窗口显示“End。