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1、3 结果3.1 hALR 对纯化 T 淋巴细胞的影响FCM佥测结果显示，纯化前和纯化后细胞相比，PE标记的抗人CD3+TS胞的纯度达到99%可以用于后续的实验。培养 60h后，与Normal组相比，ConA组对 纯化的T淋巴细胞无促进增殖作用 P0.05;与ConA组、hALR组相比，ConA+hALR 组对T细胞无抑制作用P0.05; hALR组对T细胞既无促进增殖作用也无抑制作 用，图 1。图 1 流式检测T 淋巴细胞增殖情况Fig.1 Flow cytometry of proliferation of T cell3.2 hALR对纯化T细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg胞比
2、例的影响60h时，流式结果显示，在 CD4+TM胞基础上分析CD25?口 Foxp3的比例情 况。与Normal组相比，ConAffl不能促进CD4+TB胞中CD25+Foxp3细胞比例增力口 P0.05;与 ConAffl、hALRffl相比，ConA+hALRfi也不能促进 CD4+TM胞中 CD25+Foxp3+ffl胞比但J增力口 P0.05; hALR组对 CD4+TM胞中 CD25+Foxp3细胞比例 既无促进增加作用也无抑制作用，图2。图2流式检测纯化T细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg胞比例Fig.2 Flow cytometry of CD4+CD25+Foxp3+
3、Treg in purifed T cells3.3 hALR 对纯化 T 细胞上清中细胞因子水平的影响60h时，ELISA检测上清中TGF-0 1的水平。结果显示：与 Normal组相比， ConA组不能刺?上清中TGF-0 1分泌增加P0.05;与ConA组、hALR组相比，ConA+hALR&上清中TGF-0 1的分泌也无明显增加 P0.05; hALR&对上清中TGF-B 1既无促进分泌增加作用也无抑制分泌作用，见表 1和图3。表1纯化T淋巴细胞上清中TGF-B 1的浓度（pg/ml）Table 1 The Concentration of TGF- 0 1 in the supern
4、atant of purifed T cellsGroupTGF-B 1 (pg/ml)Normal49.035.14回49.28ConA20.16回57.20ConA+hALR14.51回36.58hALR2.16回图3 各组纯化T淋巴细胞上清中TGF-B 1的浓度Fig3 The Concentration of TGF-B 1 in the supernatant of in purifedT cells60h时，ELISA检测上清中IL-10的水平。结果显示：与 Normal组相比，ConA组不能刺?上清中IL-10分泌增加P0.05;与ConA组、Normal组相比， ConA+hA
5、LR&上清中IL-10的分泌也无明显增加 P0.05; hALR组对上清中IL-10 既无促进分泌增加作用也无抑制分泌作用，见表2和图4。表2 纯化T淋巴细胞上清中IL-10的浓度（pg/ml）Table 2 The Concentration ofIL-10in the supernatant of in purifedT cellsGroupIL-10 (pg/ml)Normal29.47可0.11ConA29.210.02可ConA+hALR29.300.28可hALR29.270.11可图4 各组纯化T淋巴细胞上清中IL-10的浓度Fig4 The Concentration of I
6、L-10 in the supernatant of in purifed Tcells3.3 hALR对PBMC曾殖情况的影响各组细月6培养24h, 48h, 60h后，EdU检测结果显示：Normal组由于未经刺 激，PBMC：有增殖，在三个时间点均未见增殖；ConAffl经刺激后PBMC曾殖明显，48h和60h促增殖作用显著，与相应 Normal组相比P0.01; ConA+hALR1能明显 抑制PBMC曾殖，48h和60h抑制作用明显，与相应 ConAffl、hALR组相比 P0.01; hALRfflXt PBMCE无促进增殖作用也无抑制作用。ConA组促进细胞增殖作 用随时间增加而
7、逐渐增强，48h和60h与24h相比，有统计学差异P0.01; ConA+hALR&Xt PBMC勺抑制作用随时间增加而逐渐增强，48h和60h与24h相比， 有统计学差异P0.05, #与ConAffl、hALRffl相比P0.05* as compared with Normal group P0.05, # as compared with ConA group and hALR groupP0.05注：*与Normal组相比分别是 P0.01, #与ConAffl、hALRffl相比P0.01* as compared with Normal group P0.01, # as com
8、pared with ConA group and hALR group P0.013.4 hALR对PBMC Treg细胞比例的影响各组细月fi培养24h、48h、60h后，流式检测 CD4+CD25+Foxp3+Treg3胞，结 果显示：在CD4+TM胞基础上分析，Normal组由于未经刺激，CD25+Foxp3细胞比 例未见增加，在三个时间均未见细胞比例变化；ConA组经刺激后能增加CD25+Foxp3+ffl胞比例，48h和60h作用明显，与相应 Normal组相比P0.01、 P0.05; ConA+hALR!能更显著增加 CD25+Foxp3+ffl胞比例，48h和60h作用更明
9、显，与相应ConM、 hAL的相比P0.01; hALRfflX寸CD25+Foxp3细胞比例既无促 进增加也无减少作用。ConAffl增加CD25+Foxp3+Tre学田胞比例随时间增力口而逐渐 增强，48h和60h与24h相比，有统计学差异（P0.01） ; ConA+hALR&增加 CD25+Foxp3+Tre切胞比例随时间增力口而逐渐增强，48h和60h与24h相比，有统 计学差异（P0.05; ConA+hALR&也不能降低CD86s达。48h时，ConA&能明显降低CD8吩子的表 达，与Normal组相比P0.05。60h时，ConAffl能明显降低CD8阴子的表达，与Normal
10、组相比 P0.01; ConA+hALRfi能更显著抑制 CD86的表达，与ConAffl、 hALR组相比 P0.01 ，图 7。3.6 hALR对PBMCt清中细胞因子分泌的影响各组细月fi培养24h、48h、60h后，TGF-0 1结果显示：Normal组由于未经刺 激，上清中TGF-B1浓度较低，三个时间点均未见浓度变化；ConA组经刺激后能增加上清中TGF-”浓度，48h和60h增力口明显，与相应Normal组相比P0.01; ConA+hALR&能更显著增力口上清中TGF-0 1浓度，48h和60h作用明显，与相应 ConAS、hALR组相比P0.01; hALR组上清中TGF-B
11、 1分泌较Normal组稍有增 加，但在三个时间点却均未见浓度变化。ConA组增加上清中TGF-B1浓度随时间增加而逐渐增强，48h和60h与24h相比，有统计学差异P0.01; ConA+hAL初增 加上清中TGF-B 1浓度随时间增加而逐渐增强，48h和60h与24h相比，有统计学 差异 P0.01 ，表 3、图 8。表3 PBMCaS胞上清中TGF-B 1的浓度（pg/ml ）Table 3 The Concentration of TGF- 0 1 in the supernatant of group24h48h60h49.0347.7758.43Normal7.90回10.21J1
12、0.49回73.63324.26559.43ConA24.35回32.59*$J10.97*$同ConA+hALR82.52间737.25J1016.21同19.324.29*#&41.37*#&61.1352.9065.23hALR17.12回3.00J14.17同$ as compared with ConA group of 24h P0.01,&as compared with ConA+hALR group of 24h P0.01,*as compared with Normal group P0.01 ,#as compared with ConA group and hALR group P0.01
调节性T细胞在肝再生增强因子免疫抑制机制中的作用研究
